賈守雄 王法琴 高峻 余強(qiáng)

溫度刺激響應(yīng)型雌三醇陰道緩釋凝膠是以泊洛沙姆407和泊洛沙姆188為主要材料,將雌三醇均勻分散于以上基質(zhì)中制成的水凝膠,此水凝膠在陰道腔道溫度下由流動的液體轉(zhuǎn)變?yōu)楣虘B(tài)凝膠黏附于陰道黏膜。溫度刺激響應(yīng)型凝膠具有室溫或室溫溫度以下是液態(tài), 體溫時(shí)轉(zhuǎn)變?yōu)槟z的特點(diǎn)。隨著凝膠被侵蝕, 藥物逐步釋放, 而達(dá)到緩釋目的。本實(shí)驗(yàn)采用均勻設(shè)計(jì)法對溫度刺激響應(yīng)型雌三醇陰道緩釋凝膠的處方進(jìn)行優(yōu)化, 從而得到泊洛沙姆407與泊洛沙姆188的適宜配比。

1 儀器與試藥

電子分析天平(德國塞多利斯儀器系統(tǒng)有限公司)；78-1磁力加熱攪拌器(江蘇金壇市正基儀器有限公司)；電熱恒溫水浴鍋(江蘇金壇市大地自動化儀器廠)；溫度計(jì)；pHS-25(上海日島科學(xué)儀器有限公司)。雌三醇(江蘇蘇州市蘇瑞醫(yī)藥化工有限公司,批號：20100311,含量：99.8%)；泊洛沙姆407；泊洛沙姆188；水為純化水(蘭大二院自制)。

2 試驗(yàn)方法和結(jié)果

2.1 雌三醇緩釋凝膠的制備方法 采用冷法制備凝膠, 稱取處方量的P407和P188, 在不斷攪拌下將P407和P188逐漸溶解于純化水中, 于4℃冰箱冷藏24 h以上, 直至形成澄清溶液。

2.2 相變溫度的測定 膠凝溫度(Tsol-gel), 又稱為相轉(zhuǎn)變溫度, 是溫度敏感型凝膠最重要的評價(jià)指標(biāo)之一。本實(shí)驗(yàn)采用磁力攪拌法測定相變溫度, 磁力攪拌法是把含磁力攪拌子和溫度計(jì)的待測泊洛沙姆樣品放入水浴中, 攪拌下逐步加熱,由于膠凝作用而使攪拌子停止轉(zhuǎn)動時(shí)的溫度即為相轉(zhuǎn)變溫度。

2.3 均勻設(shè)計(jì)法優(yōu)選處方

2.3.1 以均勻設(shè)計(jì)法進(jìn)行實(shí)驗(yàn) 泊洛沙姆407形成凝膠的濃度較低, 25℃時(shí)為20%, 而泊洛沙姆188的加入能夠提高體系的相變溫度, 故采用以泊洛沙姆407濃度X1(w/v)和泊洛沙姆188濃度X2(w/v)為考察因素, 以兩因素五水平進(jìn)行正交設(shè)計(jì), 采用U5(52)表安排實(shí)驗(yàn), 進(jìn)行多次預(yù)實(shí)驗(yàn)后選取P407與P188各5個(gè)水平, 以相變溫度(34±0.5)℃范圍為指標(biāo), 實(shí)驗(yàn)安排見表1。按2.1項(xiàng)下方法制備不同處方試驗(yàn)樣品, 按2.2項(xiàng)下方法測定每個(gè)處方的相變溫度, 結(jié)果見表2。

