張 衛(wèi) 曾 卓 韓 彬 王 蔚

(1. 廣東藥學(xué)院附屬第一醫(yī)院心內(nèi)科，廣東 廣州 510080； 2. 廣東藥學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)院，廣東 廣州 510080)

抵抗素是2001年由Steppan 首次報(bào)道由單核細(xì)胞分泌的富含半胱氨酸的炎性細(xì)胞因子，有研究表明，抵抗素與肥胖、糖尿病、胰島素抵抗有密切相關(guān)[1]。但對(duì)抵抗素與高血壓的相關(guān)關(guān)系報(bào)道甚少。本研究對(duì)重組腺病毒介導(dǎo)后自發(fā)性高血壓大鼠血清抵抗素與血壓水平的相關(guān)關(guān)系進(jìn)行探討。

1 材料與方法

1.1 材料

10周齡shr,spf級(jí)高血壓大鼠36只，雄性，體重(220±15)g，購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司。大鼠均在中山大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心SPF級(jí)實(shí)驗(yàn)環(huán)境下籠養(yǎng)。

1.2 方法

將36只10周齡高血壓大鼠(雄性)，隨機(jī)平均分成病毒組及空白對(duì)照組(n=18)。其中病毒組經(jīng)尾靜脈注射載有抵抗素基因的重組腺病毒(上海吉?jiǎng)P基因化學(xué)技術(shù)有限公司提供)1x10PFu/mouse(用生理鹽水稀釋至0.3 ml)后隨機(jī)平均分成第一周組、第四周組、第八周組3組(每組n=6)；而空白對(duì)照組則連續(xù)經(jīng)尾靜脈注射等體積生理鹽水后也隨機(jī)平均分為第一周組、第四周組、第八周組3組(每組n=6)。

1.2.1采用無(wú)創(chuàng)尾動(dòng)脈儀測(cè)血壓 首先開啟大鼠尾動(dòng)脈血壓計(jì)(安徽正華儀器公司)預(yù)熱約20分鐘后進(jìn)行壓力信號(hào)校正調(diào)零。根據(jù)大鼠體重將其裝入固定盒內(nèi)固定后放入動(dòng)物固定架, 大鼠尾部通過加壓套插入至接近尾根部,此時(shí)鼠尾應(yīng)該穿過脈搏傳感器插入尾部加熱器中的加熱管內(nèi), 使鼠尾剛好處于脈搏傳感器的“脈搏信號(hào)傳感片”上方, 并調(diào)節(jié)鼠尾壓迫片使傳感片緊貼鼠尾下方的尾動(dòng)脈,待大鼠脈搏穩(wěn)定后用橡皮球充氣加壓至脈搏完全消失后繼續(xù)加壓20 mmHg左右，然后緩慢放氣減壓至脈搏信號(hào)恢復(fù)起始水平，從記錄系統(tǒng)中讀取收縮壓、舒張壓。一般連續(xù)測(cè)量三次，取平均值。

1.2.2測(cè)定血清抵抗素 采集清晨空腹12 h以上的大鼠靜脈血2～3 ml，按試劑盒說明離心后取血清儲(chǔ)存在-70 ℃冰箱中待檢測(cè)抵抗素水平用。大鼠抵抗素(Resistin)ELISA檢測(cè)試劑盒 (上海朗頓生物科技有限公司提供),采用競(jìng)爭(zhēng)性酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)法，試劑的配置及操作均按照說明書進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié) 果

2.1 各組高血壓大鼠的收縮壓、舒張壓及血清中抵抗素水平的比較(見表1)。

表1 各組大鼠的血壓及血清抵抗素的比較

注：*與對(duì)照組比較，P<0.05；※與對(duì)照組比較，P<0.05；#與對(duì)照組比較，P<0.05。

2.2 高血壓大鼠血清中抵抗素水平與收縮壓的相關(guān)性 相關(guān)系數(shù)r=0.639，P=0.000，兩者呈正相關(guān)。(見圖1)

2.3 高血壓大鼠血清中抵抗素水平與舒張壓的相關(guān)性 相關(guān)系數(shù)r=0.613， P=0.000，兩者呈正相關(guān)。(見圖2)

