王亞紅　祝波

摘要：以木犀草素、槲皮素、芹黃素為對(duì)照品，以總黃酮提取率為考察指標(biāo)，采用單因素和正交試驗(yàn)優(yōu)化狼把草總黃酮的微波提取工藝，確定乙醇體積分?jǐn)?shù)75%、微波功率500 W、提取時(shí)間35 min、料液比1 g ∶20 mL為狼把草總黃酮最佳提取工藝條件；該條件下總黃酮平均提取率為0.507 2%。

關(guān)鍵詞：狼把草；總黃酮；微波輔助提??；正交試驗(yàn)

中圖分類號(hào)： R284.2 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號(hào)：1002-1302（2014）04-0235-02

收稿日期：2013-08-29

基金項(xiàng)目：吉林化工學(xué)院項(xiàng)目（編號(hào)：吉化院合字第2012第061號(hào)）。

作者簡(jiǎn)介：王亞紅（1970—），女，吉林吉林人，碩士，教授，從事天然產(chǎn)物研究開發(fā)。E-mail：wangyahong99999@163.com。狼把草（Bidens tripartita L.）為菊科鬼針草屬植物，別名鬼叉、接力草、針線包等，廣泛分布于我國(guó)大部分地區(qū)。狼把草藥用歷史悠久，其藥用價(jià)值在《本草拾遺》《本草綱目》等文獻(xiàn)中多有記載[1]，主要功效為養(yǎng)陰益肺、清利濕熱，主治氣管炎、肺結(jié)核、咽喉炎及丹毒、癬瘡等，其藥用主要有效成分為黃酮化合物木犀草素、槲皮素、芹黃素及糖苷[2]。黃酮類化合物是一種生理活性物質(zhì)，具有抗病毒、抗炎、抗癌防癌、降低血壓、防止動(dòng)脈粥樣硬化和抗氧化、防衰老等作用[3-8]，該化合物已成為國(guó)內(nèi)外醫(yī)藥界研究的熱門話題，是一類具有廣泛開發(fā)前景的天然藥物[9]。本試驗(yàn)以總黃酮提取率為指標(biāo)，采用單因素和正交試驗(yàn)，優(yōu)選狼把草的微波提取工藝，為狼把草的綜合利用及相關(guān)領(lǐng)域的深入研究提供依據(jù)。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1儀器與設(shè)備微波輔助萃取儀（MAS-Ⅱ，上海新儀器微波化學(xué)科技有限公司）；高效液相色譜儀（LC-20AT，日本島津）；紫外檢測(cè)器（SPD-20A，日本島津）；色譜柱（Shim-pack VP-ODS，日本島津）；超聲波清洗器（AS3120，天津奧特賽恩斯）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（RE-52A，上海亞榮生化儀器廠）；電子分析天平（FA2004N，上海精密科學(xué)儀器有限公司）。

1.1.2試驗(yàn)材料狼把草購(gòu)自吉林市江城大藥房，經(jīng)鑒定為狼把草（Bidens tripartita L.）干燥全草；木犀草素、槲皮素、芹黃素由北京捷誠(chéng)科遠(yuǎn)化工技術(shù)研究院提供；無水甲醇、乙酸均為分析純。

1.2狼把草總黃酮含量測(cè)定

1.2.1色譜條件色譜柱為C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇 ∶水 ∶乙酸為75 ∶30 ∶0.4，用前微孔濾膜過濾并經(jīng)超聲脫氣處理；檢測(cè)波長(zhǎng)為254 nm，流速為0.7 mL/min；柱溫為室溫；測(cè)試樣品每次進(jìn)樣量為10 μL。

1.2.2對(duì)照品溶液的制備與線性試驗(yàn)精密稱取干燥至恒重的木犀草素、槲皮素、芹黃素標(biāo)準(zhǔn)品，用流動(dòng)相溶解并定容制成60.5、30.3、26.3 mg/mL的對(duì)照品溶液；分別精密吸取1、3、5、7、9 mL，用流動(dòng)相定容至10 mL，用高效液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定。以峰面積（A）對(duì)濃度C進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為：木犀草素A=7.65×103C+685，r=0.999 7，濃度范圍605～60.59 μg/mL；槲皮素A=2.02×104C-1.65×103，r=0999 8，濃度范圍3.03～30.39 μg/mL；芹黃素A=5.61×103C+395，r=0.999 7，濃度范圍2.63～26.39 μg/mL。

1.2.3供試品溶液的制備與測(cè)定準(zhǔn)確稱取5.0 g狼把草生藥粉末于三頸瓶中，加入一定量75%乙醇溶液作溶劑，在設(shè)定的試驗(yàn)參數(shù)下進(jìn)行微波萃取，抽濾，濾渣加入等量75%乙醇提取第2次；合并2次提取液旋蒸，所得溶液放入坩堝，在70 ℃水浴鍋中水浴蒸發(fā)；在烘箱中干燥至恒重得干浸膏，取一定量干浸膏用流動(dòng)相溶解定容，用高效液相色譜儀測(cè)定狼把草中木犀草素、槲皮素、芹黃素的含量。

1.2.4總黃酮提取率計(jì)算加和每次提取得到浸膏的木犀草素、槲皮素、芹黃素3類黃酮化合物質(zhì)量作為浸膏中總黃酮質(zhì)量。狼把草總黃酮提取率計(jì)算公式為：狼把草總黃酮提取率=浸膏中總黃酮質(zhì)量（g）/所用狼把草粉末量（g）×100%。

