敖永琴

（重慶市豐都人民醫(yī)院病理科，重慶408200）

接合物蛋白檢測在甲狀腺乳頭狀微小癌中的臨床診斷意義

敖永琴

（重慶市豐都人民醫(yī)院病理科，重慶408200）

目的探討甲狀腺乳頭狀微小癌中接合物蛋白（CRKL）的表達及其臨床檢測意義。方法收集2010－2013年我院收治的120名病人的甲狀腺組織石蠟標本，其中30例為直徑＞1cm的甲狀腺乳頭狀癌患者，30例為甲狀腺乳頭狀微小癌患者，30例為結節(jié)性甲狀腺腫患者，30例為未患甲狀腺相關疾病的患者，采用免疫組化（SP）法檢測標本中CRKL的表達情況。結果甲狀腺乳頭狀微小癌組和甲狀腺乳頭狀癌組組中CRKL的表達陽性率及平均吸光度（MOD）高于結節(jié)性甲狀腺腫組和正常甲狀腺組，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。結論CRKL在甲狀腺乳頭狀微小癌中呈高度表達，臨床上CRKL的檢測有助于確定甲狀腺乳頭狀微小癌的手術方案。

甲狀腺腫瘤；乳頭狀瘤；接合物蛋白；甲狀腺乳頭狀微小癌

（Chin J Lab Diagn，2014，18：1615）

接合物蛋白（CRKL）是CRK（CT10regulator of kinase）家族的重要成員之一，它可通過自身的SH2結構域和氨基末端的SH3結構域與下游的信號分子結合形成復合物，參與細胞信號轉導，促進細胞增殖、分化和轉移，從而導致腫瘤的發(fā)生［1，2］。研究證實CRKL在卵巢癌和乳腺癌的發(fā)展中起著十分關鍵的作用［3，4］，目前，國內(nèi)外關于甲狀腺乳頭狀微小癌中CRKL表達的研究報道比較少。本研究比較了CRKL在正常甲狀腺組織、甲狀腺乳頭狀癌、甲狀腺乳頭狀微小癌以及結節(jié)性甲狀腺腫中的表達情況，探討CRKL表達在甲狀腺乳頭狀微小癌中的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

收集2010－2013年我院收治的120名病人的甲狀腺組織石蠟標本，其中30例為直徑＞1cm的甲狀腺乳頭狀癌患者，甲狀腺乳頭狀微小癌30例，結節(jié)性甲狀腺腫30例，30例為未患甲狀腺相關疾病的患者。所有甲狀腺患者均行手術病理證實，術前均無化療，放療及免疫治療史，也未合并其他疾病，而對照組均為未患有與甲狀腺相關疾病的入院病人。

1.2 試劑

小鼠抗人CRKL單克隆抗體（北京翰譜醫(yī)藥生物研究所生產(chǎn)），辣根過氧化物酶標記的山羊抗小鼠二抗、二氨基聯(lián)苯胺（DAB）以及多聚物輔助試劑（中杉金橋生物技術有限公司生產(chǎn)）。

1.3 SP染色

采用的CRKL陽性表達切片（SantaCruz公司提供）為陽性對照，陰性對照采用磷酸緩沖液（PBS）。按試劑盒說明書操作。棕黃色片狀或顆粒狀為陽性表達細胞的細胞質，在每張切片上選取5個高倍視野進行細胞計數(shù)，采用ImagePro Plus圖像分析系統(tǒng)計算CRKL的MOD。

1.4 統(tǒng)計學方法

所有數(shù)據(jù)均經(jīng)SPSS 16.0統(tǒng)計學軟件進行統(tǒng)計處理，計量資料以均數(shù)±標準差（x—±s）表示，多組間比較采用方差分析，計數(shù)資料采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 不同組織CRKL的染色情況

甲狀腺乳頭狀微小癌細胞以及甲狀腺乳頭狀癌的胞膜與胞質中出現(xiàn)淺黃色－棕褐色細顆粒，呈陽性表達（見圖1，2）；結節(jié)性甲狀腺腫的部分細胞可見淺黃色－棕褐色細顆粒（見圖3）；在正常甲狀腺組織細胞中幾乎見不到染色顆粒（見圖4）。

圖1 CRKL在甲狀腺乳頭狀癌陽性表達（SP，×200）

圖2 CRKL在甲狀腺乳頭狀微小癌陽性表達（SP，×200）

圖3 CRKL在結節(jié)性甲狀腺腫陽性表達（SP，×200）

圖4 CRKL在未患甲狀腺相關疾病組織陰性表達（SP，×200）

2.2 CRKL在不同甲狀腺組織中的表達情況

甲狀腺乳頭狀微小癌組和甲狀腺乳頭狀癌組中CRKL的表達陽性率高于結節(jié)性甲狀腺腫組和未患甲狀腺組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；而結節(jié)性甲狀腺腫組與未患甲狀腺相關疾病組相比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），見表1。

結節(jié)性甲狀腺腫組和未患甲狀腺相關疾病組的MOD低于甲狀腺乳頭狀微小癌組和甲狀腺乳頭狀癌組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；而結節(jié)性甲狀腺腫組與未患甲狀腺相關疾病組之間的差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），見表2。

