王秀文，易基群，梁繼珍

臨床研究

CIKCIK細胞對化療后晚期非小細胞肺癌的臨床療效評估

王秀文，易基群，梁繼珍

廣州市紅十字會醫(yī)院腫瘤科，廣東廣州510220

目的探觀察化療后晚期非小細胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）患者給予細胞因子誘導的殺傷細胞（cytokineinduced killer cells,CIK）治療后免疫功能及生活質(zhì)量變化，探討CIK細胞治療晚期肺癌的近期療效及安全性。方法收集化療后晚期NSCLC患者61例，選取同期最佳支持治療的61例化療后晚期NSCLC患者作為對照組，比較CIK細胞治療后外周血T淋巴細胞亞群、KPS評分、近期療效及評估安全性。結(jié)果CIK治療組患者外周血CD3+、CD3+/CD4+細胞比率較治療前顯著上升（P＜0.05），對照組T淋巴細胞亞群沒有變化。CIK細胞治療后患者KPS評分為67.27±8.94，較治療前顯著提高（P＜0.05）。CIK治療組疾病控制率為85.25％，顯著高于對照組的59.01％（P＜0.05）。CIK治療組中出現(xiàn)4例一過性發(fā)熱和3例皮疹患者，未見其他明顯毒副作用。結(jié)論CIK治療化療后晚期非小細胞肺癌患者，改善免疫功能及生活質(zhì)量，提高近期疾病控制率，安全性好。

細胞因子誘導的殺傷細胞；非小細胞肺癌；免疫系統(tǒng)；生活質(zhì)量；療效

肺癌的發(fā)病率和病死率均居各類惡性腫瘤之首，且仍呈持續(xù)上升趨勢［1］，非小細胞肺癌約占肺癌的80％，65％~75％肺癌患者確診時已為ⅢB~Ⅳ期，全身化療是晚期NSCLC的主要治療手段。目前化放療在一定程度上能殺滅絕大多數(shù)的腫瘤細胞，但是由于其嚴重的毒副反應、晚期腫瘤患者機體免疫力低下等因素，導致化療方案的實施和獲益受到極大的限制［2］。CIK免疫細胞治療已逐步在臨床上應用，它作為繼手術(shù)、化療、放療等傳統(tǒng)療法之后的新治療手段，在腫瘤的治療中發(fā)揮著重要的作用。與傳統(tǒng)化療不同，抗腫瘤細胞免疫治療對患者沒有明顯的毒副反應，且患者耐受性更好，生活質(zhì)量明顯提高。本研究對化療后的晚期NSCLC進行CIK細胞治療研究，探討CIK細胞治療對化療后晚期NSCLC患者免疫功能、療效及安全性的作用及影響。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

本研究選取我院腫瘤科2010年9月~2013年9月收治的化療后接受CIK治療的晚期非小細胞肺癌患者61例作為實驗組，選取同期化療后對癥隨訪的晚期非小細胞肺癌患者61例作為對照組。實驗組61例均為ⅢB~Ⅳ期患者，男患35例，女患26例，平均年齡56.42歲，ⅢB期患者19例，Ⅳ期患者42例。對照組61例均ⅢB~Ⅳ期患者，男患37例，女患24例，平均年齡55.78歲，ⅢB期患者24例，Ⅳ期患者37例。經(jīng)比較，兩組患者在年齡、性別、疾病分期以及病理類型等一般資料差異無顯著，P>0.05?；颊呔?jīng)組織病理學確診肺癌，KPS評分≥50，預計生存期>3個月，治療前血常規(guī)、心電圖正常，肝腎功能各指標正常。本臨床應用程序均經(jīng)醫(yī)院倫理委員會審查批準，接受生物治療患者均簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 CIK細胞的制備及回輸CIK組患者于清晨空腹狀態(tài)下抽取患者外周血50 ml，肝素抗凝，在符合cGMP標準的實驗室，用Ficoll淋巴細胞分離液分離并收集單個核細胞。用自體血清培養(yǎng)基培養(yǎng)，加入IFN-γ 1000 U/ml，置于37℃、5％CO2孵箱中培養(yǎng)，24 h后加入IL-2 1000 U/ml和抗CD3單抗50~100 ng/ml。此后每2~3天更換培養(yǎng)液并補加IL-2。培養(yǎng)至第8天時取部分細胞進行細菌及霉菌檢測，如結(jié)果陰性則繼續(xù)培養(yǎng)。第13天檢測細胞殺傷活性，用臺盼藍染色計數(shù)，總數(shù)達2×109以上后收集細胞，懸浮于1％白蛋白生理鹽水中，分5次于培養(yǎng)的第15、17、19、21、23天回輸給患者，回輸?shù)?天起每日皮下注射rhIL-2增強CIK細胞活性。對照組患者在化療后給予一般對癥支持治療。每例患者治療1個療程，每療程回輸細胞總數(shù)>1×1010。

