高 娃，韓增華**，戴肖東，馬銀鵬，王玉文

(1.黑龍江省科學(xué)院微生物研究所，黑龍江 哈爾濱 150010；2.黑龍江省科學(xué)院高技術(shù)研究院，黑龍江 哈爾濱 150090)

黑木耳不同培養(yǎng)溫度出耳期耐高溫比較*

高 娃1,2，韓增華1,2**，戴肖東1,2，馬銀鵬1，王玉文1

(1.黑龍江省科學(xué)院微生物研究所，黑龍江 哈爾濱 150010；2.黑龍江省科學(xué)院高技術(shù)研究院，黑龍江 哈爾濱 150090)

為研究菌絲培養(yǎng)溫度對(duì)菌絲生長生理的影響及出耳期耳片的高溫抗性，提高黑木耳出耳抗性和產(chǎn)品品質(zhì)，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)5組不同發(fā)菌溫度，對(duì)黑木耳菌絲培養(yǎng)溫度、菌絲生理與出耳期耳片耐高溫性展開研究，結(jié)果表明，15℃、20℃發(fā)菌菌絲生長速度較對(duì)照組(25℃)慢，但菌絲粗壯，培養(yǎng)期感染雜菌少，酶活性高。低溫培養(yǎng)的菌絲出耳期抗雜菌污染能力強(qiáng)，耳片不易流耳。低溫發(fā)菌有利于提高黑木耳出耳耐高溫性。

黑木耳；培養(yǎng)溫度；出耳；耐高溫性

黑木耳是中溫型菌，菌絲體在5℃～35℃都可生長，一般以22℃～28℃為適宜[1]。黑木耳發(fā)菌溫度愈低，發(fā)育速度愈慢，菌絲體營養(yǎng)吸收越充分，菌絲體健壯，生活力旺盛，子實(shí)體結(jié)實(shí)色深肉厚，抗逆境性能強(qiáng)。相反，溫度愈高，發(fā)育速度愈快，但菌絲體徒長脆弱，常易衰老，生活力不強(qiáng)，子實(shí)體色淡、質(zhì)薄，商品價(jià)值低，抗性減弱[2]，因此控制好發(fā)菌溫度至關(guān)重要。研究不同溫度對(duì)菌絲體生長和不同溫度對(duì)子實(shí)體結(jié)實(shí)的報(bào)道較多[3，4]，而研究發(fā)菌溫度對(duì)出耳影響及出耳期耳片生長耐高溫性的研究報(bào)道極少[5]，本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)5組不同發(fā)菌溫度，對(duì)不同培養(yǎng)溫度菌絲生理進(jìn)行分析，并對(duì)出耳期耳片抗高溫性進(jìn)行比較，試驗(yàn)在室內(nèi)智能出菇箱中進(jìn)行，具體實(shí)施如下。

1 材料和方法

1.1 供試菌種

黑耳2號(hào)(國認(rèn)品種)，黑龍江省科學(xué)院微生物研究所菌種保藏中心提供。

1.2 培養(yǎng)基

母種培養(yǎng)基：土豆 200 g(煮汁 1 000 mL)、瓊脂粉 14.0 g、葡萄糖 20.0 g、磷酸二氫鉀 3.0 g、硫酸鎂 1.5 g、蛋白胨 0.5 g、維生素B110.0 mg，pH自然。原種培養(yǎng)基及栽培種培養(yǎng)基：硬雜木屑78%、麥麩20%、石膏1%、石灰1%。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 菌種制作

原種和栽培種培養(yǎng)料分別裝 500 mL 葡萄糖玻璃瓶和 16.5 cm×35 cm 聚乙烯折角袋，原種每瓶裝入培養(yǎng)料合干料約 175 g(濕料 500 g)，栽培種每袋裝入培養(yǎng)料合干料 420 g(濕料 1 200 g)，121℃下滅菌 120 min，取 3 cm2的在母種培養(yǎng)基上活化菌種2塊接種于原種培養(yǎng)料，25℃培養(yǎng)至菌絲發(fā)滿。以120的原種接種量接入栽培種培養(yǎng)料中，不同溫度下培養(yǎng)。

1.3.2 不同溫度發(fā)菌及菌絲長勢(shì)

于2012年3月5日同時(shí)生產(chǎn)接種栽培種菌袋100袋，每組20袋，分別于15℃、20℃、25℃(對(duì)照)、30℃、35℃的恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行不同溫度下菌絲培養(yǎng)，記錄菌絲生長勢(shì)，至滿袋后于10℃保存至開口。

