隋 霜 瑪依努爾·尼牙孜 朱開春 王 琳 陸 萍 焦 楨紀(jì) 莎

·臨床研究與應(yīng)用·

HPV分型檢測在維吾爾族和漢族宮頸癌機會性篩查中的意義*

隋 霜①②瑪依努爾·尼牙孜②朱開春②王 琳②陸 萍②焦 楨②紀(jì) 莎②

目的：探討人乳頭瘤病毒（HPV）分型檢測在維吾爾族和漢族宮頸癌機會性篩查中的意義。方法：采用宮頸細(xì)胞學(xué)檢查和HPV分型檢測對1 140例患者行宮頸癌機會性篩查，共438例患者在陰道鏡下行宮頸活檢，評價HPV分型檢測的診斷價值。結(jié)果：1 140例HPV總感染率為30.3%（345/1 140），檢出的高危型HPV主要型別依次為HPV16、58、52、18、45型。漢族HPV52型感染率高于維吾爾族，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=8.737，P=0.003）。1 140例患者中單一感染率為22.4%（255/1 140），多重感染率為6.1%（69/1 140），HPV分型檢測診斷宮頸病變的靈敏度為86.4%（209/242）、特異度為24.5%（48/196）、陽性預(yù)測值為58.5%（209/357）、陰性預(yù)測值為59.3%（48/81）。結(jié)論：維吾爾族和漢族HPV感染型別各有其自身特點，HPV分型檢測對宮頸病變的診斷有重要價值。

人乳頭瘤病毒 基因型 宮頸癌 篩查

宮頸癌占女性惡性腫瘤死亡人數(shù)的第2位，從不同的角度已證實高危型人乳頭瘤病毒（human papilloma virus，HPV）感染是宮頸癌及宮頸病變發(fā)生發(fā)展的必要條件。雖約80%女性在一生中感染過HPV，且大多為一過性感染，但僅一小部分進展為宮頸病變。不同高危型HPV的致病性不同，在宮頸病變發(fā)生發(fā)展過程中的作用不同，準(zhǔn)確的HPV檢測和分型技術(shù)對宮頸癌及癌前病變的臨床治療和預(yù)防至關(guān)重要。宮頸癌機會性篩查是一種被動性篩查，在患者因其他疾病就醫(yī)過程中對具有高危因素的人群進行宮頸癌的篩查。本研究探討HPV分型檢測在宮頸癌機會性篩查的意義。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 一般材料 收集2012年1月至2013年12月在新疆維吾爾自治區(qū)人民醫(yī)院婦科門診就診的自愿接受機會性篩查的1 140例患者。年齡為21～71歲，平均年齡（38.3±0.8）歲。漢族590例（51.75%），維吾爾族550例（48.25%）。對已檢測出高危型HPV陽性，或細(xì)胞學(xué)異常的438例患者在陰道鏡下行宮頸活檢，經(jīng)病理學(xué)證實漢族慢性宮頸炎為60例、CIN1為34例、CIN2為39例、CIN3為42例、宮頸癌為35例；維吾爾族慢性宮頸炎為67例、CIN1為35例、CIN2為40例、CIN3為45例、宮頸癌為41例。

1.1.2 納入標(biāo)準(zhǔn)1）有性行為史；2）自愿接受機會性篩查。

1.1.3 排除標(biāo)準(zhǔn)1）就診前有宮頸病變病史或子宮切除史者；2）有盆腔包塊病史、其他臟器腫瘤或其他嚴(yán)重疾病病史者；3）近1年內(nèi)已參加宮頸癌篩查者。

1.2 方法

從研究對象的宮頸管處常規(guī)刷取細(xì)胞，行液基細(xì)胞形態(tài)學(xué)分析和HPV分型檢測，對細(xì)胞學(xué)異常者或者已檢測出高危型HPV陽性者行陰道鏡檢查，對陰道鏡圖像異常者采取多點活檢送病理。研究對象按組織病理學(xué)診斷分為炎癥，CIN1，CIN2，CIN3和宮頸癌組。

1.2.1 HPV亞型檢測 HybriMax技術(shù)檢測HPV亞型的基本原理是先將病毒基因的DNA進行基因擴增，然后利用核酸分子快速導(dǎo)流雜交技術(shù)，使目的分子導(dǎo)流穿過固定有DNA探針的低密度基因芯片薄膜而發(fā)生快速雜交。實驗步驟為：樣本HPV的DNA提取、PCR擴增、核酸分子快速導(dǎo)流雜交、根據(jù)芯片上21種HPV亞型分布的相應(yīng)著色位點判讀結(jié)果。其中包括l5種HPVl6、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66和68型的高危型HPV；6種HPV6、11、42、43、44和CP8304型的低危型HPV；Biotin為顯色系統(tǒng)對照點，IC為內(nèi)參β-actin對照點（圖1）。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析

