鄭洪梅

振源膠囊的生物限度測(cè)定方法分析

鄭洪梅

目的探討振源膠囊的生物限度測(cè)定方法。方法本次醫(yī)學(xué)觀察以2005版《中國(guó)藥典》中對(duì)于微生物限度測(cè)定方法的相關(guān)規(guī)定為基礎(chǔ)，通過(guò)離心稀釋法對(duì)振源膠囊的酵母菌、真菌等細(xì)菌類型進(jìn)行常規(guī)的檢查和驗(yàn)證。結(jié)果兩組稀釋劑的試驗(yàn)菌回收率均在70%以上。通過(guò)常規(guī)方法對(duì)控制菌進(jìn)行試驗(yàn)，未檢出陰性對(duì)照菌，但檢出陽(yáng)性對(duì)照菌。結(jié)論由本次醫(yī)學(xué)研究結(jié)果可知，振源膠囊中的生物限度測(cè)定結(jié)果符合2005版《中國(guó)藥典》中對(duì)于微生物限度測(cè)定方法的相關(guān)規(guī)定。

振源膠囊；生物限度；測(cè)定方法

針對(duì)含抑菌成分的中成藥微生物限度檢查，須消除供試液抑菌活性后，再依據(jù)《中國(guó)藥典》規(guī)定的相應(yīng)方法檢查，并對(duì)使用的檢測(cè)方法進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)，進(jìn)而確定試品的抑菌活性及確保測(cè)定方法的可靠性。本文以振源膠囊為例，證實(shí)了生物限度測(cè)定法是符合相關(guān)規(guī)定的，具體如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

1.1.1 設(shè)備 所用設(shè)備包括江蘇常熟雙杰側(cè)試儀器廠生產(chǎn)的 T500型電子天平，臺(tái)洲市淑江無(wú)星機(jī)械儀器有限公司生產(chǎn)的YJA電動(dòng)勻漿儀，鐵嶺市醫(yī)療器械總廠生產(chǎn)的628型高壓蒸汽滅菌器，上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠生產(chǎn)的GZX-DH-40×45型25℃恒沮培養(yǎng)箱以及35℃恒沮培養(yǎng)箱。

1.1.2 培養(yǎng)基 所用培養(yǎng)基包括中國(guó)藥品生物制品檢定所生產(chǎn)的 040525玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基、0508252PH7.0氯化鈉-蛋白胨溶液、050104營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、040409改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基、050915改良馬丁培養(yǎng)基以及050613膽鹽乳糖培養(yǎng)基。

1.1.3 菌種 所用菌種包括中國(guó)藥品生物制品檢定所生產(chǎn)的CMCC（F）黑曲霉菌、CMCC（F）98001白色念珠菌、CMCC（B）44102大腸埃希菌、CMCC（B）26003金黃色葡萄球菌以及CMCC（B）63501枯草芽孢桿菌。

1.1.4 藥物 振源膠囊（國(guó)藥準(zhǔn)字 Z22026091，吉林省集安益盛藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)）。

1.2 方法

1.2.1 酵母菌、霉菌和細(xì)菌的計(jì)數(shù)方法

1.2.1.1 供試品的制備 取 10g供試品，與100ml的PH7.0氯化鈉-蛋白胨溶液相互混合，電動(dòng)攪拌搖勻后，溶解在 45℃的水中，制備成 1:10濃度的供試品，取供試品10ml，以500r?min-1的速度進(jìn)行連續(xù)5min的離心處理，取2ml上層清液，分別置于兩個(gè)等量平皿中。

1.2.1.2 菌液制備 分別對(duì)大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌的新鮮斜面培養(yǎng)物鉑金耳在37℃的環(huán)境中留置18～24h，并加入適量0.9%氯化鈉溶液，其濃度相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)比濁液，作為原液，將經(jīng)過(guò)滅菌處理的0.9%氯化鈉溶液9ml加入1ml原液中，10倍稀釋至10-6～10-7，細(xì)菌數(shù)約50～100cfu?ml-1，對(duì)控制菌和活菌進(jìn)行計(jì)數(shù)。取 1ml連續(xù)18～24h在25℃中培養(yǎng)的白色念珠菌液體培養(yǎng)物，加入滅菌處理的0.9%氯化鈉溶液9ml，10倍稀釋為 10-7，細(xì)菌數(shù)約 50～100cfu?ml-1，對(duì)活菌進(jìn)行計(jì)數(shù)。取5ml連續(xù)7d在25℃中培養(yǎng)的黑曲霉菌新鮮斜面培養(yǎng)物，將經(jīng)過(guò)滅菌處理的0.9%氯化鈉溶液9ml逐管10倍稀釋至10-5，細(xì)菌數(shù)為50至100cfu?ml-1，逐管對(duì)活菌數(shù)進(jìn)行計(jì)算。