表1 不同甲狀腺組織中CRKL表達陽性率比較

表2 不同甲狀腺組織中MOD比較

3 討論

甲狀腺乳頭狀微小癌是一種比較特殊的甲狀腺乳頭狀癌，其生長緩慢，不易被察覺，預后較好，但淋巴結轉移率高，可轉移至全身而威脅患者生命。因此，找到一種特異性的對癌細胞惡性增殖起關鍵調節(jié)作用的分子，對臨床治療疾病有著重要意義。接合物蛋白CRKL參與了影響細胞生存的一系列基本生理活動，并且CRKL與患者惡化、預后緊密相關。作為一種信號轉導分子，CRK蛋白可以通過多種信號轉導通路參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程。CRKL是CRK家族成員之一，含有一個SH2結構域以及兩個SH3結構域（呈串聯(lián)排列）。SH2結構域可與整合蛋白結合，能使Cas、CasL／HEFl等發(fā)生酪氨酸磷酸化，SH3結構域則可以與下游富含脯氨酸的蛋白等信號分子結合形成“黏著斑”復合物，如Dockl80、Sos、C3G、ABL和P13K等［5］，從整合蛋白將信號傳遞給Rac，使腫瘤細胞與細胞外基質的粘附、轉移加快［6］。CRKL去磷酸化后可激活C3G，C3G促進Rapl與GDP分離，然后與GTP結合，從而引起羧基末端絲氨酸的磷酸化，再通過MAPK途徑促進細胞運動、增殖及分化［7］。本研究結果顯示，與正常甲狀腺組織和結節(jié)性甲狀腺腫相比，直徑超過1cm的甲狀腺乳頭狀癌和甲狀腺乳頭狀微小癌組織中CRKL表達率和MOD明顯增高。CRKL蛋白在甲狀腺乳頭狀微小癌中過度表達，對促進甲狀腺乳頭狀微小癌的擴散和轉移起推動作用。CRKL蛋白可能通過整合信號通路使腫瘤細胞的運動和浸潤增加，促進甲狀腺乳頭狀微小癌的發(fā)生發(fā)展［8］。由此可以推測，通過拮抗或抑制CRKL蛋白的表達及阻斷其信號通路中的蛋白分子可能會使甲狀腺乳頭狀癌的發(fā)生和發(fā)展受到阻礙。

綜上所述，CEKL在甲狀腺乳頭狀微小癌和甲狀腺乳頭狀癌中表達無差異，這可能與二者具有相同的生物學特性有關，由此可推測甲狀腺乳頭狀癌的手術治療方案可能對甲狀腺乳頭狀微小癌行之有效，故二者可以采用相同的手術方式進行治療，對甲狀腺乳頭狀微小癌也可行頸部淋巴結清掃，以徹底清除癌細胞。

［1］楊香山，程紹梅，郭京艷，等.接合物蛋白在甲狀腺乳頭狀微小癌中的表達及其臨床意義［J］.中國全科醫(yī)學，2013，16（10）：3444.

［2］倪慶鋒，田 原，陶金秋，等.接合物蛋白CRKL促進肝癌細胞增殖的實驗研究［J］.中華臨床醫(yī)師雜志（電子版），2013，7（16）：7467.

［3］Wang J，Che YL，Li G，Liu B，et al.Crk and Crkl present with different expression and significance in epithelial ovarian carcinoma［J］.Mol Carcinog，2011，50（7）：506.

［4］Zhao T，Miao Z，Wang Z，et al.Overexpression of CRKL correlates with malignant cell proliferation in breast cancer.Tumour Biol［J］.2013，34（5）：2891.

［5］沈太敏，趙純?nèi)?，趙 涌，等.接合物蛋白Crk和CrkL在上皮性卵巢癌中的表達及意義［J］.中國全科醫(yī)學，2008，11（6A）：940.

［6］Wang H，Linghu H，Wang J，et al.The role of Crk／Dock180／Racl pathway in the malignant behavior of human ovarian cancer cell SKOV3［J］.Tumour Biol，2010，31（1）：59.

［7］Gotoh T，Hattori S，Nakamura S，et al.Identification of Rap1as a target for the Crk SH3domain－binding guanine nucleotide－releasing factor C3G［J］.Mol Cell Biol，1995，15（12）：6746.

［8］Linghu H，Tsuda M，Makino Y，et al.Involvement of adaptor protein Crk in malignan feature of human ovarian cancer cell line MCAS［J］.Oncogene，2006，25（25）：3547.

Clinical Diagnosis Significance of Conjugates of Proteins in Detecting Papillary Thyroid Microcarcinoma

AO Yong－qin.

（Department of Pathology，F(xiàn)engdu people＇s Hospital In Chongqing，Chongqing408200，China）

ObjectiveTo investigate the expression of conjugates of proteins and its clinical significance in detecting papillary thyroid microcarcinoma（CRKL）.MethodsThe thyroid tissue specimens of 120patients in our hospital from 2010to 2013were collected，including 30cases of patients whose papillary thyroid carcinoma was of diameter greater than 1cm，30cases of patients with papillary thyroid microcarcinoma，30cases with nodular goiter，and 30patients without thyroid disease.The immunohistochemical（SP）method was used to detect the expression of CRKL in specimens.ResultsThe positive rate of CRKL and average absorbance expression（MOD）in the groups of thyroid papillary microcarcinoma and of thyroid papillary carcinomais were higher than those of nodular goiter and normal thyroid groups，and the differences were statistically significant（P＜0.05）.Conclusion CRKL is highly expressed in papillary thyroid microcarcinoma，and clinical test with CRKL is helpful to determine the operation scheme for the treatment of papillary thyroid microcarcinoma.

Thyroid Neoplasms；Papilloma；Junction Protein；Papillary Thyroid Microcarcinoma

R736.1

A

2013－11－25）

1007－4287（2014）10－1615－03