1.3精確度與穩(wěn)定性試驗(yàn)

1.3.1精密度試驗(yàn)精密吸取木犀草素、槲皮素、芹黃素3個(gè)對(duì)照品溶液，按照色譜條件連續(xù)進(jìn)樣5次，求得相應(yīng)含量，并計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD。

1.3.2重現(xiàn)性試驗(yàn)在平行條件下，稱取6份狼把草藥粉各5.0 g，測(cè)定樣品溶液中木犀草素、槲皮素、芹黃素含量，并計(jì)算RSD。

1.3.3穩(wěn)定性試驗(yàn)取供試品溶液，用高效液相色譜儀每隔2 h測(cè)定1次樣品溶液中木犀草素、槲皮素、芹黃素含量，并計(jì)算RSD。

1.3.4加樣回收試驗(yàn)取6份1.5 g狼把草，加入木犀草素、槲皮素、芹黃素標(biāo)準(zhǔn)品適量，按照供試樣品提取條件，提取并制備相應(yīng)溶液，測(cè)定木犀草素、槲皮素、芹黃素含量，并計(jì)算RSD。

1.4單因素試驗(yàn)

1.4.1料液比設(shè)定微波功率700 W、微波溫度70 ℃、提取時(shí)間30 min、乙醇體積分?jǐn)?shù)75%，分別按1 ∶10、1 ∶15、1 ∶20、1 ∶25、1 ∶30（g ∶mL）的料液比進(jìn)行微波萃取。

1.4.2微波功率設(shè)定微波溫度70 ℃、提取時(shí)間30 min、料液比為1 g ∶20 mL、乙醇體積分?jǐn)?shù)75%，分別按400、500、600、700、800 W的微波功率進(jìn)行微波萃取。

1.4.3乙醇體積分?jǐn)?shù)設(shè)定微波功率600 W、微波溫度 70 ℃、提取時(shí)間30 min、料液比1 g ∶20 mL，分別加入體積分?jǐn)?shù)為45%、55%、65%、75%、85%的乙醇進(jìn)行微波萃取。endprint

1.4.4微波時(shí)間設(shè)定微波功率600 W、微波溫度70 ℃、料液比1 g ∶20 mL、乙醇體積分?jǐn)?shù)75%，分別微波萃取20、25、30、35、40 min。

1.5正交試驗(yàn)

3小結(jié)

本試驗(yàn)采用微波工藝提取狼把草黃酮，該方法加熱耗能少，成本低，簡(jiǎn)單方便。優(yōu)化所得最佳提取工藝條件為：乙醇體積分?jǐn)?shù)75%、微波功率500 W、提取時(shí)間35 min、料液比 1 g ∶20 mL、微波溫度70 ℃，該優(yōu)化條件下的平均提取率為0507 2%。該研究結(jié)果對(duì)狼把草總黃酮在藥物、食品等領(lǐng)域的深入開發(fā)提供了一定參考。

參考文獻(xiàn)：

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[2]王天勇，南鳳仙，楊文遠(yuǎn). RP-HPLC法同時(shí)測(cè)定狼把草中的木犀草素、槲皮素和芹黃素[J]. 寧夏大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，1996，17（4）：18-21.

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[5]才金玲，單群，陸軍，等. 大豆黃酮對(duì)衰老小鼠腦組織的保護(hù)作用[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，40（6）：289-291.

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[8]張海生，陳錦屏. 蜂蛹黃酮的提取及體外抗氧化作用的研究[J]. 食品科學(xué)，2008，29（2）：158-162.

[9]尹愛群，穆惠軍，江雪欣，等. 黃酮類化合物研究進(jìn)展[J]. 中國(guó)藥事，2005，19（11）：50-53.endprint

1.4.4微波時(shí)間設(shè)定微波功率600 W、微波溫度70 ℃、料液比1 g ∶20 mL、乙醇體積分?jǐn)?shù)75%，分別微波萃取20、25、30、35、40 min。

1.5正交試驗(yàn)

3小結(jié)

本試驗(yàn)采用微波工藝提取狼把草黃酮，該方法加熱耗能少，成本低，簡(jiǎn)單方便。優(yōu)化所得最佳提取工藝條件為：乙醇體積分?jǐn)?shù)75%、微波功率500 W、提取時(shí)間35 min、料液比 1 g ∶20 mL、微波溫度70 ℃，該優(yōu)化條件下的平均提取率為0507 2%。該研究結(jié)果對(duì)狼把草總黃酮在藥物、食品等領(lǐng)域的深入開發(fā)提供了一定參考。

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1.4.4微波時(shí)間設(shè)定微波功率600 W、微波溫度70 ℃、料液比1 g ∶20 mL、乙醇體積分?jǐn)?shù)75%，分別微波萃取20、25、30、35、40 min。

1.5正交試驗(yàn)

3小結(jié)

本試驗(yàn)采用微波工藝提取狼把草黃酮，該方法加熱耗能少，成本低，簡(jiǎn)單方便。優(yōu)化所得最佳提取工藝條件為：乙醇體積分?jǐn)?shù)75%、微波功率500 W、提取時(shí)間35 min、料液比 1 g ∶20 mL、微波溫度70 ℃，該優(yōu)化條件下的平均提取率為0507 2%。該研究結(jié)果對(duì)狼把草總黃酮在藥物、食品等領(lǐng)域的深入開發(fā)提供了一定參考。

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