鐘彥等

摘要：以蘆丁為對(duì)照品，利用AlCl3顯色法分析重樓屬（Paris L.）植物中總黃酮的含量。該方法在0.005～0.025 mg/mL （r=0.999 3）范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，平均回收率達(dá)97.50%，RSD為1.89%。結(jié)果表明，不同種屬、不同產(chǎn)地重樓屬植物中總黃酮含量有顯著性差異，可為開發(fā)利用重樓屬資源提供參考。

關(guān)鍵詞：重樓屬（Paris L.）；總黃酮；分光光度法

中圖分類號(hào)：Q815 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2014）06-1420-02

Comparison of Total Flavonoids in Four Paris L. Resources

ZHONG Yan1，ZHOU Nong1，2，DU Si-wen3，GUO Dong-qin1

[1.College of Life Science and Engineering， Chongqing Three Gorges University， Chongqing 404000，China；

2.College of Pharmacy and Chemistry， Dali University， Dali 671000， Yunnan， China；

3.Chengdu College （Chengdu University）， Experiential Technologies Center， Chengdu 610106，China]

Abstract： The contents of total flavonoids in Paris L. were detected with AlCl3 colorimetric analysis using rutin as control. A good linear relationship was in the range of 0.005～0.025 mg/mL（r=0.999 3）， with the average recovery rate of 97.50% and RSD of 1.89%. The total flavonoids in Paris L. from different spicies and areas had significant difference. The results will provide a refenerce for utilizing Paris L.

Key words： Paris L.； total flavonoids； spectrophotometry

重樓屬（Paris L.）歸于百合科（Liliaceae），為我國(guó)傳統(tǒng)中藥藥材，具有清熱解毒、消腫止痛、涼肝定驚功效，常用于無(wú)名腫毒、毒蛇咬傷、流行性腮腺炎、扁桃體炎、咽喉腫痛、乳腺炎、跌打損傷等[1-3]。研究表明，重樓主要含甾體皂苷、黃酮、多糖等活性成分[4]，其中，黃酮化合物具有抗腫瘤、抗炎、抗動(dòng)脈粥樣硬化、抑制血小板聚集、抗過(guò)敏、抗突變、抗氧化等生物活性[4-6]，為重樓的重要活性成分，也是衡量該藥材質(zhì)量的重要指標(biāo)。目前已有重樓屬植物七葉一枝花中總黃酮的含量報(bào)道[7]，但采用紫外-可見分光光度法分析云南重樓、毛重樓、花葉重樓中的總黃酮含量尚未見報(bào)道。本試驗(yàn)分析不同藥用重樓中總黃酮含量的差異，將為重樓資源的開發(fā)利用和藥材質(zhì)量控制提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

蘆丁對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：100080-200707）；本試驗(yàn)所用的各種重樓藥材（表1）購(gòu)于全國(guó)的藥材市場(chǎng)或自采，經(jīng)大理學(xué)院藥學(xué)與化學(xué)學(xué)院生藥教研室周濃副教授鑒定為云南重樓[Paris polyphylla Smith var. yunnanensis （Franch.） Hand.-Mazz.]、七葉一枝花[Paris polyphylla Smith var. chinensis （Franch.） Hara]、毛重樓（P. polyphylla Smith var. pubescens Hand. -Mazz.）、花葉重樓（P. violacea Lévl.）的干燥根莖。樣品保存于大理學(xué)院藥學(xué)與化學(xué)學(xué)院生藥學(xué)教研室。

試劑均為分析純，去離子水。

1.2 儀器

TU-1901型雙光束紫外-可見分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）；RE-2000A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）；AL104型電子天平（梅特勒-托利多儀器上海有限公司）；SHZ-DM型循環(huán)水式真空泵（鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司）；SB25-120型超聲波清洗機(jī)（寧波新芝生物科技股份有限公司）；DKS-28型恒溫水浴鍋（嘉興市中新醫(yī)療儀器有限公司）。

1.3 方法

1.3.1 對(duì)照品溶液的制備 稱取蘆丁對(duì)照品適量，置于25 mL容量瓶中，以甲醇溶解并定容至刻度，制成0.1 mg/mL的蘆丁對(duì)照品貯備液。

