童偉文　鄧兵　喻婷　冉志平　葉勝?gòu)?qiáng)　王麗霞　楊宇　龔萍

摘要：肉鴨生物床養(yǎng)殖模式是最近幾年興起的一種養(yǎng)殖方式，生物床墊料是否存在病原微生物和重金屬超標(biāo)，一直是人們關(guān)注的問(wèn)題。對(duì)使用3個(gè)月、6個(gè)月、1年、2年、3年的生物床墊料中的病原微生物及重金屬含量進(jìn)行了檢測(cè)。結(jié)果表明，3、6個(gè)月的生物床中并無(wú)影響禽類的病原微生物； 1、2、3年的生物床墊料中的沙門氏菌、大腸桿菌含量較低；大多數(shù)樣品的重金屬含量均低于進(jìn)口有機(jī)肥一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，僅3個(gè)月生物床墊料中的Cd、2年生物床墊料中的Zn含量高于進(jìn)口有機(jī)肥一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)但低于二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。研究結(jié)果表明利用生物床墊料養(yǎng)殖肉鴨是安全可靠的。

關(guān)鍵詞：生物床；肉鴨；病原微生物；重金屬

中圖分類號(hào)：S834 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2014）05-1120-03

近20年來(lái)，肉鴨養(yǎng)殖方式逐漸由地面平養(yǎng)向網(wǎng)上平養(yǎng)、生物床養(yǎng)殖等方式轉(zhuǎn)變。地面平養(yǎng)和網(wǎng)上平養(yǎng)均存在環(huán)境污染較大的問(wèn)題，隨著人們對(duì)環(huán)境污染的重視，生物床養(yǎng)殖模式逐漸興起。肉鴨生物床養(yǎng)殖是指按一定配方將枯草芽孢桿菌菌種、鋸末、稻殼、秸稈等混合發(fā)酵后鋪于舍內(nèi)。肉鴨排泄物可被有機(jī)墊料中的微生物迅速降解，進(jìn)而改善禽舍內(nèi)部環(huán)境，保持清潔衛(wèi)生，以減少禽的發(fā)病率和獸藥的使用[1，2]。由于肉鴨直接在生物床墊料上生長(zhǎng)，生物床墊料是否存在病原微生物及重金屬超標(biāo)一直是人們關(guān)注的問(wèn)題，因此有必要對(duì)生物床墊料的安全性進(jìn)行研究。

本試驗(yàn)對(duì)使用3個(gè)月、6個(gè)月、1年、2年、3年的生物床墊料中的病原微生物及重金屬含量進(jìn)行了檢測(cè)分析，旨在為生物床墊料的合理使用提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

采集使用3個(gè)月、6個(gè)月、1年、2年、3年的肉鴨生物床墊料。采樣方式為多處采樣后再混勻。

1.2 檢測(cè)單位及檢測(cè)指標(biāo)

檢測(cè)單位為農(nóng)業(yè)部微生物產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試中心（武漢）。檢測(cè)指標(biāo)為所取樣品中總菌數(shù)、重金屬含量以及病原微生物的含量。其中重金屬的檢測(cè)指標(biāo)為各個(gè)樣品中Cu、Zn、Cr、Pb、Cd的含量，病原微生物的檢測(cè)指標(biāo)為常見的禽類腸道致病菌大腸桿菌（Escherichia coli）和沙門氏菌（Salmonella）。

1.3 檢測(cè)方法

1.3.1 總菌數(shù)的檢測(cè) 總菌數(shù)的檢測(cè)參照GB 4789.2-2010食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 菌落總數(shù)測(cè)定，對(duì)各樣品進(jìn)行適當(dāng)?shù)奶荻认♂專缓笕∠♂尯蟮木壕鶆蛲坎加跔I(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平皿上，37 ℃培養(yǎng)36 h后計(jì)數(shù)。

1.3.2 病原微生物的檢測(cè) 為了盡可能多地了解墊料中病原菌的種類，利用16S rDNA測(cè)序鑒定方法檢測(cè)3個(gè)月、6個(gè)月樣品中的病原微生物。先將樣品中的菌在YPD平板上劃線分離，挑取單菌落再次劃線分離以保證菌的純度，再挑取單菌落于液體YPD培養(yǎng)基中搖瓶培養(yǎng)一定時(shí)間（各種不同的菌所需培養(yǎng)時(shí)間不同），離心收集菌體，提取總DNA，利用16S rDNA引物對(duì)其進(jìn)行PCR擴(kuò)增，利用瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)擴(kuò)增結(jié)果，然后對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物測(cè)序，在NCBI相應(yīng)數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行序列比對(duì)，得到該菌所屬菌屬。

