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        呼吸道感染患兒血清Toll樣受體、Dectin及CD14測(cè)定臨床意義

        2014-07-02 01:45:46羅麗丹王鑫華童夏生馮利平王恩智
        關(guān)鍵詞:模式識(shí)別毛細(xì)支氣管炎

        羅麗丹王鑫華童夏生馮利平王恩智

        1浙江省溫嶺市第四人民醫(yī)院兒科 臺(tái)州 317523 2浙江省臺(tái)州市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院

        呼吸道感染患兒血清Toll樣受體、Dectin及CD14測(cè)定臨床意義

        羅麗丹1王鑫華2童夏生2馮利平2王恩智2

        1浙江省溫嶺市第四人民醫(yī)院兒科 臺(tái)州 317523 2浙江省臺(tái)州市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院

        呼吸道感染;兒童;Toll樣受體;Dectin;CD14;臨床意義

        機(jī)體免疫系統(tǒng)對(duì)感染的識(shí)別及應(yīng)答依賴(lài)于模式識(shí)別受體,Toll樣受體(TLR)被認(rèn)為是最主要的模式識(shí)別受體[1],參與感染、哮喘、腫瘤等疾病的炎癥過(guò)程。最近研究發(fā)現(xiàn)TLR2、6與Dectin、膜蛋白細(xì)胞分化抗原14(CD14)等模式識(shí)別受體具有協(xié)同作用,共同對(duì)微生物和外源性分子等產(chǎn)生免疫應(yīng)答,它們通過(guò)髓樣分化因子(MyD88)/NF-κB途經(jīng)產(chǎn)生TNFα、IL-12等炎癥因子起到相互增強(qiáng)作用[2]。本研究檢測(cè)毛細(xì)支氣管炎和急性上呼吸道感染患兒血清模式識(shí)別受體TLR2、Dectin及可溶性CD14(sCD14)的表達(dá),以了解血清模式識(shí)別受體在兒童呼吸道感染中的發(fā)病機(jī)制,報(bào)道如下。

        1 臨床資料

        選取2011年10月—2012年8月本院住院患兒118例,其中毛細(xì)支氣管炎[3]53例,男31例,女22例;年齡0.3~4歲,平均(1.9±0.9)歲;急性上呼吸道感染[3]65例,男39例,女26例;年齡0.5~4歲,平均(2.1±1.0)歲;病程均<48h。并取30名門(mén)診健康體檢兒童為健康對(duì)照組,男17名,女13名;年齡0.41~4歲,平均(2.0±1.1)歲。三組年齡、性別比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

        2 方法

        采集患兒入院當(dāng)天靜脈血2mL,對(duì)照組門(mén)診體檢時(shí)采集。靜置2h后3000r/min離心15min,分離血清,-80℃冰箱貯存,集中檢測(cè)。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)法,檢測(cè)血清TLR2、Dectin及sCD14的蛋白濃度,試劑盒均購(gòu)自上海研吉生物科技有限公司。

        測(cè)定方法:試劑盒平衡于室溫20~25℃待用,取96孔反應(yīng)板,加入40μL標(biāo)品于反應(yīng)孔里,然后再加生物素標(biāo)記的TLR2、Dectin及sCD14抗體各10μL,輕輕晃動(dòng)混勻。用封板膜封板后置37℃溫育30min,洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后洗滌5次,每孔加入酶標(biāo)試劑50μL,再經(jīng)溫育、洗滌,每孔先加入顯色劑A 50μL,再加入顯色劑B50μL,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15min,每孔加終止液50μL終止反應(yīng),以空白空調(diào)零,全自動(dòng)酶標(biāo)儀(芬蘭Labsystems Dragon公司)450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)各標(biāo)本吸光度值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得相應(yīng)濃度。

        統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差() 表示,采用F檢驗(yàn)、t檢驗(yàn),P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        3 結(jié)果

        毛細(xì)支氣管炎組和急性上呼吸道感染組血清TLR2、Dectin及sCD14蛋白濃度均顯著高于健康對(duì)照組(P<0.01);毛細(xì)支氣管炎組血清Dectin蛋白濃度顯著高于急性上呼吸道感染組(P<0.01),兩組血清TLR2和sCD14差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05),見(jiàn)表1。

        表1 三組血清TLR2、Dectin及sCD14比較() ng/mL

        表1 三組血清TLR2、Dectin及sCD14比較() ng/mL

        注:與健康對(duì)照組比較,*P<0.01;與急性上呼吸道感染組比較,△P<0.01

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        4 討論

        天然免疫是機(jī)體識(shí)別和清除外源性病原體的主要途經(jīng),是環(huán)境暴露和調(diào)節(jié)細(xì)胞因子應(yīng)答的重要環(huán)節(jié)。急性上呼吸道感染和毛細(xì)支氣管炎是兒童最為常見(jiàn)的急性感染性疾病,主要由呼吸道合胞病毒、流感病毒、副流感病毒等感染引起,繼而機(jī)體出現(xiàn)炎癥反應(yīng)[4]。