1.2.1.3 回收率檢查 ①稀釋液對(duì)照組：取1ml稀釋液，對(duì)稀釋液對(duì)照試劑中的菌落數(shù)進(jìn)行測(cè)定。②供試品對(duì)照組：對(duì)供試品本底菌落數(shù)進(jìn)行測(cè)定。③菌液組：對(duì)各個(gè)菌株的試驗(yàn)菌落數(shù)分別進(jìn)行測(cè)定。④試驗(yàn)組：取1ml濃度為1:10的供試品，將其置于平皿中，分別加入1ml細(xì)菌數(shù)約50至100cfu?ml-1的菌株實(shí)驗(yàn)菌液，立即加入玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基和營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，在其完全凝固后，連續(xù) 24～72h內(nèi)將其置于恒定溫度內(nèi)進(jìn)行觀察[1]。

1.2.1.4 菌落計(jì)數(shù)方法 連續(xù)48h內(nèi)使用營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基對(duì)細(xì)菌進(jìn)行培養(yǎng)，對(duì)細(xì)菌數(shù)進(jìn)行逐日點(diǎn)計(jì)算，每48小時(shí)報(bào)告一次菌落數(shù)檢測(cè)結(jié)果。連續(xù)72h使用玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基對(duì)酵母菌和真菌進(jìn)行培養(yǎng)，對(duì)細(xì)菌數(shù)進(jìn)行逐日點(diǎn)計(jì)算，每72小時(shí)報(bào)告一次菌落數(shù)檢測(cè)結(jié)果[2]。

1.2.2 控制菌測(cè)定方法 ①陰性菌對(duì)照組：將100ml膽鹽乳糖增菌培養(yǎng)基加入1ml和10ml的1:10供試品中，后加入 1ml細(xì)菌數(shù)約 10～100cfu?ml-1的金黃色葡萄球菌，根據(jù)相關(guān)規(guī)定對(duì)控制菌測(cè)定方法進(jìn)行檢查[3]。②試驗(yàn)組：將100ml膽鹽乳糖增菌培養(yǎng)基加入1ml和10ml的1:10供試品中，后加入1ml細(xì)菌數(shù)約10～100cfu?ml-1的大腸埃希菌，根據(jù)相關(guān)規(guī)定對(duì)控制菌測(cè)定方法進(jìn)行檢查[4]。

2 結(jié)果

本次醫(yī)學(xué)研究利用常規(guī)法對(duì)振源膠囊微生物限度進(jìn)行檢查，結(jié)果如表1所示。

表1 酵母菌、真菌和細(xì)菌的技術(shù)方法及結(jié)果

3 討論

本研究根據(jù)2005年版《中國(guó)藥典》中對(duì)于微生物限度檢查法的相關(guān)規(guī)定，對(duì)振源膠囊中的醉母菌、真菌和細(xì)菌數(shù)進(jìn)行了測(cè)定，每一測(cè)定均進(jìn)行3次獨(dú)立的試驗(yàn)。研究結(jié)果證實(shí)，振源膠囊對(duì)于枯草芽抱桿菌具有明顯的抑制作用，因而可通過(guò)培養(yǎng)基稀釋法和離心處理對(duì)振源膠囊中的細(xì)菌數(shù)進(jìn)行檢查，振源膠囊對(duì)于酵母菌和真菌則無(wú)明顯的抑制作用，因此可通過(guò)常規(guī)法對(duì)本品的酵母菌和真菌數(shù)進(jìn)行檢查。

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R284.1

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1673-5846(2014)01-0051-02

吉林省集安益盛藥業(yè)，吉林通化 134200