羅敏生，肖丹，羅敏濤

臨床研究

CDCD4 4+CD+CD2929++輔助性T T細胞在脊髓損傷患者的表達與臨床意義

羅敏生1，肖丹2，羅敏濤1

1西麗人民醫(yī)院骨科，廣東深圳518055；2廣東省人民醫(yī)院骨科，廣東廣州510080

目的探索CD4+CD29+輔助性T細胞在脊髓損傷患者的表達與臨床意義。方法收集脊髓損傷患者75例，以50例健康人作為對照組，采用流式細胞術檢測外周血CD4+CD29+輔助性T細胞及其胞內細胞因子γ干擾素（IFN-γ）及白介素4（IL-4）含量；分別在傷后第3及7天復查三者，并分析三者與Frankel分級的相關性。結果與正常人比較，脊髓損傷患者CD4+CD29+T細胞及IL-4含量明顯升高，而IFN-γ含量明顯降低（P＜0.05）；治療第3天，CD4+CD29+T細胞及IL-4較受傷第1天均有不同程度下降，而IFN-γ不同程度回升，其中以D及E級的改變明顯（P＜0.05）。治療第7天，CD4+CD29+T細胞及IL-4繼續(xù)下降，IFN-γ繼續(xù)回升，其中D及E級患者的CD4+CD29+T細胞、IFN-γ及IL-4均較day3有顯著性差異（P＜0.05）。相關性分析提示CD4+ CD29+T細胞及IL-4均與Frankel分級具有顯著正相關性，而IFN-γ與Frankel分級呈顯著負相關性。結論CD4+CD29+輔助性T細胞及IL-4升高，而IFN-γ降低是脊髓損傷的重要免疫特征，與病情轉歸相關，且與損傷程度呈相關性，因此具有重要臨床意義。

脊髓損傷；CD4+CD29+輔助性T細胞；Frankel分級；細胞因子

脊髓損傷是骨外科學的難題，主要是重癥損傷的預后差，神經缺損無法修復而導致高致殘率。近年研究發(fā)現，脊髓損傷后可導致一系列免疫反應，從而加重脊髓的繼發(fā)性損傷［1］，參與此類免疫反應的細胞包括CD4+輔助性及CD8+殺傷性T細胞［2］。作為一類重要的輔助性T細胞，CD4+CD29+T細胞是否參與脊髓損傷患者的免疫過程，目前尚無探討。為此，筆者探討了不同損傷程度的患者在不同時間點的CD4+CD29+T細胞及其細胞因子變化，發(fā)現其與損傷程度相關，并且與病情轉歸緊密聯系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

以2011年1月~2014年1月我院骨科收治的脊髓損傷患者作為觀察對象。根據脊柱外傷史，傷后出現相應平面感覺及運動障礙，并結合核磁共振成像檢查，確診脊髓損傷［3］。共入選75例，男性57例，女性18例，年齡21~63歲，平均42.36±21.25歲。其中脊髓震蕩9例，脊髓挫傷與出血18例，脊髓斷裂9例，脊髓受壓32例，馬尾神經損傷7例。按照Frankel分級［4］，A、B、C、D及E級患者分別為16、15、15、17及12例。選取同期到我院進行體檢的50例正常人作為對照組，男38例女12例，年齡40.19±20.37歲，兩組的年齡及性別無顯著性差異。

1.2 流式細胞術檢測

以上患者均為受傷當日送至我院，遂急診采集外周靜脈血3 ml，抗凝后采用流式細胞術檢測CD4+CD29+ T細胞及其胞內細胞因子IFN-γ及IL-4百分含量［5］。以上患者以激素、脫水、營養(yǎng)神經為基礎治療，視脊柱骨折的類型和致壓物的部分等因素而定，并對神經功能缺損嚴重患者進行高壓氧治療［6］。在受傷的第3及7天再次進行上述檢測。

1.3 統計學處理

定量資料采用均數±標準差表示，采用獨立樣本t檢驗比較兩組間的差異，采用重復測量方差分析比較不同時間點同一指標的差異，采用單因素方差分析比較同一時間點同一指標的差異。運用統計軟件包SPSS 17.0分析數據，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 傷后第1天與正常人的比較

與正常人比較，脊髓損傷患者CD4+CD29+T細胞及IL-4含量明顯升高，而IFN-γ含量明顯降低，其中以CD4+CD29+T細胞的改變最為明顯（P＜0.05，表1）。

表1 脊髓損傷患者及正常人CD4+CD29+T細胞及細胞因子含量比較

2.2 脊髓損傷患者傷后第3及7天變化

傷后第3天，CD4+CD29+T細胞及IL-4較受傷第1天均有不同程度下降，而IFN-γ不同程度回升，其中以D及E級的改變明顯，A級患者變化最不明顯。傷后第7天，CD4+CD29+T細胞及IL-4繼續(xù)下降，IFN-γ繼續(xù)回升，其中D及E級患者的CD4+CD29+T細胞、IFN-γ及IL-4均較day3有顯著性差異（P＜0.05），均已恢復至與正常人無統計學差異（P>0.05，表2）。

表2 脊髓損傷患者治療第3及7天CD4+CD29+T細胞、IFN-γ及IL-4含量變化

2.3 相關性分析

通過分析CD4+CD29+T細胞及其細胞因子與Frankel分級的相關性，發(fā)現CD4+CD29+T細胞及IL-4均與Frankel分級具有顯著正相關性，而IFN-γ與Frankel分級呈顯著負相關性，具有統計學意義（表3）。

