姚雪梅 刁麗春 覃信滿

心舒丸中丹參酮ⅡA的含量測定方法改進

姚雪梅 刁麗春 覃信滿

目的采用改進高效液相色譜法（HPLC）測定心舒丸中丹參酮ⅡA的含量。方法采用Kromasil-C18色譜柱，流動相為甲醇-水（80:20），流速為1.0ml·min-1。結果丹參酮ⅡA在0.10～0.60μg范圍內線性關系良好（r=0.9994），回收率為100.10%，RSD為0.58%。改進方法測定丹參酮ⅡA的含量，出峰時間更快，丹參酮ⅡA主峰與其他峰分離度和拖尾因子均符合要求；兩種方法測定三批心舒丸中丹參酮ⅡA含量無明顯差異。結論改進HPLC法測定丹參藥材中丹參酮ⅡA的含量，具有較好的方法重現性，結果準確，可作為丹參酮ⅡA含量測定的替代方法。

心舒丸；丹參酮ⅡA；改進HPLC法；含量測定

心舒丸主要由丹參、三七、冰片、藤合歡、木香和蘇合香等成分組成，具有行氣活血、通竅、解郁等功效，用于心臟病引起的胸悶氣短、心絞痛的治療[1]。于百青等[2]研究認為，采用高效液相色譜法測定心舒丸中丹參酮ⅡA的含量具有簡便、靈敏、準確、專屬及重復性好的特點。丹參酮ⅡA屬于丹參中的主要脂溶性成分，《中國藥典》2010年版1部采用高效液相色譜法測定丹參酮ⅡA的含量，以甲醇-水（75:25）為流動相。本研究擬對高效液相色譜法中流動相含量配比進行改進，采用改進 HPLC法檢測心舒丸中丹參酮ⅡA含量。

1 儀器與試劑

儀器選自Shimadzu LC20A型高效液相色譜儀，LC-20AT型溶液傳輸單元，SIL-20A自動進樣器，SPD-M20A二極管陣列檢測器，LC Solution色譜工作站；丹參酮ⅡA對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號為110766-200619）；丹參藥材通過市場采購，甲醇為色譜純，水為雙蒸水，其它試劑為分析純。心舒丸（遼寧華鑫藥業(yè)有限公司，批號分別為10050、100502、100503）。

1.2 方法

1.2.1 于百青[2]檢測方法（簡稱為方法A） 色譜柱為Kromsil-C18色譜柱（4.6mm×250mm，5μm）；流動相為甲醇-水（73:27），檢測波長為270nm，流速為1.0ml·min-1，柱溫28℃，進樣量為10μL。理論板數按丹參酮ⅡA峰計算應不低于2000。

1.2.2 改進的測定方法（簡稱為方法B） 在于白青等學者研究的基礎上，將流動相改為甲醇-水（80:20），其余操作與于百青等學者測定方法相同。

1.2.3 對照品溶液的制備 取丹參酮ⅡA對照品10.05mg，置50mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻；精密量取1mL，置5mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得（每1mL中含丹參酮ⅡA 40.20μg）。

1.2.4 供試品溶液的制備 取質量差異項下的本品，剪碎，精密稱定1.8g。置具塞棕色瓶中，精密加入甲醇25mL。密塞，稱定質量，超聲處理30min，放冷，再稱定質量，用甲醇補足減失的質量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

1.2.5 陰性對照品溶液 按心舒丸處方和方法制備缺丹參的陰性樣品，按照供試品溶液的制備方法制備陰性對照品溶液。

1.3 標準曲線以及線性關系考察精密吸取丹參酮ⅡA對照品約10.0mg，置50mL棕色量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成 200μg·mL-1的對照品溶液，備用。取出0.5mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL、2.5mL、3.0mL的200μg·mL-1的對照品溶液，分別置10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，進樣測定。在上述改進測定的色譜條件下進樣10μL，測定峰面積，以對照品濃度為自變量（X），相應峰面積為因變量（Y），得回歸方程分別Y=1.85×106X－3.49104（r=0.9994）。

1.4 儀器精密度試驗取丹參酮ⅡA對照品溶液，重復進樣6次，測定丹參酮ⅡA的峰面積，RSD為0.46%。

1.5 穩(wěn)定性試驗精密吸取同一供試品溶液，每2小時進樣1次，每次進樣10μL，連續(xù)考察12h。結果峰面積的RSD=0.42%，表明供試品溶液在12h內穩(wěn)定。

1.6 回收率誠驗精密稱取已知含量的心舒丸樣品 6份，照供試品溶液制備方法制備溶液，取供試品1 mL，置1000mL的容量瓶中，加入丹參酮ⅡA對照品溶液（40～20μg·mL-1）2mL，用甲醇稀釋至刻度，采用改進方法進行測定，并計算加樣回收率，見表1。

表1 丹參酮ⅡA加樣回收試驗

2 結果

2.1 樣品含量測定結果

2.1.1 采用改進的測定方法和方法 A分別對同一生產廠家三個批次的心舒丸中丹參酮ⅡA進行了測定，結果表明兩種測定方法結果無顯著性差異（P＞0.05），見表2。

2.1.2 采用改進方法測定后，丹參酮ⅡA保留時間在10min左右，比方法A的保留時間（約20min）提前了約10min，分離度為2.0，拖尾因子1.26。

2.2 陰性干擾實驗取丹參酮ⅡA對照品溶液、供試品溶液和陰性對照品溶液各10μL，在改進測定方法的色譜條件下測定。結果對照品溶液和供試品溶液保留時間相同，約20min。陰性對照品在20min無吸收峰，對測定無干擾，如圖A、B、C。

表2 樣品含量測定結果

注：A為丹參酮ⅡA；B為心舒丸；C為陰性對照

3 討論

上述試驗結果表明，在方法A的基礎上，將HPLC的流動相配比進行一定改進，采用改進方法測定心舒丸中的丹參酮ⅡA，則丹參酮ⅡA的保留時間得以縮短，出峰較快，節(jié)約了測定時間和測試耗材，同時又能保證測定結果的準確性及分離度與拖尾因子符合要求，因而是測定心舒丸中丹參酮ⅡA較為快速的替代方法。

[1] 中華人民共和國衛(wèi)生管理部門.中藥成方制劑·標準WS3-B-2493-97[S].13冊.北京.

[2] 于百青,楊敏,孫鵬云.高效液相色譜法測定心舒丸中丹參酮ⅡA含量[J].中國藥業(yè),2012,21(13):36-37.

R927.2

A

1673-5846(2014)01-0214-02

廣西河池市人民醫(yī)院藥劑科，廣西河池 547000