應(yīng)用SPSS 13.0軟件進行數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計。兩樣本率的比較采用χ2檢驗，特異度、敏感度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值為診斷價值的評價指標(biāo)。P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

圖1 HPV各亞型陽性及陰性判斷參考Figure 1 References of affirmative and negative judgments for HPV subtypes

2 結(jié)果

2.1 HPV感染的型別分布

1 140例HPV總感染率為30.3%（345/1 140），除HPV43和44型別外其余19種HPV型別均有檢出。高危型HPV的檢出主要型別依次是HPV16為8.4%（96/1 140）、HPV58為4.6%（53/1 140）、HPV52為3.9%（45/1 140）、HPV18為1.9%（22/1 140）、HPV45為1.9%（22/1 140）；低危型HPV的檢出型別依次是CP8304為2.3%（26/1 140）、HPV6為1.1%（13/1 140）、HPV11為0.4%（5/1 140）、HPV42為0.2%（2/1 140）（圖2）。漢族高危型HPV的檢出主要型別依次是HPV16為8.6%（51/590）、HPV58為5.3%（31/590）、HPV52為5.6%（33/590）、HPV45為2.2%（13/590）、HPV18為2.0%（12/590）；維吾爾族依次是HPV16為11.5%（63/550）、HPV58為4.0%（22/550）、HPV18為1.8%（10/550）、HPV52為2.2%（12/550）、HPV45為1.6%（9/550）。行漢族與維吾爾族患者高危型HPV主要型別的感染率比較，維吾爾族HPV16型感染率略高于漢族，差異無統(tǒng)計學(xué)意義；漢族HPV52型感染率高于維吾爾族，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=8.737，P= 0.003，表1）。

圖2 不同型別HPV感染率Figure 2 HPV infection rate of different types

表1 維、漢患者HPV感染的型別分布Table 1 Subtype distribution of HPV infection in Uygur and Han women

2.2 HPV單一感染率和多重感染率

1 140例患者單一感染率為22.4%（255/1 140），多重感染率為6.1%（69/1 140）。漢族和維吾爾族單一感染占HPV陽性者的比例分別為24.4%（144/590）和23.3%（128/550）。438例行宮頸活檢的患者中漢族、維吾爾族單一感染率在慢性宮頸炎組為46.7%（28/60）、43.3%（29/67），CIN1組為44.1%（15/34）、48.6%（17/35），CIN2組為46.2%（18/39）、45.0%（18/40），CIN3組為54.8%（23/42）、62.2%（28/45），宮頸癌組為68.6%（24/35）、70.7%（29/41）。維、漢患者各個病變級別的單一感染率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05，表2）。

2.3 不同級別宮頸病變中HPV亞型分布

1 140例患者中細(xì)胞學(xué)異常者共438例，即宮頸細(xì)胞學(xué)（TCT）結(jié)果為宮頸無明確診斷意義的非典型鱗狀上皮細(xì)胞（ASC-US及以上級別）或者已檢測出高危型HPV陽性者，在陰道鏡下行宮頸活檢。漢族和維吾爾族患者在慢性宮頸炎中HPV亞型主要型別分別均為HPV16、53、68型；CIN1主要型別均為HPV16、52、58型；CIN2分別為HPV16、53、45型和HPV16、58、18型；CIN3分別為HPV16、45、18型和HPV16、58、18型；宮頸癌主要型別均為HPV16、18、58型（表3）。

表2 維、漢患者各個病變級別的單一感染率比較Table 2 Single HPV infection rate in cervical lesions of different grades in Uygur and Han women

表3 不同級別宮頸病變中HPV亞型分布Table 3 Subtype distribution of HPV infection in cervical lesions of different grades

2.4 HPV分型檢測在高度宮頸病變診斷的評價

本研究以病理結(jié)果為參照標(biāo)準(zhǔn)，評價HPV分型檢測對預(yù)測高度宮頸上皮內(nèi)瘤變（≥CIN2）的臨床價值。HPV分型檢測診斷高度宮頸病變的靈敏度為86.4%（209/242）、特異度為24.5%（48/196），陽性預(yù)測值為58.5%（209/357）、陰性預(yù)測值為59.3%（48/81）（表4）。