表3 CD4+CD29+T細胞及其細胞因子與Frankel分級的相關性分析

3 討論

神經免疫學是近年的研究熱點，并且已經發(fā)現免疫因素在神經組織的損傷與保護中扮演重要角色，如鄭明華[7]等發(fā)現載脂蛋白E擬肽可通過抗炎作用，糾正實驗性自身免疫性腦脊髓炎小鼠腦脊髓的CD4+及CD8+T淋巴細胞的失衡狀態(tài)，從而促進腦脊髓炎的恢復。在CD4+輔助性T細胞中，CD4+CD29+T細胞是一個重要的亞群，其細胞膜表面表達CD29分子，后者是血管黏附因子的一種，可促進細胞間的接觸從而增加抗原呈遞效應，最終促進免疫反應的產生，對疾病的結局起到不同作用[8]。CD4+CD29+T細胞可分泌多種細胞因子，具有代表性的是IFN-γ及IL-4，前者屬于Th1類細胞因子，主要誘導細胞免疫；IL-4屬于Th2類細胞因子，可誘導體液免疫［9］。但CD4+CD29+T細胞在脊髓損傷起何種作用，目前未見相關報道。

本研究發(fā)現，與正常人比較，脊髓損傷患者CD4+ CD29+T細胞及IL-4含量明顯升高，該結果與侯慧清等［10］報道的吉蘭—巴雷綜合征急性期患者CD4+ CD29+T細胞升高具有抑制性，初步說明此兩者可能是脊髓損傷的不利因素；而IFN-γ含量明顯降低，初步說明IFN-γ可能是脊髓損傷的保護性因素。通過治療的觀察可進一步印證上述判斷：病程中的第3天（多數患者已接受激素治療），CD4+CD29+T細胞及IL-4較受傷第1天均有不同程度下降，而IFN-γ不同程度回升，其中以輕度損傷的D及E級的患者改變明顯，但最為嚴重的A級患者變化最不明顯。在病程的第7天，CD4+CD29+T細胞及IL-4繼續(xù)下降，IFN-γ繼續(xù)回升，D及E級患者的CD4+CD29+T細胞、IFN-γ及IL-4均較第3天有顯著性差異，且均已恢復至與正常人無統計學差異的水平。因此，從第3及第7天的病情轉歸可以看出，CD4+CD29+ T細胞及IL-4很可能是脊髓損傷的不利因素，而IFN-γ是有利因素。由于IFN-γ屬于Th1類、IL-4屬于Th2類，因此在急性外傷性脊髓損傷的患者當中，CD4+CD29+ T細胞所誘導的免疫類型為體液免疫。

相關性顯示CD4+CD29+T細胞及IL-4均與Frankel分級具有顯著正相關性，而IFN-γ與分級呈顯著負相關性，說明脊髓損傷程度越重，CD4+CD29+T細胞及IL-4含量越高，而IFN-γ含量越低，提示脊髓損傷后可能導致CD4+CD29+T細胞趨化至損傷部位，釋放出IL-4等細胞因子，促進該部位產生炎癥，損傷程度越重，上述免疫效應更為顯著［11］。在炎癥反應放大的情況下，IFN-γ被大量消耗用于抗炎從而導致含量下降。結果糖皮質激素等治療，上述失衡的免疫狀態(tài)得以被改善，亦即CD4+CD29+T細胞的趨化效應減弱，分泌IL-4減少，IFN-γ含量增加［12-16］?？偠灾珻D4+CD29+輔助性T細胞及IL-4升高，而IFN-γ降低是脊髓損傷的重要免疫特征，與病情轉歸相關，且與損傷程度呈相關性，因此具有重要臨床意義。

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The expression and clinical significances of CD4+CD29+T cells for patients with acute spinal cord injury

LUO Minsheng1,XIAO Dan2,LUO Mintao1
1Department of orthopaedics,Xili Hospital,Shenzhen 518055,China;2Department of orthopaedics,Guangdong general hospital, Guanghzou 510080,China

ObjectiveTo explore the expression and clinical significances of CD4+CD29+T cells for patients with acute spinal cord injury(ASCI).Methodcollecting 75 cases of patients with spinal cord injury,with 50 cases of healthy people as control group,using flow cytometry test peripheral blood CD4+CD29+helper T cells and intracellular cytokines gamma interferon (IFN-gamma)and interleukin 4(IL-4)content;In 3 and 7 days after injury,review three and analyze the correlation between the three and Frankel classification.Resultscompared with normal,spinal cord injury patients with CD4+T cells and IL-4+CD29 content increased significantly,but the content of IFN-gamma significantly decreased(P＜0.05);Treatment for 3 days,CD4+T cells and IL-4+CD29 is injury to some extent on day 1,and IFN-gamma recovery in different level,of which the change of D and E significantly(P＜0.05).Treatment for 7 days,CD4+T cells and IL-4+CD29 continue to fall,IFN-gamma continue to rebound,D and E+T cells in patients with CD4+CD29,IFN-gamma and IL-4 than day3 have significant difference(P＜0.05). Correlation analysis suggests CD4+T cells and IL-4+CD29 with Frankel classification has significant positive correlation,and IFN-gamma and Frankel classification has significant negative correlation.ConclusionCD4+CD29+helper T cells and IL-4, and IFN-gamma reduce is one of the important immune characteristics of spinal cord injury associated with disease outcomes, and and relevance to the damage degree,therefore has important clinical significance.

spinal cord injury;CD4+CD29+helper T cells;Frankel classification;cytokines

2014-04-28

羅敏生，大學學歷，主治醫(yī)師，電話：0755-26730143，E-mail: szgklms@126.com

肖丹，副主任醫(yī)師，E-mail:sygkxd@126.com