王中東 黃麥華

( 1.山東省泰山療養(yǎng)院，山東 泰安 271000； 2.泰山醫(yī)學(xué)院附屬泰山醫(yī)院，山東 泰安 271000)

丙型肝炎是一種主要經(jīng)血液傳播的疾病，丙型肝炎病毒(hepatitisC virus, HCV)慢性感染可導(dǎo)致肝臟慢性炎癥壞死和纖維化，感染者中絕大部分發(fā)展成慢性感染進(jìn)而發(fā)生肝硬化和肝細(xì)胞性肝癌[1]。世界衛(wèi)生組織估計(jì)世界大約2.35%的人感染HCV，每年新發(fā)丙型肝炎病例約3.5萬(wàn)例,是嚴(yán)重威脅人類健康的傳染病之一，呈世界性分布。丙型肝炎病毒是丙型肝炎的病原體，其致病機(jī)制主要是通過(guò)病理性免疫應(yīng)答導(dǎo)致肝細(xì)胞損傷，它還有誘發(fā)原發(fā)性肝癌的可能。而高度慢性化是該病的最大特征[2]。由于尚無(wú)有效的預(yù)防和治療方法，因此，控制HCV感染的形勢(shì)十分嚴(yán)峻，而早發(fā)現(xiàn)、早診斷和早治療是防控HCV傳染源、阻斷傳播途徑最為有效的手段。目前臨床對(duì)丙型肝炎的診斷仍是以臨床癥狀結(jié)合HCV-Ab、HCV-CAg、HCV-RNA等實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)為臨床診斷依據(jù)。ALT、AST、γ-GT是體現(xiàn)肝細(xì)胞損害和壞死的特異性強(qiáng)、靈敏度高的指標(biāo)。本實(shí)驗(yàn)旨在探討丙肝患者血清HCV-Ab、HCV-cAg、HCV-RNA檢測(cè)及肝功能的相關(guān)性研究。

1 材料與方法

1.1標(biāo)本來(lái)源 收集2012.10-2013.10山東省泰山療養(yǎng)院門診和住院的186例丙型肝炎患者資料，診斷符合2000年全國(guó)傳染病寄生病學(xué)術(shù)會(huì)議修訂的病毒性肝炎的防治方案，男128例，女58例，年齡21～77歲，平均44.3歲。全部標(biāo)本按檢驗(yàn)標(biāo)本采集手冊(cè)要求進(jìn)行采集，排除甲、乙、戊型肝炎感染。

1.2試劑方法與儀器

1.2.1HCV-Ab檢測(cè) 采用珠海麗珠試劑股份有限公司生產(chǎn)的HCV-Ab ELISA試劑盒，按說(shuō)明書上的方法操作，陽(yáng)性結(jié)果經(jīng)二種方法復(fù)檢。酶標(biāo)儀為DR-200Be。

1.2.2HCV-cAg檢測(cè) 采用山東萊博生物科技有限公司生產(chǎn)的HCV-cAg ELISA試劑盒，按說(shuō)明書上的方法操作，陽(yáng)性結(jié)果經(jīng)二次復(fù)檢。酶標(biāo)儀為DR-200Be。

1.2.3HCV-RNA檢測(cè) 采用中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司生產(chǎn)的丙肝病毒核酸(PCR-熒光探針?lè)?檢測(cè)試劑盒，按說(shuō)明書上的方法操作。儀器為7500 Real Time PCR System,儀器操作按說(shuō)明書，檢測(cè)線性范圍為1.0×103～1.0×108IU/ml,結(jié)果超過(guò)1.0×103即報(bào)告為陽(yáng)性。

1.2.4ALT、AST、γ-GT檢測(cè) 采用全自動(dòng)生化分析儀，儀器為羅氏DPP，為封閉式試劑, 按說(shuō)明書上的方法操作。ALT、AST<40 U/L為正常，γ-GT<50 U/L為正常。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 數(shù)據(jù)采用EXCEL軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料的比較采用t檢驗(yàn)，以P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1HCV-Ab、HCV-cAg、HCV-RNA檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性率 186例丙型肝炎患者HCV-Ab陽(yáng)性率為95.7%，HCV-cAg陽(yáng)性率為25.3%，HCV-RNA陽(yáng)性率為82.7%。結(jié)果顯示，丙肝抗體檢測(cè)特異性和靈敏度高，是目前醫(yī)院輸血前/術(shù)前血檢中檢測(cè)丙肝的主要方法。HCV-RNA的檢測(cè)有助于丙肝的早期及明確診斷。當(dāng)機(jī)體出現(xiàn)抗HCV抗體之后，體內(nèi)HCV核心抗原和抗體相結(jié)合，抗原檢出率降低或不能檢出，因此HCV-cAg檢出率相對(duì)來(lái)說(shuō)比較低(表1)。