1.3.2 供試溶液的制備 稱取重樓藥材粉末（過(guò)三號(hào)篩）0.50 g，置250 mL圓底燒瓶中，加甲醇30 mL，在80 ℃水浴鍋中回流提取2 h，靜置至室溫，過(guò)濾，重復(fù)回流1次，合并濾液，減壓濃縮至干，殘?jiān)约状既芤翰⑥D(zhuǎn)移到10 mL容量瓶中，即得供試溶液。

1.3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 分別取蘆丁對(duì)照品貯備液0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL，置于10 mL容量瓶中，加入三氯化鋁甲醇溶液定容至刻度。以第一份溶液為空白，在425 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。以蘆丁濃度（C）為橫坐標(biāo)，吸光度（A）為縱坐標(biāo)，制備標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2 結(jié)果與分析

2.1 精密度

量取對(duì)照品貯備液2 mL于10 mL容量瓶中，按“1.3.3”測(cè)定6次，測(cè)定結(jié)果的RSD為1.18%（n=6），表明方法精密度良好。

2.2 重復(fù)性

稱取重樓藥材粉末6份，分別按“1.3.2”制備供試品溶液。精確量取供試品溶液2 mL于10 mL容量瓶中，按照“1.3.3”測(cè)定，測(cè)定結(jié)果的RSD=1.08%（n=6），表明方法重復(fù)性良好。

2.3 穩(wěn)定性

量取供試品溶液2 mL于10 mL容量瓶中，在0～60 min內(nèi)，每隔10 min測(cè)定1次，參照“1.3.3” 測(cè)定，測(cè)定結(jié)果的RSD為1.22%（n=6），表明供試品溶液顯色后在60 min內(nèi)穩(wěn)定。

2.4 加樣回收率

參照“1.3.3”，蘆丁對(duì)照品的回歸方程為A=33.78 C+0.026 9，（r=0.999 3）。結(jié)果表明蘆丁對(duì)照品在0.005～0.025 mg/mL范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系；精確稱取已知總黃酮含量的重樓藥材粉末0.25 g，共9份，分別加入一定量的蘆丁對(duì)照品，按“1.3.2”制備供試溶液，按“1.3.3”測(cè)定。結(jié)果表明，樣品平均回收率為97.5%，RSD為1.89%（n=9）。

2.5 樣品測(cè)定

稱取7份不同產(chǎn)地的重樓樣品，同上法分析，計(jì)算總黃酮含量，結(jié)果見表1。由表1可知，不同種屬重樓藥材中總黃酮含量差異較大，即使同為云南重樓，不同產(chǎn)地的樣品差異也較大，其中云南大理金貝藥材市場(chǎng)購(gòu)買云南重樓中總黃酮含量最高，云南麗江地區(qū)自采云南重樓總黃酮含量最低，兩者含量相差近4倍。該結(jié)果表明重樓中總黃酮的含量受產(chǎn)地及品種影響較大。

3 討論

在預(yù)試驗(yàn)中，參考文獻(xiàn)[7-9]分析了不同溶劑[甲醇、70%（V/V，下同）甲醇、無(wú)水乙醇、70%乙醇]、不同提取方法（超聲、回流、索氏）、不同提取時(shí)間（1.0、1.5、2.0、2.5 h）、不同提取次數(shù)（1、2、3次）、不同料液比（1∶10、1∶20、1∶30、1∶40、1∶50、1∶60）、不同顯色劑[Al（NO3）3-NaNO2-NaOH顯色法、AlCl3顯色法]對(duì)重樓中總黃酮含量測(cè)定的影響。結(jié)果表明，以甲醇為提取溶劑、加熱回流提取2 h、提取2次后，采用AlCl3顯色測(cè)得的總黃酮含量較準(zhǔn)確。另外，本試驗(yàn)方法的精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性、平均回收率均較好，可作為重樓藥材中總黃酮的含量測(cè)定方法，為其多成分、多指標(biāo)質(zhì)量控制，提高藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及進(jìn)一步開發(fā)利用相關(guān)資源提供了參考。

參考文獻(xiàn)：

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（一部）[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010.243-244.