1年、2年、3年樣品中的病原微生物的檢測(cè)采用選擇性培養(yǎng)基鑒定計(jì)數(shù)法，選取禽類腸道病原菌中最常見、最具有代表性的大腸桿菌和沙門氏菌為檢測(cè)指標(biāo)，參照GB 4789.3-2010食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 大腸菌群計(jì)數(shù)、GB 4789.4-2010食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 沙門氏菌檢驗(yàn)，利用各自的選擇性培養(yǎng)基對(duì)梯度稀釋后的樣品涂平板，37 ℃培養(yǎng)18～24 h后計(jì)數(shù)。

1.3.3 重金屬含量監(jiān)測(cè) 重金屬Pb、Cd、Cu、Zn、Cr的檢測(cè)分別按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)（GB/T 5009.12-2010 食品中鉛的測(cè)定、GB/T 5009.15-2003 食品中鎘的測(cè)定、GB/T 5009.13-2003食品中銅的測(cè)定、GB/T 5009.14-2003食品中鋅的測(cè)定、HJ491-2009土壤 總鉻的測(cè)定 火焰原子吸收分光光度法）進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 3個(gè)月、6個(gè)月生物床墊料中微生物種類檢測(cè)結(jié)果

通過(guò)對(duì)3個(gè)月、6個(gè)月生物床墊料的優(yōu)勢(shì)微生物菌群檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，在3個(gè)月墊料中存在的微生物主要有：松鼠葡萄球菌（Staphylococcus sciuri）、棒桿菌屬（Corynebacterium）、變形桿菌屬（Proteus）、纖維微細(xì)菌（Cellulosimicrobium cellulans）、枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）、放線菌屬（Actinomyces）、細(xì)桿菌屬（Microbacterium）、芽孢桿菌屬（Bacillus）、蒼白桿菌屬（Ochrobactrum）、原小單孢菌屬（Promicromonospora）。6個(gè)月墊料中的微生物主要有：不動(dòng)桿菌屬（Acinetobacter）、短桿菌屬（Brevibacterium）、節(jié)桿菌屬（Arthrobacte）、枯草芽孢桿菌、原小單孢菌屬、里拉微球菌（Micrococcus lylae）、芽孢桿菌屬、蒼白桿菌屬。

2.2 1年、2年、3年生物床墊料細(xì)菌總數(shù)、大腸桿菌數(shù)和沙門氏菌數(shù)檢測(cè)結(jié)果

由表1可見，1～3年生物床墊料中細(xì)菌總數(shù)在（0.693～1.520）×108個(gè)/g，大腸桿菌數(shù)量為（0.069～7.070）×105個(gè)/g，隨著生物床墊料的使用年限增加，細(xì)菌總數(shù)和大腸桿菌數(shù)均呈增加的趨勢(shì)。生物床墊料中沙門氏菌的數(shù)量為（0.200～8.820）×102個(gè)/g，使用2年時(shí)的生物床墊料中的沙門氏菌數(shù)最多。

2.3 生物床墊料中重金屬含量檢測(cè)結(jié)果

由表2可見，生物床墊料中3個(gè)月至3年的Pb的含量在0.104～7.510 mg/kg范圍內(nèi)，以6個(gè)月墊料中的含量最高； Cd的含量在0.051～0.678 mg/kg范圍內(nèi)，以3個(gè)月墊料中的含量最高；Cr的含量在0.777～15.790 mg/kg范圍內(nèi)，以1年墊料中的含量最高；Cu的含量在0.310～26.550 mg/kg范圍內(nèi)，以2年墊料中的含量最高；Zn的含量在76.250～212.980 mg/kg范圍內(nèi)，以2年墊料中的含量最高。