表4 HPV分型檢測在宮頸病變篩查的臨床評價Table 4 Clinical evaluation of HPV subtype detection in cervical cancer screening

3 討論

高危型HPV持續(xù)感染是引起宮頸癌的主要原因［1-2］。HPV分型眾多，且不同型別分布存在地域性差異，不同型別的HPV致癌機制、致病能力不盡相同。本研究對本院門診行宮頸癌篩查群體中HPV感染率、型別分布以及與宮頸病變的關(guān)系進行研究，初步了解新疆地區(qū)HPV基因分型流行病學(xué)特征。本研究結(jié)果顯示HPV總感染率為30.3%（345/1 140），高危型HPV的檢出主要型別依次是HPV16、58、52、18、45型，并發(fā)現(xiàn)HPV58型的感染率位居第2位，與王鶴等［3］報道的宮頸癌中HPV58型位居第3位結(jié)果相似。在世界范圍內(nèi)，HPV58型在宮頸癌中的檢出率僅為2%左右［4］。一項針對全世界各國10 058例宮頸癌患者薈萃分析發(fā)現(xiàn)，全球范圍內(nèi)最主要的基因型是HPV16型，第2位是HPV18型，而其他基因型如HPV58、52型在亞洲較多，分布具有地域差異［5］。劉冬等［6］在HPV基因分型與宮頸病變的關(guān)系的研究中發(fā)現(xiàn)，HPV16、58、52、33型相關(guān)的感染與宮頸癌前病變關(guān)系密切，其中HPV16型感染更易導(dǎo)致病變進展及癌變發(fā)生。李霓等［7］在中國婦女HPV感染的多中心研究發(fā)現(xiàn)，HPV52、58型仍是中國特有的主要感染型別。邱琳等［8］對1 955例農(nóng)村婦女HPV感染狀況進行分析也發(fā)現(xiàn)，HPV58、52型是除HPV16型之外的常見型別，而張強等［9］對南寧地區(qū)1 789例HPV的檢測及結(jié)果分析發(fā)現(xiàn)HPV52型為最主要感染型別。本研究結(jié)果與上述研究結(jié)果相一致，提示HPV58、52型的分布存在地域性差異。

在維、漢對比的結(jié)果中，維吾爾族主要型別依次為HPV16、58、18、52、45型，漢族高危型HPV的檢出主要型別依次為HPV16、58、52、45、18型。維、漢高危型HPV主要型別的感染率比較，維吾爾族HPV16型感染率略高于漢族但差異無統(tǒng)計學(xué)意義，而漢族中HPV52型感染率高于維吾爾族，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。因此，本研究結(jié)果提示在HPV感染的總體分布上漢族和維吾爾族仍存在一定的差異。本研究對不同級別宮頸病變中HPV亞型分布結(jié)果分析發(fā)現(xiàn)，維、漢宮頸癌的型別分布位居前3位的是相同的，分別為HPV16、18、58型。由維、漢民族檢出的主要型別分布提示，HPV58型在新疆地區(qū)是導(dǎo)致宮頸癌較常見的1個亞型，而漢族中HPV52型感染率高于維吾爾族。新疆是宮頸癌高發(fā)區(qū)，維吾爾族婦女宮頸癌患病率及病死率明顯高于生活在同一個環(huán)境中的漢族婦女。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)居住在同一地區(qū)的維族和漢族型別總體分布不同，但導(dǎo)致維族和漢族宮頸癌的型別均是HPV16、18、58型。因此對本地區(qū)的HPV感染型別研究中應(yīng)重視HPV52、58型別的感染，僅HPV型別分布的不同并不能解釋維吾爾族宮頸癌高發(fā)的原因，還需要從宿主、病毒雙方面研究來解釋這一現(xiàn)象。

1 140例HPV總感染率為30.3%（345/1 140），漢族和維吾爾族族單一感染占HPV陽性者的比例分別為24.4%和23.3%，維、漢單一感染率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。有研究表明HPV多型感染可以增加HPV持續(xù)感染的時間，使其不易清除［10］。另有研究發(fā)現(xiàn)，高度宮頸上皮內(nèi)瘤變和宮頸癌中HPV多重感染較正常宮頸明顯增高，提示多型別混合感染對宮頸病變發(fā)展程度有潛在影響［11］。樓微華等［12］研究發(fā)現(xiàn)HPV18型多重感染者中發(fā)生宮頸高級別病變的比例顯著高于HPV18型單一感染者。本研究結(jié)果并不支持多重感染可促進宮頸病變的發(fā)展，可能與HPV18型別并不在本研究人群中占有主導(dǎo)地位有關(guān)。因此對HPV多型感染是否增加持續(xù)感染和宮頸病變發(fā)生的風(fēng)險，仍需大量大樣本的流行病學(xué)資料及其病因?qū)W機制的深入研究。

