張小紅 王紅民

非小細(xì)胞肺癌中 EGFR 基因突變和擴(kuò)增的檢測及其臨床意義

張小紅 王紅民

目的 探討非小細(xì)胞肺癌中 EGFR 基因突變和擴(kuò)增的檢測方法及其臨床意義。方法 收集 200 例肺癌組織 , 通過聚合酶鏈反應(yīng)擴(kuò)增 DNA 直接測序法檢測肺癌 DNA 中 EGFR 基因突變和擴(kuò)增 ,重點(diǎn)是檢測肺癌中 EGFR 外顯子 19～21 在性別不同中的突變和擴(kuò)增情況以及在分化不同的癌癥中的突變和擴(kuò)增情況 , 同時(shí)分析其在臨床中的意義。結(jié)果 經(jīng)聚合酶鏈反應(yīng)擴(kuò)增 DNA 直接測序法檢測發(fā)現(xiàn) ,非小細(xì)胞肺癌中 EGFR 基因總的突變和擴(kuò)增數(shù)為 68 例 , 突變和擴(kuò)增率為 34%, 肺癌中 EGFR 外顯子 20無明顯突變和擴(kuò)增情況發(fā)生 , 外顯子 19 突變和擴(kuò)增情況最多有 49 例 , 占總數(shù)的 72.1%, 外顯子 21 突變和擴(kuò)增情況較多有 19 例 , 占總數(shù)的 27.9%, 其中女性肺癌患者的 EGFR 基因突變和擴(kuò)增情況多于男性肺癌患者 , 同時(shí)基因突變和擴(kuò)增在腺癌和腺鱗混合癌中發(fā)生情況最多 , 其他次之。結(jié)論 非小細(xì)胞肺癌中EGFR 基因突變和擴(kuò)增多發(fā)生于女性肺癌患者 , 其中又以外顯子 19 和 21 發(fā)生較多 , 多發(fā)生伴有腺癌和腺鱗混合癌的情況下 , 同時(shí)聚合酶鏈反應(yīng)擴(kuò)增 DNA 直接測序法技術(shù)穩(wěn)定可靠 , 為臨床研究提供有效的依據(jù)。

非小細(xì)胞肺癌 ；基因突變 ；基因擴(kuò)增

肺癌是我國發(fā)病率和死亡率增長最快、對(duì)人群健康和生命威脅最大的惡性腫瘤之一［1］。肺癌在組織學(xué)上可以分為非小細(xì)胞肺癌 (NSCLC)和小細(xì)胞肺癌 (SCLC)兩大類 , 又以非小細(xì)胞肺癌占肺癌總發(fā)生率的 85%［2］。本次研究就探討非小細(xì)胞肺癌中EGFR基因突變和擴(kuò)增的檢測方法及其臨床意義,將收集的 200 例組織進(jìn)行檢測 , 現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資 料 選擇 本院 2012年 1月 ~2013年 6月收集的非小細(xì)胞肺癌手術(shù)后的肺癌組織 200例作為研究對(duì)象 , 男124例 , 女 76例 , 平均年齡 (56±6.3)歲 , 其中腺癌患者 64例 ,鱗癌患者 73例 , 腺鱗混合型癌患者 41例 , 其他癌患者 22例。

1. 2 方法 對(duì) 肺 癌 組 織 中 的 DNA采 用 DNA聚 合 酶 進(jìn) 行PCR擴(kuò)增 , 反應(yīng)液里含有 DNA4 μl, 緩沖液 5 μl×10, dNTP 5 μl, 2.5 mmol/L, 上游和下游引物均 1 μl, 20 mmol/L, DNA聚合酶 1 μl, 使用 DEPC-H2O補(bǔ)充至 50 μl, PCR反應(yīng)條件為 5 min, 95℃變性 , 隨后在 95℃、72℃和 57℃進(jìn)行 40個(gè)循環(huán) , 每個(gè)循 環(huán) 30 s, 隨 后 在 72℃ 時(shí) 延 伸 7 min, 擴(kuò) 增 產(chǎn) 物 經(jīng) 過 1.6%, 100 V的瓊脂糖凝膠電泳 30 min, 隨后進(jìn)行 EB染色攝片 , 將陽性擴(kuò)增條帶經(jīng)柱層析分離純化后 , 在 ABI 3700型的 DNA序列分析儀上進(jìn)行基因測序。