3 小結(jié)與討論

生物床養(yǎng)殖原理是按一定配方將微生物母種、鋸末、稻殼、黏土等混合，形成有機(jī)墊料，墊料中枯草芽孢桿菌等有益微生物能將畜禽排泄物迅速降解，從而達(dá)到畜禽欄舍免沖洗、無(wú)臭味、污染物零排放的目的。墊料發(fā)酵生物床解決了糞便處理難題，可顯著降低畜禽舍臭味，避免蚊蟲滋擾，改善了畜禽養(yǎng)殖環(huán)境。在雞、豬的生物床養(yǎng)殖均取得了非常理想的效果[3-6]。在本試驗(yàn)中對(duì)肉鴨生物床養(yǎng)殖中3個(gè)月、6個(gè)月的生物床中的主要優(yōu)勢(shì)菌群進(jìn)行了分析，結(jié)果表明其菌群中并無(wú)影響禽類生長(zhǎng)和健康的病原微生物如沙門氏菌、大腸桿菌等。這一方面可能是由于墊料中的枯草芽孢桿菌等有益微生物可競(jìng)爭(zhēng)性抑制其他有害微生物，另一方面可能是由于病原菌的含量極低而未被檢測(cè)到。采用選擇性培養(yǎng)基法對(duì)1年、2年、3年的生物床墊料中的沙門氏菌、大腸桿菌進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果表明其沙門氏菌含量較低，大腸桿菌數(shù)有增加的趨勢(shì)，但其含量依然較低（表1），有些樣品組未檢出沙門氏菌。表明利用生物床養(yǎng)殖方式飼養(yǎng)肉鴨是安全的。

由于動(dòng)物糞便直接排到生物床墊料上被微生物降解，因此生物床墊料在使用一定年限后可作為有機(jī)肥材料[7]。動(dòng)物飼料中一般添加有促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)的重金屬，有機(jī)肥中重金屬含量如果超出一定范圍不僅會(huì)對(duì)生物床上的肉鴨產(chǎn)生影響，如作為肥料還會(huì)影響植物正常生長(zhǎng)，嚴(yán)重情況下則會(huì)通過(guò)作物進(jìn)入食物鏈對(duì)人體健康造成威脅。胡海燕等[8]研究結(jié)果表明發(fā)酵床養(yǎng)豬后墊料中Cu、Zn、Cr、As、Ni、Pb、Cd、Hg等8種重金屬元素含量均符合國(guó)家有機(jī)肥料農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)（NY 525-2012）。應(yīng)三成等[9]研究發(fā)現(xiàn)在豬養(yǎng)殖中使用1～3年的生物床墊料中Cu、Zn的平均值接近或超過(guò)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的最高允許含量。生物床養(yǎng)殖肉鴨是否會(huì)導(dǎo)致墊料中重金屬含量超標(biāo)還不是很清楚，因此檢測(cè)其生物床墊料中的重金屬含量尤為重要。

本研究對(duì)生物床墊料中的重金屬（Cd、Cr、Cu、Pb、Zn）含量進(jìn)行了檢測(cè)（表2）。查閱了進(jìn)口有機(jī)肥料中有毒有害物質(zhì)控制標(biāo)準(zhǔn)[10]中的主要重金屬含量（表3）。將生物床墊料中的重金屬含量數(shù)據(jù)與進(jìn)口有機(jī)肥的重金屬含量限定標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了比較，結(jié)果顯示大多數(shù)指標(biāo)低于一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，只有極少數(shù)的指標(biāo)（3個(gè)月的Cd，2年的Zn）高于一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)但低于二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)每組數(shù)據(jù)分析發(fā)現(xiàn)，這2個(gè)指標(biāo)偏大的原因主要是由于個(gè)別組的值過(guò)大導(dǎo)致的。綜上所述，利用生物床養(yǎng)殖方式養(yǎng)殖肉鴨后墊料中的病原微生物和重金屬含量均在安全范圍內(nèi)。

參考文獻(xiàn)：

[1] 喻 婷，王麗霞，周 華，等.肉鴨生物床養(yǎng)殖技術(shù)要點(diǎn)[J].上海畜牧獸醫(yī)通訊，2011（2）：89.

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[7] 黃 靜，康建平，蘇 波，等.生物床養(yǎng)豬墊料用作有機(jī)肥的安全性研究[J].食品與發(fā)酵科技，2011（1）：39-41.

