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        豬口蹄疫O型緬甸98系毒株對(duì)乳鼠的適應(yīng)性研究

        2014-06-07 05:50:48王莉君
        獸醫(yī)導(dǎo)刊 2014年18期
        關(guān)鍵詞:乳鼠傳代O型

        王莉君 劉 宏

        (1.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院,新疆烏魯木齊 830000;2.新疆天康畜牧生物技術(shù)股份有限公司,新疆烏魯木齊 830000)

        豬口蹄疫O型緬甸98系毒株對(duì)乳鼠的適應(yīng)性研究

        王莉君1劉 宏2

        (1.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院,新疆烏魯木齊 830000;2.新疆天康畜牧生物技術(shù)股份有限公司,新疆烏魯木齊 830000)

        口蹄疫(Foot-and-Mouth Disease,F(xiàn)MD)是由口蹄疫病毒引起的豬、牛、羊等偶蹄動(dòng)物的一種烈性傳染病,給流行國(guó)家和地區(qū)帶來(lái)嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失,篩選與田間流行毒株基因型相近的、免疫原性良好的、適合生產(chǎn)特性的制造疫苗毒株,將對(duì)疫情的有效控制會(huì)起到非常重要的作用。

        本論文針對(duì)中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院國(guó)家口蹄疫參考實(shí)驗(yàn)室分離鑒定的四株?yáng)|南亞拓?fù)湫途挼?8系O型口蹄疫乳鼠毒,在乳鼠上進(jìn)行傳代,對(duì)各毒株的收毒時(shí)間和最終代次的毒價(jià)進(jìn)行比較,并根據(jù)結(jié)果選擇對(duì)乳鼠適應(yīng)性最好的一株,作為檢驗(yàn)用毒株,并為生產(chǎn)用毒株的選擇提供參考。

        1 材料與方法

        1.1 材料

        四株?yáng)|南亞拓?fù)湫途挼?8系O型口蹄疫乳鼠毒,分別為O/ GD/10-8株、O/GD/10-9株、O/GX/10-10株、O/XJ/10-11株;2~3日齡昆明系乳鼠帶母鼠飼養(yǎng);磷酸鹽緩沖溶液(PBS);50%甘油-磷酸鹽緩沖液;石英砂購(gòu)自天津盛奧精細(xì)化工公司;高速低溫離心機(jī);冷藏冷凍兩用冰箱;眼科手術(shù)剪、鑷;注射器;移液器;陶瓷研缽。

        1.2 方法

        1.2.1 磨毒傳代

        分別將四支O型口蹄疫乳鼠毒稱重,取約1g加入滅菌后的研缽,再加入適量滅菌石英砂充分研磨,期間加入適量PBS,使之完全研磨成勻漿,最終制成1:10的組織懸液,放在2~8℃的冰箱中,浸毒16~20h。浸毒結(jié)束后,使用低溫離心機(jī),在4℃左右以3000r/min離心20mn,吸取上清液,于頸背部皮下接種2~3日齡的乳鼠8~12只,每只乳鼠的注射量為0.1ml。接種后觀察,并收取發(fā)病典型的瀕死乳鼠或死亡乳鼠,將乳鼠用1:50新潔爾滅清洗兩遍,再用PBS清洗兩遍后,剪去頭、四肢、尾,剪開(kāi)胸腔和腹腔,剔除內(nèi)臟,剝?nèi)テず推は轮?,?0%甘油-磷酸鹽緩沖液保存。此胴體即為第一代乳鼠毒(MF1)。按上述方法,繼續(xù)稱重、研磨,即可進(jìn)行下一代乳鼠毒的傳代工作。