1.2.2 觀察指標

1.2.2.1 檢測外周血T淋巴細胞表型化療結(jié)束后2周及CIK治療完成后2周采集患者外周血2 ml，F(xiàn)icoll密度梯度離心法分離淋巴細胞，流式細胞儀檢測T細胞亞群變化。

1.2.2.2 生活質(zhì)量評估以Karnofsky為標準比較化療后2周與CIK細胞免疫治療后2周患者的生活質(zhì)量。

1.2.2.3 評價近期療效61例患者均可評價療效，按RECIST評價標準在患者1周期治療后通過CT、MRI、PET-CT等檢查進行療效評價。

1.3 統(tǒng)計學分析

本研究所得數(shù)據(jù)全部采用SPSS13.0進行數(shù)據(jù)分析，一般資料采取均數(shù)±標準差的表現(xiàn)形式，組間比較采用t檢驗，兩組間率的比較采用卡方檢驗，P＜0.05為差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 外周血淋巴細胞亞群的變化

所有患者均完成1個療程的CIK細胞輸注，每次細胞回輸數(shù)量在2.0×109以上。CIK細胞干預治療后患者CD3+、CD3+/CD4+細胞亞群比率提高，存在統(tǒng)計學差異（P＜0.05），CD3+/CD8+細胞亞群在CIK治療后提高，但未出現(xiàn)統(tǒng)計學差異，可能與樣本量小、追蹤時間短有關(guān)。對癥治療組CD3+、CD3+/CD4+、CD3+/CD8+細胞亞群百分數(shù)均未增加。說明CIK治療對化療后晚期非小細胞患者外周血CD3+、CD3+/CD4+細胞亞群顯著增加作用，CD3+/CD8+有上升趨勢，其升高作用優(yōu)于一般對癥治療（表1）。

表1 61例患者治療前后外周血T細胞表型變化Tab.1Changes of T-cell phenotype in peripheral blood of 61 patients after CIK cells treatment(％,x±s,n=61)

2.2 CIK治療前后肺癌患者生活質(zhì)量變化

CIK治療前后61例肺癌患者的KPS評分為60.87±6.93和67.27±8.94，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），CIK治療后患者體力狀況改善，生存質(zhì)量提高；而對照組的61例患者治療前后的KPS評分為60.41±8.55和61.34±7.65，無統(tǒng)計學差異。本結(jié)果說明CIK治療能夠明顯改善化療后晚期肺癌患者的生活質(zhì)量（表2）。

表2 CIK細胞治療前后Karnofsky評分Tab.2 The Karnofsky score of 61 patients before and after CIK cells treatment(x±s,n=61)

2.3 近期療效評價

CIK細胞治療結(jié)束后經(jīng)影像學評價，CIK治療組完全緩解3例，16例部分緩解，33例穩(wěn)定，客觀緩解為31.15％，對癥治療組是27.87％，無顯著差異。但CIK治療組疾病控制率較對照組明顯提高（85.25％vs59.01％，P＜0.05），存在顯著性差異。提示CIK細胞治療可有效控制化療后晚期非小細胞肺癌進一步生長，多數(shù)接受CIK治療的患者疾病維持穩(wěn)定(表3)。

表3 近期療效評價Tab.3 Short term evaluation of therapeutic effects(x±s,n=61)

2.4 CIK細胞治療的安全性評價

CIK細胞回輸過程中及回輸后最常見的不良反應為發(fā)熱，共4例，低熱為主，均為一過性，自行緩解或?qū)ΠY處理后緩解，未出現(xiàn)高熱、寒戰(zhàn)。3例出現(xiàn)皮疹、乏力等癥狀，未予處理自行緩解。未出現(xiàn)明顯肝腎功能異常、骨髓抑制等不良反應。

3 討論

目前中國乃至全球肺癌的發(fā)病率不斷上升，在我國位于各癌癥之首。由于大多數(shù)肺癌患者就診時已是晚期，聯(lián)合含鉑類藥物的化療方案或配合局部放療是晚期NSCLC的主要治療手段［3］。化療可使晚期肺癌患者CD3+、CD4+T細胞比例下降，免疫功能降低［4］。CIK細胞治療是近年發(fā)展起來的腫瘤過繼免疫治療的全新策略［5］，近幾年的相關(guān)文獻報道，CIK治療在各種癌癥中的應用均取得了一定的療效，特別是在腎細胞癌、胃癌以及非小細胞肺癌［6］。CIK細胞能調(diào)節(jié)和增強患者自身免疫功能，抑制腫瘤生長和清除殘留微小病灶的作用，可以有效提高腫瘤的生存率和治愈率，防止腫瘤復發(fā)、轉(zhuǎn)移［7］。本研究將CIK細胞作為化療后維持治療的手段，觀察其治療晚期非小細胞肺癌患者前后免疫系統(tǒng)的變化規(guī)律，分析其對患者生活治療和近期療效的影響，并評估其安全性。