表1 丙肝患者HCV-Ab、HCV-Ag及HCV-RNA的檢測(cè)結(jié)果

2.2丙肝患者HCV-Ab、HCV-cAg、HCV-RNA感染陽(yáng)性模式及其簡(jiǎn)要意義 186例中112例HCV-Ab、HCV-RNA同時(shí)陽(yáng)性的說(shuō)明丙肝病毒感染至少70天以后，慢性丙肝病毒感染，有傳染性，臨床要加以干預(yù)治療。34例HCV-Ab、HCV-cAg、HCV-RNA全部陽(yáng)性說(shuō)明此時(shí)丙肝抗原沒(méi)有被抗體完全中和，抗原抗體同時(shí)存在，有傳染性，要結(jié)合ALT、AST 、γ-GT進(jìn)行抗病毒積極治療(表2)。

表2 丙肝患者HCV-Ab、HCV-Ag、HCV-RNA感染陽(yáng)性模式及簡(jiǎn)要意義

2.3HCV-Ab、HCV-cAg、HCV-RNA均為陽(yáng)性的ALT、AST、γ-GT檢測(cè)結(jié)果與單純HCV-Ab陽(yáng)性的比較 186例中34例均為陽(yáng)性的丙肝病毒，肝功能異常的與單純HCV-Ab陽(yáng)性的比較(P<0.01)且肝功能異常水平隨著HCV-RNA水平的升高而增加，經(jīng)相關(guān)性分析，HCV-RNA載量與ALT、AST、γ-GT水平之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)(表3)。

表3 丙肝抗原抗體HCV-RNA均為陽(yáng)性的患者與單純丙肝抗體陽(yáng)性患者

注：兩組比較，﹡P<0.05，﹟P<0.01。

3 討 論

目前我國(guó)最常使用的檢測(cè)丙肝抗體的方法就是ELISA法。它具有簡(jiǎn)單、快速、方便的特點(diǎn)。從表1看出HCV-Ab陽(yáng)性率為95.7%，丙肝抗體檢測(cè)特異性和靈敏度高，是目前醫(yī)院輸血前/術(shù)前血檢中檢測(cè)丙肝的主要方法，在日常輸血前/術(shù)前常規(guī)檢測(cè)中，ELISA法檢測(cè)丙肝抗體具有重要的臨床價(jià)值。但是ELISA試劑為篩檢試劑，存在一定數(shù)量的假陰性和假陽(yáng)性結(jié)果。ELISA在檢測(cè)過(guò)程中影響因素諸多如類風(fēng)濕因子、高免疫球蛋白血癥、標(biāo)本中超氧化物歧化酶(SOD)的干擾、用于固相包被的HCV基因工程抗原不純等均可造成假陽(yáng)性結(jié)果[3]。在檢測(cè)過(guò)程中影響因素也很多如加樣時(shí)間過(guò)長(zhǎng)、檢驗(yàn)速度過(guò)快、洗板等均可造成假陽(yáng)性結(jié)果[4]。HCV-RNA陽(yáng)性率為82.7%，HCR-RNA法檢測(cè)陽(yáng)性率卻低于ELISA法，可能原因有ELISA試劑盒包被有C、NS3、NS4和NS5等4種抗原，能檢出機(jī)體針對(duì)不同區(qū)域抗原產(chǎn)生的多種抗體；而PCR法檢測(cè)HCV-RNA影響因素多，特別是HCV病毒為RNA，易被自然界大量存在的RNA酶降解，從而出現(xiàn)假陰性；另外機(jī)體內(nèi)HCV病毒己被清除，HCV-RNA為陰性時(shí)，抗體會(huì)持續(xù)存在一段時(shí)間；以上分析可知，HCV-RNA陰性，并不能排除HCV的存在。

