李 明， 李建光, 王東東， 丁文歡， 周曉英

(新疆醫(yī)科大學(xué)1第六附屬醫(yī)院藥劑科， 烏魯木齊 830002, 2藥學(xué)院, 3中醫(yī)學(xué)院, 烏魯木齊 830011)

牛至為唇形科植物牛至(OriganumvulgareL.)的干燥全草，維吾爾語(yǔ)名為“尖比力”， 別名通常有土香薷、小葉薄荷、止痢草等，夏秋二季花開(kāi)時(shí)采收，除去雜質(zhì)，曬干。維吾爾醫(yī)認(rèn)為牛至能消散寒氣，開(kāi)通濕阻，清滌異常體液，利尿通經(jīng)，增強(qiáng)營(yíng)養(yǎng)吸收，用于粘稠異常體液性咳喘、感冒、頭痛、脈絡(luò)閉阻性胸悶氣短、形體消瘦、心煩神疲、食欲不振、尿少肢腫[1]。牛至在新疆主要分布于天山、阿勒泰山、準(zhǔn)噶爾西部的山地草甸、林緣、河谷、亞高山草原及河谷[2]，以及河南、甘肅、湖北、陜西等省區(qū)，國(guó)外主要分布于地中海地區(qū)、中亞、北非、北美等地。牛至性涼，味辛，無(wú)毒，有清熱解表、利水消腫的功效，主治中暑、感冒、頭痛身痛、急性胃腸炎、腹痛吐瀉、水腫等[3]。

牛至含有揮發(fā)油類、黃酮類、三萜類、有機(jī)酸類等化學(xué)成分[4-5]。薄層色譜定性實(shí)驗(yàn)表明，牛至中含有迷迭香酸，且含量較高。迷迭香酸具有多方面的藥理作用，如清除自由基、抗炎和免疫調(diào)節(jié)、抗血栓和抗血小板凝集、抗病毒和抗菌、抑制腎小球系膜細(xì)胞的增殖、抗抑郁等[6]。本研究以迷迭香酸為指標(biāo)成分，參考文獻(xiàn)[7-8]，采用高效液相色譜法測(cè)定其在牛至中的含量，為提高牛至的藥品標(biāo)準(zhǔn)提供定量的數(shù)據(jù)支持。

1 儀器與試藥

1.1儀器高效液相色譜儀LC-6AD、CBM-20A色譜工作站、SPD-20A型紫外檢測(cè)器、 SIL-20A型自動(dòng)進(jìn)樣器、CTO-10ASvp型柱溫箱(日本島津公司)，XS105型電子天平(德國(guó)梅特勒-托利多公司)。

1.2樣品與試劑甲醇為色譜純，其他均為分析純，水為娃哈哈飲用純凈水，迷迭香酸對(duì)照品(sigma-ALDRICH，批號(hào)：CFAE-536954-5G)。牛至全株采集于新疆昌吉、伊犁地區(qū)，由新疆維吾爾自治區(qū)中醫(yī)醫(yī)院李永和主任藥師鑒定為唇形科植物牛至(OriganumvulgareL.)，陰干，粉碎，即得供試樣品。

2 方法與結(jié)果

2.1色譜條件色譜柱: Kromasil C18柱(4.6 mm ×150 mm，5 μm)，流動(dòng)相：甲醇-1.5%乙酸水(38∶62)，檢測(cè)波長(zhǎng)330 nm，柱溫25℃，流速1.0 mL/min。在上述色譜條件下，迷迭香酸與供試品中其他組分色譜峰可達(dá)到基線分離，分離度良好，迷迭香酸峰理論塔板數(shù)不低于2 000，迷迭香酸及牛至供試樣品色譜圖見(jiàn)圖1。

A: 迷迭香酸對(duì)照品;

B:牛至供試樣品(a:迷迭香酸對(duì)照品)

2.2對(duì)照品溶液的制備精密稱取11.07 mg迷迭香酸對(duì)照品，用甲醇定容于25 mL棕色量瓶中，分別取1.5、3、4.5、6、7.5 mL，用甲醇定容于10 mL棕色量瓶中，制成一系列不同濃度的溶液。

2.3供試品溶液的制備精密稱定干燥牛至藥材粉末0.5 g，置于50 mL具塞錐形瓶中，加入25 mL甲醇，稱定重量，浸泡30 min，超聲提取(功率150 W, 頻率60 KHz)30 min，取出放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，0.45 μm微孔濾膜濾過(guò)，即得供試品溶液。