1. 3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用 SPSS11.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析 , 計(jì)數(shù)資料用率表示 , 采用χ2檢驗(yàn) , P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2. 1 肺癌突變和擴(kuò)增情況 非小細(xì)胞肺癌中 EGFR基因總的突變和擴(kuò)增數(shù)為 68例 , 突變和擴(kuò)增率為 34%。

2. 2 不同性別中的基因突變和擴(kuò)增情況 觀察發(fā)現(xiàn) , 女性肺癌患者的EGFR基因突變和擴(kuò)增情況要多于男性肺癌患者 ,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＜0.05)。詳情見表1。

2. 3 分化不同肺癌中基因突變和擴(kuò)增情況 非小細(xì)胞肺癌中 EGFR基因突變和擴(kuò)增情況在腺癌和腺鱗混合癌發(fā)生的情況較多。詳情見表2。

表1 不同性別中的基因突變和擴(kuò)增情況 (n, %)

表2 分化不同肺癌中基因突變和擴(kuò)增情況 (n, %)

3 討論

目前對(duì)于治療肺癌的有效措施有限 , 治療肺癌的有效率較低 , 雖然化療和放療的效果較好 , 但是給予肺癌患者的負(fù)擔(dān)太大 , 甚至帶來嚴(yán)重的毒副作用 , 所以新的有效治療方法是臨床研究的方向 , 近些年 , 醫(yī)學(xué)界的專家把重點(diǎn)放在了分子靶向治療上 , 尤其是其中的 EGFR 為靶點(diǎn)的分子靶向治療 ,希望可以從中尋找到治療非小細(xì)胞肺癌的關(guān)鍵 , 通過上述研究得出男性肺癌患者的外顯子 19 突變和擴(kuò)增例數(shù)為 21 人 ,外顯子 21 突變和擴(kuò)增例數(shù)為 11 人 , 兩種外顯子的突變和擴(kuò)增占男性總?cè)藬?shù)的 25.8%, 而女性肺癌患者的外顯子 19 突變和擴(kuò)增例數(shù)為 28 人 , 外顯子 21 突變和擴(kuò)增例數(shù)為 8 人 , 兩種外顯子的突變和擴(kuò)增占女性總?cè)藬?shù)的 47.4%。與董強(qiáng)剛 ,韓寶惠 , 黃進(jìn)肅等［3］的 176 例非小細(xì)胞肺癌的 EGFR 基因突變分析研究的結(jié)果基本一致 , 為臨床提供理論依據(jù)。EGFR蛋白屬于 ErbB 家族 , 具有受體酪氨酸激酶活性［4］。編碼酪氨酸激酶區(qū)的是第 19～21 號(hào)外顯子［5］。所以通過聚合酶鏈反應(yīng)擴(kuò)增 EGFR 中的 19～21 號(hào)外顯子 , 在使用 DNA 測序法檢測基因突變和擴(kuò)增的情況 , 是可以作為醫(yī)務(wù)工作者治療肺癌的病理指標(biāo) , 值得進(jìn)一步探討研究。

［1］趙靜 ,朱焱 ,張麗 ,等 .非小細(xì)胞肺癌表皮生長因子受體基因突變檢測及其臨床意義 .中華病理學(xué)雜志 , 2011,40(10):671-674.

［2］劉紅雨 ,李穎 ,陳鋼 ,等 .187 例非小細(xì)胞肺癌中 EGFR 基因突變和擴(kuò)增的檢測及其臨床意義 .中國肺癌雜志 , 2009, 12(12): 1219-1228.

［3］董強(qiáng)剛 ,韓寶惠 ,黃進(jìn)肅 .等 . 176 例非小細(xì)胞肺癌的 EGFR 基因突變分析 .中華腫瘤雜志 , 2006,28(9):686-690.

［4］姜斌 ,朱冠山 ,劉峰 .等 .中國人非小細(xì)胞肺癌 EGFR 基因突變的研究 .上海第二醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào) , 2005,25(11):1148-1150.

［5］董強(qiáng)剛 .上皮生長因子受體家族與肺癌的分子靶向治療 .中華腫瘤雜志 , 2004,24(2):93-95.

2014-04-16］

450052 鄭州大學(xué)附屬鄭州中心醫(yī)院 /鄭州市中心醫(yī)院呼吸內(nèi)科 (張小紅 )；鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院呼吸內(nèi)科 /河南省高等學(xué)校臨床醫(yī)學(xué)重點(diǎn)學(xué)科開放實(shí)驗(yàn)室 (王紅民 )