HCV-cAg陽(yáng)性率為25.3%，HCV-cAg檢出率低的原因，可能是由于有抗體的存在，干擾了抗原的檢測(cè)或樣本中的HCV抗體可能與用于核心抗原檢測(cè)的單克隆抗體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合抗原而造成HCV-cA g的假陰性。但是在HCV感染后至抗HCV抗體產(chǎn)生之前還有一段較長(zhǎng)時(shí)期約40～70天，稱為感染后血清陽(yáng)轉(zhuǎn)前的窗口期。HCV核心抗原作為HCV感染者體內(nèi)出現(xiàn)的早期感染的標(biāo)志，幾乎與HCV-RNA同時(shí)出現(xiàn)。一般情況下，丙型肝炎病毒感染者在感染后數(shù)周內(nèi)血清HCV抗原出現(xiàn)，在HCV感染后至抗HCV抗體產(chǎn)生之前還有一段感染后血清陽(yáng)轉(zhuǎn)前的窗口期(PWP)HCV，核心抗原的平均檢出時(shí)間只比HCV-RNA晚約1天。HCV抗原檢測(cè)耗時(shí)短，方法與常規(guī)酶免疫實(shí)驗(yàn)相似，不用添加儀器設(shè)備，大大縮短了窗口期。但是，當(dāng)機(jī)體出現(xiàn)抗HCV抗體之后，體內(nèi)HCV核心抗原和抗體相結(jié)合，抗原檢出率降低或不能檢出。因此，HCV核心抗原可應(yīng)用于HCV感染早期診斷[5]。此法可以作為補(bǔ)充檢測(cè)，但受檢測(cè)方法、儀器等條件限制，靈敏度較差，從我們的數(shù)據(jù)來(lái)看，方法學(xué)有待于改進(jìn)提高。

HCV各種檢測(cè)方法各有利弊，從表2可以看出，HCV-RNA、HCV-Ab、HCV-Ag聯(lián)合檢測(cè)有利于提高HCV的檢出率，對(duì)臨床疑似HCV感染的患者可先初篩HCV-Ab、HCV-Ag，初篩陽(yáng)性則用HCV-RNA進(jìn)行確認(rèn)，并對(duì)確認(rèn)HCV陽(yáng)性的患者進(jìn)行抗病毒療效監(jiān)測(cè)，協(xié)助臨床對(duì)HVC感染者早發(fā)現(xiàn)，早治療[6]。提高丙肝病毒檢出率、減少丙肝抗體窗口期漏診率(丙肝游離核心抗原檢測(cè)時(shí)間段：感染后14天至70天可檢出，70天后丙肝游離抗原消失、丙肝抗體產(chǎn)生，抗體可檢測(cè)時(shí)間段為70天后產(chǎn)生，自身免疫病或免疫功能缺陷的病人，丙肝抗體的檢測(cè)時(shí)間可長(zhǎng)達(dá)2年)。

從表3看出，本研究通過(guò)對(duì)34例HCV-Ab、HCV-cAg、HCV-RNA均為陽(yáng)性的ALT、AST、γ-GT檢測(cè)結(jié)果與27例單純HCV-Ab陽(yáng)性的結(jié)果比較，全陽(yáng)組ALT、AST、γ-GT高于單陽(yáng)組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。ALT、AST、γ-GT是體現(xiàn)肝細(xì)胞損害和壞死的特異性強(qiáng)、靈敏度高的指標(biāo)，丙型肝炎患者血清中ALT、AST、γ-GT濃度可間接反映HCV在體內(nèi)的狀態(tài)，這就需要臨床充分掌握丙肝患者病毒感染情況，定期進(jìn)行療效評(píng)價(jià)。同時(shí)從結(jié)果中我們還發(fā)現(xiàn)ALT、AST 、γ-GT水平隨著HCV-RNA含量的升高而增加，全陽(yáng)組明顯高于單陽(yáng)組(P<0.01)，差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。HCV-RNA水平則可間接反映肝細(xì)胞炎性損傷程度。檢測(cè)HCV-RNA和ALT 、AST 、γ-GT可指導(dǎo)臨床，為HCV的治療效果提供實(shí)驗(yàn)室理論依據(jù)。

通過(guò)對(duì)186例丙肝患者的資料分析，聯(lián)合檢測(cè)HCV-Ab、HCV-cAg、HCV-RNA有利于提高HCV的檢出率，對(duì)臨床疑似HCV感染的患者可先初篩HCV-Ab、HCV-cAg，初篩陽(yáng)性則用HCV-RNA進(jìn)行確認(rèn)，協(xié)助臨床對(duì)HVC感染者早發(fā)現(xiàn)，早治療。同時(shí)還發(fā)現(xiàn)HCV-RNA水平與ALT、 AST、 γ-GT濃度呈正相關(guān)，提示丙型肝炎患者血清中ALT、 AST、 γ-GT濃度可間接反映HCV在體內(nèi)的狀態(tài)，這就要求臨床定期對(duì)丙肝患者進(jìn)行肝功能檢測(cè)，及時(shí)進(jìn)行有效的抗病毒干預(yù)治療，更好的服務(wù)于丙肝患者。

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