2.4線性關(guān)系考察精密吸取迷迭香酸對(duì)照品溶液5 μL進(jìn)樣分析，以對(duì)照品濃度(X，mg/mL)為橫坐標(biāo)，以峰面積積分值(Y)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得迷迭香酸線性回歸方程為Y=13 602 333.63X-52 022.80(r=0.999 9)，結(jié)果表明，迷迭香酸進(jìn)樣量在0.332 1～1.660 5 μg范圍內(nèi)，峰面積與進(jìn)樣量呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

2.5精密度試驗(yàn)精密吸取迷迭香酸對(duì)照品溶液5 μL，連續(xù)進(jìn)樣6 次，結(jié)果齊迷迭香酸峰面積RSD值為1.15%，表明精密度較好。

2.6穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一牛至供試品溶液(3號(hào)樣)，分別于0、2、4、6、8、10、12、24 h進(jìn)樣5 μL測(cè)定，結(jié)果迷迭香酸峰面積的RSD值為2.19 %，表明供試品溶液在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定，峰面積沒(méi)有在考察時(shí)間內(nèi)呈現(xiàn)下降趨勢(shì)。

2.7重復(fù)性試驗(yàn)精密稱取牛至藥材粉末6 份(6號(hào)樣)，按“供試品溶液的制備”項(xiàng)下方法制成供試液，并在上述色譜條件下進(jìn)樣5 μL，測(cè)定迷迭香酸峰面積，計(jì)算含量。結(jié)果供試品中迷迭香酸含量的RSD值為1.69 %，表明實(shí)驗(yàn)方法的重復(fù)性較好。

2.8加樣回收率試驗(yàn)分別精密稱取6份已知含量牛至藥材粉末(6號(hào)樣)0.25 g，分別置于50 mL具塞錐形瓶中，精密稱取迷迭香酸對(duì)照品21.91 mg置25 mL量瓶中，用甲醇定容至刻度。每個(gè)具塞錐形瓶中分別準(zhǔn)確對(duì)照品4 mL和甲醇21 mL，按“供試品溶液的制備”項(xiàng)下方法制成供試液，在上述色譜條件下進(jìn)樣5 μL測(cè)定，結(jié)果平均回收率為98.96%，RSD=1.09%，見(jiàn)表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.9樣品含量測(cè)定精密吸取供試品溶液5 μL分別注入液相色譜儀，在上述色譜條件下測(cè)定，每樣平行測(cè)定5份，計(jì)算樣品中迷迭香酸的含量，結(jié)果10個(gè)產(chǎn)地的迷迭香酸含量為8.13～15.74 mg/g，見(jiàn)表2。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果(n=5)

3 結(jié)論

牛至油是牛至的主要有效成分，具有抑菌殺菌作用，近年來(lái)多用于飼料添加劑。但本實(shí)驗(yàn)測(cè)定的10批樣品均產(chǎn)自新疆，揮發(fā)油提取實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，揮發(fā)油含量極少，不適宜作為提高藥品標(biāo)準(zhǔn)的定量指標(biāo)；而有機(jī)酸類成分迷迭香酸在所有批次樣品中均有檢出，含量為8.13～15.74 mg/g，且具有顯著的生物活性，故將迷迭香酸定為定量檢測(cè)指標(biāo)。

高效液相色譜法測(cè)定牛至中的迷迭香酸，樣品處理簡(jiǎn)單，分離度較好，測(cè)定迅速，為牛至藥材的開(kāi)發(fā)提供依據(jù)。

參考文獻(xiàn):

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì). 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn):維吾爾藥分冊(cè)[S].烏魯木齊:新疆科技衛(wèi)生出版社, 1999.

[2] 新疆植物志編輯委員會(huì). 新疆植物志:第四卷[M]. 烏魯木齊:新疆科學(xué)技術(shù)出版社, 2004:333．

[3] 孫麗娟,劉紅兵,許漢林,等.湖北產(chǎn)牛至藥材中香荊芥酚和麝香草酚的含量測(cè)定[J].中藥材, 2005, 28(7):562-563.

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[6] 吳建章,郁建平,趙東亮,等. 迷迭香酸的研究進(jìn)展[J].天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā), 2005, 17(3):383-388.

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[8] 關(guān)新莉,李潔,王東東,等. HPLC 法測(cè)定異葉青蘭中迷迭香酸的含量[J].新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào), 2013, 36(9):1284-1286.