[8] 胡海燕，于 勇，張玉靜，等.發(fā)酵床養(yǎng)豬廢棄墊料的資源化利用評(píng)價(jià)[J].植物營(yíng)養(yǎng)與肥料學(xué)報(bào)，2013（1）：256-262.

[9] 應(yīng)三成，呂學(xué)斌， 何志平，等.不同使用時(shí)間和類型生豬發(fā)酵床墊料成分比較研究[J].西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2010（4）：1279-1281.

[10] 毛建華.編制“商品有機(jī)肥料質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)”的實(shí)踐與體會(huì)[J].農(nóng)業(yè)環(huán)境保護(hù)，1998（2）：78-80.

3 小結(jié)與討論

生物床養(yǎng)殖原理是按一定配方將微生物母種、鋸末、稻殼、黏土等混合，形成有機(jī)墊料，墊料中枯草芽孢桿菌等有益微生物能將畜禽排泄物迅速降解，從而達(dá)到畜禽欄舍免沖洗、無(wú)臭味、污染物零排放的目的。墊料發(fā)酵生物床解決了糞便處理難題，可顯著降低畜禽舍臭味，避免蚊蟲滋擾，改善了畜禽養(yǎng)殖環(huán)境。在雞、豬的生物床養(yǎng)殖均取得了非常理想的效果[3-6]。在本試驗(yàn)中對(duì)肉鴨生物床養(yǎng)殖中3個(gè)月、6個(gè)月的生物床中的主要優(yōu)勢(shì)菌群進(jìn)行了分析，結(jié)果表明其菌群中并無(wú)影響禽類生長(zhǎng)和健康的病原微生物如沙門氏菌、大腸桿菌等。這一方面可能是由于墊料中的枯草芽孢桿菌等有益微生物可競(jìng)爭(zhēng)性抑制其他有害微生物，另一方面可能是由于病原菌的含量極低而未被檢測(cè)到。采用選擇性培養(yǎng)基法對(duì)1年、2年、3年的生物床墊料中的沙門氏菌、大腸桿菌進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果表明其沙門氏菌含量較低，大腸桿菌數(shù)有增加的趨勢(shì)，但其含量依然較低（表1），有些樣品組未檢出沙門氏菌。表明利用生物床養(yǎng)殖方式飼養(yǎng)肉鴨是安全的。

由于動(dòng)物糞便直接排到生物床墊料上被微生物降解，因此生物床墊料在使用一定年限后可作為有機(jī)肥材料[7]。動(dòng)物飼料中一般添加有促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)的重金屬，有機(jī)肥中重金屬含量如果超出一定范圍不僅會(huì)對(duì)生物床上的肉鴨產(chǎn)生影響，如作為肥料還會(huì)影響植物正常生長(zhǎng)，嚴(yán)重情況下則會(huì)通過(guò)作物進(jìn)入食物鏈對(duì)人體健康造成威脅。胡海燕等[8]研究結(jié)果表明發(fā)酵床養(yǎng)豬后墊料中Cu、Zn、Cr、As、Ni、Pb、Cd、Hg等8種重金屬元素含量均符合國(guó)家有機(jī)肥料農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)（NY 525-2012）。應(yīng)三成等[9]研究發(fā)現(xiàn)在豬養(yǎng)殖中使用1～3年的生物床墊料中Cu、Zn的平均值接近或超過(guò)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的最高允許含量。生物床養(yǎng)殖肉鴨是否會(huì)導(dǎo)致墊料中重金屬含量超標(biāo)還不是很清楚，因此檢測(cè)其生物床墊料中的重金屬含量尤為重要。

本研究對(duì)生物床墊料中的重金屬（Cd、Cr、Cu、Pb、Zn）含量進(jìn)行了檢測(cè)（表2）。查閱了進(jìn)口有機(jī)肥料中有毒有害物質(zhì)控制標(biāo)準(zhǔn)[10]中的主要重金屬含量（表3）。將生物床墊料中的重金屬含量數(shù)據(jù)與進(jìn)口有機(jī)肥的重金屬含量限定標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了比較，結(jié)果顯示大多數(shù)指標(biāo)低于一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，只有極少數(shù)的指標(biāo)（3個(gè)月的Cd，2年的Zn）高于一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)但低于二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)每組數(shù)據(jù)分析發(fā)現(xiàn)，這2個(gè)指標(biāo)偏大的原因主要是由于個(gè)別組的值過(guò)大導(dǎo)致的。綜上所述，利用生物床養(yǎng)殖方式養(yǎng)殖肉鴨后墊料中的病原微生物和重金屬含量均在安全范圍內(nèi)。