1.3.3 不同發(fā)菌溫度酶活性比較

粗酶液制備和酶活性測(cè)定，按韓增華2008方法進(jìn)行[6]。

1.3.4 實(shí)驗(yàn)室出菇箱出耳管理

于2012年5月10日開口，室內(nèi)(20℃)放置 3 d 后，于2012年5月14日擺放于實(shí)驗(yàn)室的HM-216出菇箱(山東莘縣格潤菌業(yè)公司)中，每個(gè)培養(yǎng)溫度選取15袋，菌袋間隔5 cm，出菇箱溫度調(diào)控在(20±5)℃，通風(fēng)間隔 30 min 通風(fēng) 5 min，光照自然光，濕度90%～95%，待耳芽分化后，每天噴壺澆水2次，每次 10 min，耳片展片5分熟(約 3 cm～5 cm)時(shí)，觀察各組耳片生長情況。

1.3.5 抗高溫實(shí)驗(yàn)

不同培養(yǎng)溫度耳片生長5分熟時(shí)，出菇箱其他條件不變，出耳溫度增加至35℃，繼續(xù)進(jìn)行出耳管理，觀察黑木耳出耳期高溫對(duì)耳片生長的影響。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 菌絲生長情況

菌絲生長速度見表1、圖1。

表1 菌絲生長勢(shì)

處理4菌絲生長速度最快，菌絲細(xì)弱，顏色黃白，長滿菌絲的培養(yǎng)料松軟，彈性差。處理5菌絲生長速度前期快，后期緩慢，菌絲纖細(xì)，產(chǎn)色素，培養(yǎng)料松軟無彈性。處理2、處理3菌絲生長速度較快，菌絲潔白、濃密、成束，培養(yǎng)料堅(jiān)實(shí)有彈性。處理1菌絲生長緩慢、菌絲灰白，各處理菌絲生長速度差異極顯著(p<0.01)。

2.2 菌絲營養(yǎng)生長階段胞外酶活

菌絲營養(yǎng)生長階段胞外酶活變化情況見圖2。

如圖2，處理1、處理2、處理3胞外漆酶、多酚氧化酶活性較處理4、處理5酶活性高；處理1、處理2濾紙纖維素酶活性較高，處理1羧甲基纖維素酶活性也較高，僅次于處理5；半纖維素酶各處理組差異不大，處理5略高于其他處理。處理4、處理5淀粉酶活性較高，處理2蛋白酶最高，處理3次之。

2.3 催耳芽及前期耳片生長

不同發(fā)菌溫度出耳芽及耳片生長結(jié)果見表2、圖3。

從表2、圖3可見，處理1和處理2出耳芽快、大小均一，出芽率達(dá)100%，耳片生長速度快、整齊，顏色黑，耳型好，處理2表現(xiàn)更佳，處理3耳片生長速度較快但長勢(shì)不齊。處理4和處理5耳芽形成慢，出芽率低，耳片生長緩慢，顏色淺，耳片薄，處理5表現(xiàn)最差，出耳芽率較其他組差異極顯著(p<0.01)。

2.4 耳片生長高溫抗性

不同發(fā)菌溫度高溫抗性情況見表3、圖4。

由表3、圖4可見，不同發(fā)菌溫度耳片耐高溫表現(xiàn)不同，處理1、處理2在35℃放置 10 d 耳片完整，20 d 后，耳片開始長白毛，流耳，已經(jīng)感染斑點(diǎn)性雜菌，但大部分耳片完整，有彈性。處理3、處理4大部分流耳，部分已近脫落。處理5在35℃放置 7 d 耳片開始長白毛，10 d 產(chǎn)生褐斑，20 d 后，流耳嚴(yán)重，耳片全部脫落。雜菌污染率處理1、處理2相對(duì)較低，較處理3差異顯著(p<0.05)，較處理4、處理5差異極顯著(p<0.01)。

3 討論

食用菌營養(yǎng)生長所需溫度基本相近(20℃～30℃)，而生殖生長所需溫度差別較大，不同種類的食用菌、同一種類不同品種的食用菌生長發(fā)育所需的溫度也不同。滑菇、猴頭、杏鮑菇一般認(rèn)為是低溫菇種，而草菇、香菇、姬松茸等則需較高溫度才能結(jié)實(shí)，溫度的高低可直接影響食用菌菌絲的生長速度和子實(shí)體的產(chǎn)量和質(zhì)量。菌絲在不同溫度下的生長差異反映了構(gòu)成菌絲的細(xì)胞在不同溫度下的生長分裂速度，也間接反應(yīng)了菌絲生長代謝酶活性，研究不同溫度下菌絲長勢(shì)和酶活性變化，可為研究溫度對(duì)食用菌子實(shí)體生長發(fā)育和高溫抗性的影響奠定基礎(chǔ)。