表1 實(shí)驗(yàn)安排

表2 均勻試驗(yàn)結(jié)果表

由表2中結(jié)果可看出, 當(dāng)泊洛沙姆407濃度為20%、泊洛沙姆188濃度為18%所得的凝膠相變溫度較好, 在(34±0.5)℃內(nèi)。 根據(jù)上表數(shù)據(jù), 用SPSS軟件進(jìn)行回歸分析,得回歸方程y=61.56-1.370x1, R2=0.994, S=0.39328,F=485.4,P<0.01, 該回歸方程具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。其中y為相變溫度, X1為P407濃度。此回歸方程剔除了X2(P188)影響, 可預(yù)測, 泊洛沙姆407在14%～22%濃度范圍內(nèi)是影響相變溫度的主要原因, 泊洛沙姆188起調(diào)節(jié)作用。 根據(jù)以上回歸方程, 當(dāng)泊洛沙姆407濃度為20%時(shí), 預(yù)測的相變溫度為34.16℃, 與均勻試驗(yàn)結(jié)果中四試驗(yàn)組(P407/P188)結(jié)果相當(dāng)。

2.3.2 回歸方程預(yù)測結(jié)果的驗(yàn)證 固定泊洛沙姆407濃度(w/v)為20%, 選擇泊洛沙姆188濃度(w/v)分別為12%、14%、16%、18%、20%五個(gè)水平進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。結(jié)果當(dāng)P188濃度為18%時(shí), 相變溫度在指標(biāo)(34±0.5)℃范圍內(nèi), 而且與均勻設(shè)計(jì)結(jié)果中四試驗(yàn)組結(jié)果相近 , 故選擇P407為20%、P188為18%為最佳處方。

2.3.3 加入雌三醇后的相變溫度 泊洛沙姆407和188均為高分子材料, 認(rèn)為雌三醇的加入對相變溫度影響不大。以泊洛沙姆407濃度為20%、泊洛沙姆188濃度為18%制備凝膠, 向凝膠中按每3 ml加入2 mg的雌三醇的量分別制備三批雌三醇凝膠, 分別測得相變溫度為33.8℃、33.8℃、33.6℃, 均在指標(biāo)(34±0.5)℃范圍內(nèi)。

3 討論

泊洛沙姆407(Poloxamer407, P407)是由聚氧乙烯與聚丙乙烯以7：3的比例形成的共聚物。P407的凝膠化溫度及凝膠強(qiáng)度強(qiáng)烈依賴于P407的濃度, 在其中添加了同系物泊洛沙姆188,以改善制劑的生物黏附性和膠凝強(qiáng)度,延長藥物在用藥部位的滯留時(shí)間［1］。使用不同比例的泊洛沙姆407與泊洛沙姆188, 可以制得膠凝溫度符合需要的緩釋凝膠［2］。雌三醇能選擇作用于子宮頸及陰道上皮, 能有效的治療和預(yù)防老年性陰道炎。而一般通過口服藥物進(jìn)行治療, 給藥劑量大,局部給藥血藥濃度低,給藥次數(shù)頻繁,副作用大,患者依從性差［3］。以栓劑形式給藥, 在陰道中融化或軟化, 由于吸水作用引起不適。將雌三醇制備為溫度刺激響應(yīng)型凝膠以液體狀態(tài)給藥, 由于流動性良好, 進(jìn)入體內(nèi)后能最大面積與黏膜充分接觸, 形成凝膠后緩慢釋藥, 可提高藥物的生物利用度［4］。

綜上所述, 與其他實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方法相比, 均勻設(shè)計(jì)法在P407和P188濃度篩選過程中實(shí)驗(yàn)次更少, 所篩選出的處方制得的凝膠常溫下有良好的流動性, 在體溫溫度下能迅速膠凝, 可進(jìn)一步進(jìn)行制劑研究。

［1］ 王瑋,葉放,周建平.泊洛沙姆407原位凝膠作為藥物載體的研究進(jìn)展.中國新藥雜志, 2009,18(8):699-703.

［2］ 程海興,王君平,孫海燕.等.泊洛沙姆407的基礎(chǔ)和藥劑學(xué)新進(jìn)展.中國藥業(yè), 2006,15(9):64.

［3］ 賈守雄,李平,魏琴,等.復(fù)方雌三醇陰道生物黏附膜的制備及質(zhì)量控制.中國藥房, 2008,19(7):526-527.

［4］ 金璐燕,李娟.泊洛沙姆407在制劑中的應(yīng)用進(jìn)展.藥學(xué)與臨床研究, 2009,17(3):231-234.