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3 小結(jié)與討論

生物床養(yǎng)殖原理是按一定配方將微生物母種、鋸末、稻殼、黏土等混合，形成有機(jī)墊料，墊料中枯草芽孢桿菌等有益微生物能將畜禽排泄物迅速降解，從而達(dá)到畜禽欄舍免沖洗、無(wú)臭味、污染物零排放的目的。墊料發(fā)酵生物床解決了糞便處理難題，可顯著降低畜禽舍臭味，避免蚊蟲滋擾，改善了畜禽養(yǎng)殖環(huán)境。在雞、豬的生物床養(yǎng)殖均取得了非常理想的效果[3-6]。在本試驗(yàn)中對(duì)肉鴨生物床養(yǎng)殖中3個(gè)月、6個(gè)月的生物床中的主要優(yōu)勢(shì)菌群進(jìn)行了分析，結(jié)果表明其菌群中并無(wú)影響禽類生長(zhǎng)和健康的病原微生物如沙門氏菌、大腸桿菌等。這一方面可能是由于墊料中的枯草芽孢桿菌等有益微生物可競(jìng)爭(zhēng)性抑制其他有害微生物，另一方面可能是由于病原菌的含量極低而未被檢測(cè)到。采用選擇性培養(yǎng)基法對(duì)1年、2年、3年的生物床墊料中的沙門氏菌、大腸桿菌進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果表明其沙門氏菌含量較低，大腸桿菌數(shù)有增加的趨勢(shì)，但其含量依然較低（表1），有些樣品組未檢出沙門氏菌。表明利用生物床養(yǎng)殖方式飼養(yǎng)肉鴨是安全的。

由于動(dòng)物糞便直接排到生物床墊料上被微生物降解，因此生物床墊料在使用一定年限后可作為有機(jī)肥材料[7]。動(dòng)物飼料中一般添加有促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)的重金屬，有機(jī)肥中重金屬含量如果超出一定范圍不僅會(huì)對(duì)生物床上的肉鴨產(chǎn)生影響，如作為肥料還會(huì)影響植物正常生長(zhǎng)，嚴(yán)重情況下則會(huì)通過(guò)作物進(jìn)入食物鏈對(duì)人體健康造成威脅。胡海燕等[8]研究結(jié)果表明發(fā)酵床養(yǎng)豬后墊料中Cu、Zn、Cr、As、Ni、Pb、Cd、Hg等8種重金屬元素含量均符合國(guó)家有機(jī)肥料農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)（NY 525-2012）。應(yīng)三成等[9]研究發(fā)現(xiàn)在豬養(yǎng)殖中使用1～3年的生物床墊料中Cu、Zn的平均值接近或超過(guò)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的最高允許含量。生物床養(yǎng)殖肉鴨是否會(huì)導(dǎo)致墊料中重金屬含量超標(biāo)還不是很清楚，因此檢測(cè)其生物床墊料中的重金屬含量尤為重要。

本研究對(duì)生物床墊料中的重金屬（Cd、Cr、Cu、Pb、Zn）含量進(jìn)行了檢測(cè)（表2）。查閱了進(jìn)口有機(jī)肥料中有毒有害物質(zhì)控制標(biāo)準(zhǔn)[10]中的主要重金屬含量（表3）。將生物床墊料中的重金屬含量數(shù)據(jù)與進(jìn)口有機(jī)肥的重金屬含量限定標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了比較，結(jié)果顯示大多數(shù)指標(biāo)低于一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，只有極少數(shù)的指標(biāo)（3個(gè)月的Cd，2年的Zn）高于一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)但低于二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)每組數(shù)據(jù)分析發(fā)現(xiàn)，這2個(gè)指標(biāo)偏大的原因主要是由于個(gè)別組的值過(guò)大導(dǎo)致的。綜上所述，利用生物床養(yǎng)殖方式養(yǎng)殖肉鴨后墊料中的病原微生物和重金屬含量均在安全范圍內(nèi)。

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