表2 不同發(fā)菌溫度出耳芽及耳片生長

表3 不同發(fā)菌溫度高溫抗性

處理白毛出現(xiàn)時(shí)間∕d流耳耳片韌性雜菌耳片完整程度污染率∕%120Aa少較硬，有彈性褐斑少大部分完整60cC218Aab較多軟，有彈性斑點(diǎn)多大部分完整65cBC314ABbc多軟，無彈性斑點(diǎn)流耳少部分完整80bAB410BCcd很多軟腐斑點(diǎn)嚴(yán)重流耳大部分殘耳90abA57Cd全部軟腐全部流耳根部留有殘耳98aA

在適當(dāng)范圍內(nèi)增加溫度可促進(jìn)菌絲快速生長，通常以菌絲在PDA培養(yǎng)基上生長速度最快的溫度為生產(chǎn)中的發(fā)菌溫度。溫度對(duì)食用菌子實(shí)體生長的影響報(bào)道較多[7-9]，但高溫導(dǎo)致的菌絲徒長對(duì)子實(shí)體生長發(fā)育的影響研究報(bào)道很少，而子實(shí)體生長階段高溫雖然有利于生長周期的縮短，但是卻會(huì)導(dǎo)致產(chǎn)量降低、品質(zhì)下降以及污染率升高，因而應(yīng)采取比最快生長溫度稍低的溫度進(jìn)行生產(chǎn)較為適宜。

本研究通過比較不同培養(yǎng)溫度處理對(duì)黑木耳菌絲長勢(shì)、酶活變化、現(xiàn)耳芽、出耳性狀及出耳期高溫抗性的影響，篩選出了合適的黑木耳培養(yǎng)溫度為20℃，此溫度下培養(yǎng)的菌絲，對(duì)后期出耳及抗高溫均有顯著的效果，該研究為黑木耳菌絲培養(yǎng)，黑木耳出耳品質(zhì)的改良提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

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2014上半年全國香菇出口數(shù)量同比增長9.5%

從商務(wù)部對(duì)外公布數(shù)據(jù)中了解到，2014年1月～6月，全國出口香菇數(shù)量為47 453.9 t，同比增長9.5%，金額為6.7億美元，同比增長20.8%，平均單價(jià)為14033.5美元·t-1，同比增長10.3%。2014年6月，我國出口香菇數(shù)量為9 108.4 t，環(huán)比下降0.4%，金額為1.4億美元，環(huán)比增長3.6%，平均單價(jià)為15 238.7美元·t-1，環(huán)比增長4%，同比出口數(shù)量增長2.8%，金額增長9.8%，平均單價(jià)增長6.8%。

易菇網(wǎng)

2014.10.10

Comparison of Different Culture Temperature on the High-temperature Resistance in Ear Formation ofAuriculariaauricula-judae

GAO Wa1,2, HAN Zeng-hua1,2, DAI Xiao-dong1,2, MA Yin-peng1, WANG Yu-wen1

(1.Institute of Microbiolog, Heilongjiang Academy of Sciences, HarbinHeilongjiang150010; 2.Institute of Advanced Technology, Heilongjiang Academy of Sciences, HarbinHeilongjiang150090)

To improve the resistance of the ear formation and the product quality ofA.auricula-judae, the effect of mycelial culture temperature on mycelial growth and the high-temperature resistance in the period of ear formation was carried out in our study. Five treatments(15℃, 20℃, 25℃, 30℃, 35℃)were designed to compare the differences of mycelia culture temperature, mycelia physiology and the resistance to high temperature. The results showed that the mycelial growth rate of both 15℃ and 20℃ treatments was lower than that of the control group (25℃), however, the hyphae were thicker and stronger, the infectious microbes infect less, and the enzyme activity was higher. Furthermore, the hyphae owned a higher ability to resist other microorganism, and the rotting ears possessed a very low rate when it cultured in a lower temperature. So we deduced that a lower culture temperature was beneficial to increase the high-temperature resistance in the period of ear formation ofA.auricula-judae.

A.auricula-judae; Culture temperature; Ear formation; High-temperature resistance

*項(xiàng)目來源：黑龍江省科學(xué)院科技成果中試與熟化項(xiàng)目“黑木耳優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)栽培管理技術(shù)推廣”(YZS13GWV14)；現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專項(xiàng)資金“黑木耳栽培技術(shù)”(CARS-24)。

高娃(1970-)，女，高級(jí)工程師，主要從事食用菌菌種保藏、分類、鑒定研究。

**通信作者： 韓增華，研究員級(jí)高級(jí)工程師。E-mail：hanzenghua77@126.com

2014-09-24

S646.6

A

1003-8310(2014)06-0026-03