[2] 趙保勝，朱寅荻，馬 勇，等.中藥重樓研究進(jìn)展[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2011，17（11）：267-270.

[3] 李 恒.重?fù)僦参颷M].北京：科學(xué)出版社，1998.182.

[4] 武珊珊，高文遠(yuǎn)，段宏泉，等.重樓化學(xué)成分和藥理作用研究進(jìn)展[J].中草藥，2004，35（3）：344-347.

[5] 何佳珂，于 洋，陳西敬，等.黃酮類化合物的藥物代謝研究進(jìn)展[J].中國(guó)中藥雜志，2010，35（21）：2789-2794.

[6] 黃賢校，高文遠(yuǎn)，谷克仁，等.毛重樓的化學(xué)成分研究[J].中草藥，2009，40（9）：1366-1369.

[7] 袁 曉，袁 萍，嚴(yán)海燕，等.野生珍稀藥用植物七葉一枝花的成分含量分析[J].武漢植物學(xué)研究，2004，22（6）：575-577.

[8] 宋 萍，趙明德，殷海青.青海地區(qū)幾種錦雞兒屬植物中總黃酮含量的測(cè)定[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2009，20（6）：1297-1298.

[9] 鄭媛媛，李 辰，封士蘭，等.油橄欖葉中總黃酮含量測(cè)定方法探討[J].光譜學(xué)與光譜分析，2011，31（2）：547-551.

2.1 精密度

量取對(duì)照品貯備液2 mL于10 mL容量瓶中，按“1.3.3”測(cè)定6次，測(cè)定結(jié)果的RSD為1.18%（n=6），表明方法精密度良好。

2.2 重復(fù)性

稱取重樓藥材粉末6份，分別按“1.3.2”制備供試品溶液。精確量取供試品溶液2 mL于10 mL容量瓶中，按照“1.3.3”測(cè)定，測(cè)定結(jié)果的RSD=1.08%（n=6），表明方法重復(fù)性良好。

2.3 穩(wěn)定性

量取供試品溶液2 mL于10 mL容量瓶中，在0～60 min內(nèi)，每隔10 min測(cè)定1次，參照“1.3.3” 測(cè)定，測(cè)定結(jié)果的RSD為1.22%（n=6），表明供試品溶液顯色后在60 min內(nèi)穩(wěn)定。

2.4 加樣回收率

參照“1.3.3”，蘆丁對(duì)照品的回歸方程為A=33.78 C+0.026 9，（r=0.999 3）。結(jié)果表明蘆丁對(duì)照品在0.005～0.025 mg/mL范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系；精確稱取已知總黃酮含量的重樓藥材粉末0.25 g，共9份，分別加入一定量的蘆丁對(duì)照品，按“1.3.2”制備供試溶液，按“1.3.3”測(cè)定。結(jié)果表明，樣品平均回收率為97.5%，RSD為1.89%（n=9）。

2.5 樣品測(cè)定

稱取7份不同產(chǎn)地的重樓樣品，同上法分析，計(jì)算總黃酮含量，結(jié)果見表1。由表1可知，不同種屬重樓藥材中總黃酮含量差異較大，即使同為云南重樓，不同產(chǎn)地的樣品差異也較大，其中云南大理金貝藥材市場(chǎng)購(gòu)買云南重樓中總黃酮含量最高，云南麗江地區(qū)自采云南重樓總黃酮含量最低，兩者含量相差近4倍。該結(jié)果表明重樓中總黃酮的含量受產(chǎn)地及品種影響較大。

3 討論

在預(yù)試驗(yàn)中，參考文獻(xiàn)[7-9]分析了不同溶劑[甲醇、70%（V/V，下同）甲醇、無(wú)水乙醇、70%乙醇]、不同提取方法（超聲、回流、索氏）、不同提取時(shí)間（1.0、1.5、2.0、2.5 h）、不同提取次數(shù)（1、2、3次）、不同料液比（1∶10、1∶20、1∶30、1∶40、1∶50、1∶60）、不同顯色劑[Al（NO3）3-NaNO2-NaOH顯色法、AlCl3顯色法]對(duì)重樓中總黃酮含量測(cè)定的影響。結(jié)果表明，以甲醇為提取溶劑、加熱回流提取2 h、提取2次后，采用AlCl3顯色測(cè)得的總黃酮含量較準(zhǔn)確。另外，本試驗(yàn)方法的精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性、平均回收率均較好，可作為重樓藥材中總黃酮的含量測(cè)定方法，為其多成分、多指標(biāo)質(zhì)量控制，提高藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及進(jìn)一步開發(fā)利用相關(guān)資源提供了參考。