已有研究結(jié)果顯示不同HPV亞型導(dǎo)致宮頸癌前病變的特異性自然進展歷程［13］。本研究發(fā)現(xiàn)HPV分型檢測診斷宮頸病變的靈敏度為86.4%（209/242）、特異度為24.5%（48/196）、陽性預(yù)測值為58.5%（209/ 357）、陰性預(yù)測值為59.3%（48/81），結(jié)果提示HPV分型檢測具有較高敏感性，但特異性仍較低。任佳玢等［14］比較發(fā)現(xiàn)導(dǎo)流雜交基因芯片、實時定量PCR方法的HPV分型和定量檢測與第2代雜交捕獲法（HC-Ⅱ）檢測高危型HPV結(jié)果具有較好的一致性，對于CIN2及以上病變有較高的靈敏度和陰性預(yù)測值，可用于宮頸病變的初步篩查。因HPV16和18型陽性婦女發(fā)展成為CIN2及以上病變的風(fēng)險高，病情進展快［15］，HPV分型檢測對宮頸病變的診斷及隨訪具有重要的診斷價值，可聯(lián)合宮頸液基細(xì)胞檢查，從而提高其特異性并在安全范圍內(nèi)可適當(dāng)延長篩查間隔。

總之，本研究提示HPV亞型在維吾爾族和漢族分布中不完全相同。HPV58型是新疆地區(qū)導(dǎo)致宮頸癌較常見的一個亞型，HPV52型在漢族中感染率高于維吾爾族，并發(fā)現(xiàn)HPV多重感染未增加宮頸病變的嚴(yán)重程度，HPV分型檢測對宮頸病變的診斷及隨訪具有重要的診斷價值。

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（2014-02-06收稿）

（2014-06-15修回）

Significance of human papilloma virus subtype detection in opportunistic screening for cervical cancer in Uygur and Han women

Shuang SUI1,2,Mayenur NIYAZ2,Kaichun ZHU2,Lin WANG2,Ping LU2,Zhen JIAO2,Sha JI2

Mayenur NIYAZ;E-mail:mynr68@126.com
1Xinjiang Medical University Graduate School,Urumqi 830054;2Gynecology Department,People's Hospital of Xinjiang Uygur Autonomous Region,Urumqi 830001,China
This work was supported by the National Natural Science Foundation of China(No.81160317)

Objective:This study investigates the significance of human papilloma virus(HPV)subtype detection in opportunistic screening for cervical cancer in Uygur and Han women.Methods:Flow-through hybridization gene chip and thin-prep cytology test were used to detect HPV in cervical cell samples from 1140 females.A total of 428 patients had undergone cervical biopsies through colposcopy.The diagnostic results of the HPV subtype test for cervical lesions were evaluated on the basis of histology.Results:Total HPV infection rate for the 1140 cervical samples was 30.3%.The most common HPV subtypes were HPV16,HPV58,HPV52,HPV18, and HPV45.HPV52 infection rate was higher in Han women than in Uygur women,with statistically significant differences between the two(χ2=8.737,P=0.003).Among these cervical samples,the single HPV infection rate was 22.4%(255/1140),whereas the multiple HPV infection rate was 6.1%(69/1140).The sensitivity and specificity of the HPV subtype test for cervical lesions were 86.4%and 24.5%,respectively.The positive and negative predictive values were 58.5%and 59.3%.Conclusion:HPV infection subtypes in Ugyur and Han women have unique characteristics.Subtype detection is important in opportunistic screening for cervical cancer.

human papilloma virus,genotype/subtypes,cervical cancer,screening

10.3969/j.issn.1000-8179.20140212

①新疆醫(yī)科大學(xué)研究生院（烏魯木齊市830054）；②新疆維吾爾自治區(qū)人民醫(yī)院婦科

?本文課題受國家自然科學(xué)地區(qū)科學(xué)基金項目（編號：81160317）資助

瑪依努爾·尼亞孜 mynr68@126.com

隋霜 在讀博士，主治醫(yī)師。專業(yè)方向為HPV導(dǎo)致宮頸癌發(fā)生的發(fā)病機制。

E-mail：suishuang1983@163.com