        1.2.2 LD50測(cè)定

        將所取毒樣混合均勻,抽取毒樣0.2ml,沿管壁緩慢注入盛有1.8ml稀釋液的離心管中。加樣時(shí)吸頭尖不得接觸稀釋液液面,并重復(fù)吹兩次,盡量減少吸頭內(nèi)壁殘留液體,然后將管內(nèi)液體混勻,更換吸頭準(zhǔn)備進(jìn)行下一步稀釋。以此方法作10倍系列稀釋,期間每個(gè)滴度換一支吸頭,取10-5,10-6,10-7,10-8等各稀釋度,每稀釋度頸背部皮下接種2~3日齡的乳鼠4~5只,每只注射0.2ml,各稀釋度分別作標(biāo)記。將乳鼠置于23~26℃室溫環(huán)境下,帶母鼠飼養(yǎng)。每日觀察1~2次,記錄每次觀察時(shí)發(fā)病、死亡的乳鼠只數(shù)。于注射后24h之前死亡乳鼠不計(jì)數(shù)。連續(xù)觀察4~7日,根據(jù)發(fā)病死亡乳鼠數(shù),按照Reed-Muench法計(jì)算LD50。

        2 結(jié)果與分析

        在乳鼠傳代過(guò)程中,四株毒的收毒時(shí)間和最終代次的LD50如下表所示:

        由上表可知,毒價(jià)方面,四株毒種在傳至MF5代時(shí),O/ GD/10-8株最高,O/GD/10-9株、O/XJ/10-11株次之,O/GX/10-10株相對(duì)略低。病毒收毒時(shí)間方面,O/GD/10-8株在MF3和MF4兩代中,發(fā)病、死亡時(shí)間出現(xiàn)反復(fù),而且波動(dòng)較大,在MF5代收毒時(shí),發(fā)病后死亡時(shí)間拖延至9.5h(12.5h~22h收);O/GD/10-9株同O/GD/10-8株相似,在MF3和MF4兩代中,發(fā)病、死亡時(shí)間出現(xiàn)反復(fù),在MF5代收毒時(shí),發(fā)病后死亡時(shí)間略有延長(zhǎng),拖延至7.5h(17h~24.5h收);O/GX/10-10株也是在MF3和MF4兩代中,發(fā)病、死亡時(shí)間出現(xiàn)反復(fù),但在MF5代收毒時(shí),發(fā)病后死亡時(shí)間為4.5h(15h~19.5h收);O/XJ/10-11株從MF1代至MF5代,發(fā)病、死亡時(shí)間一直呈逐步縮短的狀態(tài),在MF5代收毒時(shí),發(fā)病后死亡時(shí)間為2h(17.5h~19.5h收)。

        綜合毒價(jià)高低和收毒時(shí)間長(zhǎng)短,在對(duì)乳鼠的適應(yīng)性方面,選擇了收毒時(shí)間相對(duì)穩(wěn)定、毒價(jià)比較高的O/XJ/10-11株繼續(xù)進(jìn)行了傳代,傳至MF7代時(shí),收毒時(shí)間趨于穩(wěn)定(15h~18h),測(cè)得LD50為10-8.0/0.2ml。

        3 討論與結(jié)論

        四株口蹄疫毒種在傳代過(guò)程中,能較快的適應(yīng)乳鼠,并且乳鼠的發(fā)病、死亡時(shí)間基本呈現(xiàn)逐漸縮短、集中的趨勢(shì),但在細(xì)節(jié)上略有區(qū)別。毒價(jià)方面,四株毒種MF5代的毒價(jià)差異不大,LD50均不低于10-7.5/0.2ml。綜合毒價(jià)和收毒時(shí)間兩方面因素考慮,在對(duì)乳鼠的適應(yīng)性方面,選擇了收毒時(shí)間相對(duì)穩(wěn)定、毒價(jià)比較高的O/XJ/10-11株繼續(xù)進(jìn)行傳代,傳至MF7代,收毒時(shí)間趨于穩(wěn)定(15h~18h),MF7代測(cè)得LD50為10-8.0/0.2ml。本研究結(jié)果顯示,四株待選毒株中,O/XJ/10-11株對(duì)乳鼠的適應(yīng)性最好,致病性強(qiáng),傳代過(guò)程穩(wěn)定,收毒時(shí)間短,可作檢驗(yàn)用毒株使用。

        表2 -1 四株口蹄疫種毒鼠毒收毒時(shí)間和最終代次的LD50

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