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[9] 鄭媛媛，李 辰，封士蘭，等.油橄欖葉中總黃酮含量測(cè)定方法探討[J].光譜學(xué)與光譜分析，2011，31（2）：547-551.

2.1 精密度

量取對(duì)照品貯備液2 mL于10 mL容量瓶中，按“1.3.3”測(cè)定6次，測(cè)定結(jié)果的RSD為1.18%（n=6），表明方法精密度良好。

2.2 重復(fù)性

稱取重樓藥材粉末6份，分別按“1.3.2”制備供試品溶液。精確量取供試品溶液2 mL于10 mL容量瓶中，按照“1.3.3”測(cè)定，測(cè)定結(jié)果的RSD=1.08%（n=6），表明方法重復(fù)性良好。

2.3 穩(wěn)定性

量取供試品溶液2 mL于10 mL容量瓶中，在0～60 min內(nèi)，每隔10 min測(cè)定1次，參照“1.3.3” 測(cè)定，測(cè)定結(jié)果的RSD為1.22%（n=6），表明供試品溶液顯色后在60 min內(nèi)穩(wěn)定。

2.4 加樣回收率

參照“1.3.3”，蘆丁對(duì)照品的回歸方程為A=33.78 C+0.026 9，（r=0.999 3）。結(jié)果表明蘆丁對(duì)照品在0.005～0.025 mg/mL范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系；精確稱取已知總黃酮含量的重樓藥材粉末0.25 g，共9份，分別加入一定量的蘆丁對(duì)照品，按“1.3.2”制備供試溶液，按“1.3.3”測(cè)定。結(jié)果表明，樣品平均回收率為97.5%，RSD為1.89%（n=9）。

2.5 樣品測(cè)定

稱取7份不同產(chǎn)地的重樓樣品，同上法分析，計(jì)算總黃酮含量，結(jié)果見表1。由表1可知，不同種屬重樓藥材中總黃酮含量差異較大，即使同為云南重樓，不同產(chǎn)地的樣品差異也較大，其中云南大理金貝藥材市場(chǎng)購(gòu)買云南重樓中總黃酮含量最高，云南麗江地區(qū)自采云南重樓總黃酮含量最低，兩者含量相差近4倍。該結(jié)果表明重樓中總黃酮的含量受產(chǎn)地及品種影響較大。

3 討論

在預(yù)試驗(yàn)中，參考文獻(xiàn)[7-9]分析了不同溶劑[甲醇、70%（V/V，下同）甲醇、無(wú)水乙醇、70%乙醇]、不同提取方法（超聲、回流、索氏）、不同提取時(shí)間（1.0、1.5、2.0、2.5 h）、不同提取次數(shù)（1、2、3次）、不同料液比（1∶10、1∶20、1∶30、1∶40、1∶50、1∶60）、不同顯色劑[Al（NO3）3-NaNO2-NaOH顯色法、AlCl3顯色法]對(duì)重樓中總黃酮含量測(cè)定的影響。結(jié)果表明，以甲醇為提取溶劑、加熱回流提取2 h、提取2次后，采用AlCl3顯色測(cè)得的總黃酮含量較準(zhǔn)確。另外，本試驗(yàn)方法的精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性、平均回收率均較好，可作為重樓藥材中總黃酮的含量測(cè)定方法，為其多成分、多指標(biāo)質(zhì)量控制，提高藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及進(jìn)一步開發(fā)利用相關(guān)資源提供了參考。

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[9] 鄭媛媛，李 辰，封士蘭，等.油橄欖葉中總黃酮含量測(cè)定方法探討[J].光譜學(xué)與光譜分析，2011，31（2）：547-551.