本研究顯示化療后晚期非小細胞肺癌經(jīng)CIK細胞治療后，CD3+、CD3+/CD4+細胞亞群百分率明顯升高，外周血T細胞亞群發(fā)生變化，與治療前比較差異有統(tǒng)計學意義，對癥治療組無顯著改變，表明患者治療后免疫功能得到改善。楊志銀等［8］亦報道了CIK治療干預后T淋巴細胞亞群百分數(shù)的顯著提高，與本研究結(jié)果一致。同時在本研究中61例肺癌患者CIK治療后的KPS評分較治療前也有顯著提高，表明CIK治療明顯改善患者的生活質(zhì)量，是CIK治療的優(yōu)勢所在。在療效方面，本結(jié)果顯示，CIK治療組疾病控制率較對照組明顯提高，多數(shù)接受CIK治療的患者疾病維持穩(wěn)定，羅虎等［9］亦報告CIK治療顯著提高肺癌患者治療的有效率及疾病控制率。本研究中，CIK治療組少數(shù)患者出現(xiàn)發(fā)熱、皮疹等，均易緩解，未出現(xiàn)肝腎功能、骨髓抑制等不良反應，安全性高，耐受性好。

綜上所述，CIK細胞治療能夠顯著提高化療后晚期非小細胞肺癌患者的免疫功能，改善患者生存質(zhì)量，提高近期疾病控制率，安全性好，值得在臨床中廣泛推廣。

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［2］Szkorupa M,Klein J,Bohanes T,et al.Neoadjuvant chemotherapy and surgical treatment in advanced stages of non-small cell lung cancer［J］.Rozhl Chir,2011,90(8):433-9.

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［4］張俊萍,毛光華,史天良,等.DC-CIK聯(lián)合化療治療晚期非小細胞肺癌的臨床療效［J］.中國腫瘤生物治療雜志,2011,18(4):424-9.

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［7］Li H,Wang C,Yu J,et al.Dendritic cell-activated cytokine-induced killer cells enhance the anti-tumor effect of chemotherapy on nonsmall cell lung cancer in patients after surgery［J］.Cytotherapy, 2009,11(8):1076-83.

［8］楊志銀,王燕.CIK維持治療中晚期肺癌的臨床觀察及影響因素分析［J］.臨床肺科雜志,2014，19(4):706-9．

［9］羅虎,宮亮,陳永峰,等.CIK維持治療中晚期肺癌的臨床觀察及影響因素分析［J］.第三軍醫(yī)大學學報,20134 35(6):569-72.

The Study of Cytokine-induced Killer Cells Treating Patients with Advanced Non-small Cell Lung Cancer after Chemotherapy

Wang Xiuwen,Yi Jiqun,Liang Jizhen
Department of Medical Oncology,Guangzhou Red Cross Hospital,Guangzhou 510220,China

ObjectiveTo investigate the changes of immunity and life quality after the treatment of cytokine induced-killer cells （CIKs）for patients with advanced NSCLC after chemotherapy，and to assess the effectiveness and safety of CIKs treatment.MethodSixty-one patients with advanced NSCLC after chemotherapy treated with CIKs were enrolled as CIKs group，and another sixty-one post-chemotherapy patients of advanced NSCLC treated with optimal supportive care during the same period were enrolled as control group．Before and after CIK cells being transfused back,the changes of immune system including subsets of T cells，quality of life(Karnofsky score),therapeutic effects and side effects were compared between the two groups.ResultCompared with before CIK cells therapy,the ratios of CD3+and CD3+/CD4+T cells significantly increased (P＜0.05),while there was no significant change in the control group.KPS score significantly increased in the CIKs group, which was 67.27±8.94（P＜0.05）.The disease control rate(DCR)were 85.25％in the CIKs group，which was significantly higher than those in the control group(59.01％)（P＜0.05）．The major adverse events were transient fever and skin rash,and no other side effect was observed.ConclusionCIK cells treatment is safe and effective for advanced NSCLC patients.It can improve the immune imbalance,DCR and quality of life of the patients．

cytokine-induced killer cell;NSCLC;immunity;effectiveness;quality of life

2014-05-30

王秀文，研究生，主治醫(yī)師，E-mail:wnwnwang@163.com