        介導(dǎo)天然免疫的主要模式識(shí)別受體包括TLR、Dectin、CD14、核苷酸寡聚化域樣受體和維A酸誘導(dǎo)基因Ⅰ樣受體等。TLR屬于Ⅰ型跨膜蛋白,表達(dá)于細(xì)胞表面或細(xì)胞內(nèi),通過(guò)胞外區(qū)的亮氨酸的重復(fù)序列,特異性識(shí)別病毒,并啟動(dòng)細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,產(chǎn)生免疫應(yīng)答,發(fā)揮抗病毒作用,它還與其它模式識(shí)別受體之間具有相互協(xié)同作用。Dectin是一個(gè)包涵細(xì)胞外C型凝集素樣碳水化合物識(shí)別域的糖基化的Ⅱ型跨膜受體,主要表達(dá)于單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞上,通過(guò)這些細(xì)胞的吞噬作用達(dá)到清除病原體的目的,并產(chǎn)生大量的炎癥因子和細(xì)胞因子。還能通過(guò)β-葡聚糖和非β-葡聚糖依賴(lài)性方式與T細(xì)胞相互作用,促進(jìn)Th1/Th17細(xì)胞的活化及Treg細(xì)胞的免疫應(yīng)答,產(chǎn)生免疫記憶[5]。不僅在支氣管上皮細(xì)胞的真菌感染中起重要作用[6],還能使肺泡巨噬細(xì)胞對(duì)H1N1流感病毒A型產(chǎn)生天然免疫應(yīng)答,產(chǎn)生大量的干擾素、炎癥因子和趨化因子[7]。CD14表達(dá)于單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞上,有膜結(jié)合型(mCD14)和可溶性?xún)煞N形式。CD14和脂多糖、脂多糖結(jié)合蛋白一起形成一種復(fù)合體,與細(xì)胞膜上Toll樣受體結(jié)合,介導(dǎo)機(jī)體細(xì)菌或病毒感染的天然免疫過(guò)程。在巨噬細(xì)胞介導(dǎo)的耐甲氧西林金黃色葡萄球菌肺炎和壞死性肺炎的天然免疫反應(yīng)中,潘頓-瓦倫丁殺白細(xì)胞素是通過(guò)TLR2、CD14、MyD88、白介素1受體相關(guān)激酶、腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子6依賴(lài)的方式產(chǎn)生免疫反應(yīng)[8]。在HIV-2感染的患者中,血清sCD14的濃度升高與病情危重程度有關(guān),還與高敏C反應(yīng)蛋白及IL-6等生物標(biāo)記物呈正相關(guān),認(rèn)為它是一個(gè)能預(yù)測(cè)病情的炎癥標(biāo)記物[9]。在呼吸道合胞病毒感染的毛細(xì)支氣管炎患者中,血清sCD14的濃度與病情的進(jìn)展有關(guān),其程度受基因多態(tài)性影響[10],還與喘鳴的發(fā)作次數(shù)有關(guān),有喘鳴再次發(fā)作的患者低于不再喘息發(fā)作的患者,提示它傾向于Th1發(fā)展趨勢(shì)[11]。本研究發(fā)現(xiàn),血清TLR2、Dectin、sCD14的蛋白濃度在毛細(xì)支氣管炎組及急性上呼吸道感染組中升高,提示它們共同參與呼吸道感染的天然免疫應(yīng)答;同時(shí)還發(fā)現(xiàn)毛細(xì)支氣管炎組血清Dectin蛋白濃度高于急性上呼吸道感染組,而TLR2和sCD14的蛋白濃度無(wú)差異,提示Dectin的反應(yīng)可能因病而異,對(duì)判斷疾病或許有一定的參考價(jià)值,而TLR2和sCD14對(duì)病毒的應(yīng)答可能沒(méi)有選擇性差異。相似的研究發(fā)現(xiàn),在上呼吸道感染小鼠模型中發(fā)現(xiàn),肺組織TLR3的表達(dá)升高,而在恢復(fù)期降到正常水平[12],進(jìn)一步提示TLR在上呼吸道感染的免疫反應(yīng)中也起了一定的作用。

        綜上所述,毛細(xì)支氣管炎及急性上呼吸道感染患兒血清TLR2、Dectin、sCD14濃度升高(P<0.01),提示在呼吸道感染急性期模式識(shí)別受體被激活,從而提升機(jī)體清除病原體的能力。檢測(cè)患兒模式識(shí)別受體的表達(dá),為毛細(xì)支氣管炎及急性上呼吸道感染發(fā)病機(jī)制的研究提供了理論依據(jù),為判斷病情提供參考價(jià)值。

        參考文獻(xiàn)

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        2013-08-06

        修回日期:2013-12-16

        浙江省溫嶺市科技局基金資助項(xiàng)目(No.2011-1-85)

        通迅作者:童夏生,E-mail:xshtzg@163.com

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