圖1 抵抗素與收縮壓的相關(guān)性分析

圖2 抵抗素與舒張壓的相關(guān)性分析

3 討 論

高血壓病是心血管內(nèi)科常見疾病，易導(dǎo)致心、腦、腎、眼底等靶器官損害。由于其發(fā)病病因及機(jī)制涉及到遺傳和環(huán)境相互作用，目前對(duì)高血壓病的發(fā)病機(jī)制仍未明確[2]。而抵抗素是存在于血漿中的一種脂肪組織特異性激素，與肥胖、胰島素抵抗等有密切相關(guān)性，提示其可能與高血壓病的發(fā)生、發(fā)展有密切關(guān)系。因此，本研究通過重組腺病毒介導(dǎo)的高抵抗素血癥的自發(fā)性高血壓大鼠模型，來(lái)探討抵抗素與血壓水平的相關(guān)關(guān)系。

本研究顯示，腺病毒介導(dǎo)的高胰島素血癥的自發(fā)性高血壓組的的收縮壓及舒張壓水平高于對(duì)照組，以第一周及第四周有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，其中以第四周血壓升高為更明顯(P<0.05)；病毒組的血清抵抗素水平較對(duì)照組升高，以第一周及第四周有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，其中以第四周升高幅度明顯(P<0.05)；抵抗素與收縮壓(r=0.639,P=0.000)，舒張壓(r=0.613,P=0.000)均呈正相關(guān)，提示血清中抵抗素可促進(jìn)自發(fā)性高血壓大鼠的血壓升高。提示與報(bào)道一致[3]。其可能的機(jī)制是抵抗素不僅與胰島素抵抗密切相關(guān)[4-6]，還可能激活了NF-кB信號(hào)通路，誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞激活，通過促進(jìn)內(nèi)皮素-1、內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子-1、基質(zhì)金屬蛋白酶和單核細(xì)胞趨化因子1的表達(dá)導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞功能失調(diào)[7，8]。其次抵抗素還可以激活細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶和磷酯酰肌醇-3激酶通路促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞增殖和遷移，使血管內(nèi)膜增厚、硬化，管壁阻力增加，從而參與高血壓的發(fā)生、發(fā)展[9，10]。

綜上所述，本研究結(jié)果表明自發(fā)性高血壓大鼠的血清抵抗素升高可促進(jìn)收縮壓、舒張壓的升高，并且血清中抵抗素的水平與收縮壓、舒張壓呈正相關(guān)關(guān)系，提示抵抗素在高血壓病的發(fā)生、發(fā)展起一定的作用。因研究樣本量較小，有待進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量進(jìn)行前瞻性的研究證實(shí)。

[1] Kotanik,Adachi S,Tsuzaki K， et al. The association between resisti high-density lipprotein cholesterol and arotid atherosclerosis in eldly women with hypertension[J]. Int J cardiol,2010,141(2):193-194.

[2] 廖新學(xué),王禮春,李欣.高血壓基礎(chǔ)與臨床[M].北京：人民軍醫(yī)出版社,2011,14-22.

[3] 曾龍歡,朱冰波,范利,等.老年男性血清抵抗素水平與高血壓的關(guān)系[J].中華老年心腦血管病雜志，2014,4(16)：349-352.

[4] Mabrouk R,Ghareeb H,Shehab A， et al. Serum visfatin resistin and IL-8 in A group of Egyptian obese diabetic and non diabetic individuals[J].Egypt J Immanol,2013,20(1):1-11.

[5] Baker JF,Morale M, Qatunani M， et al.Resistin levels in lupus and associations with disease-specific measures,insulin resistin and coronary calcification[J]. Rhaumatol,2011, 38 (11):2369-2375.

[6] Seki G,Yamada H. insulin resistance obesity , hypertension and renal sodium transport[J]. Int hypertens,2011,391-762.

[7] Knshigama A,Sakoda H,Oue N， et al. Resistin like moleculeβis abundantly expressed infoam cellsand is involved in atherosclerosis developmemt[J].Arterioscler Thromb Vasc Biol, 2013,33: 1986-1993.

[8] Yaseen F,Jaled A,Aftab J,et al. Circulating levels of resistin, IL-6 and lipid profile in eldly patients with ischemic heart disease with and without diabetes[J].Biomarlc Med,2012,6:97-102.

[9] 付景云,宋滇平,李紅.等.2型糖尿病患者血清抵抗素水平與高血壓相關(guān)性研究[J].山東醫(yī)藥,2012,52(28):80-82.

[10] 王小潔,彭清,陳梅,等.血清抵抗素水平與高血壓的相關(guān)性[J].臨床心血管病雜志,2010,26(6):418-420.