鄭紅莉等

摘要[目的]明確石竹莖腐病病原菌，以期更好地防治此病害。[方法]使用常規(guī)植物病理學和分子生物學方法分離和鑒定病原菌，并研究病原菌生物學特性。[結果]石竹莖腐病病原菌為立枯絲核菌（Rhizoctonia solani）和尖孢鐮刀菌（Fusarium oxysporum）。立枯絲核菌最適生長溫度為28 ℃，最適pH為7～8，最適生長的碳源為麥芽糖、可溶性淀粉，最適氮源是蛋白胨；尖孢鐮刀菌最適生長溫度為28℃，最適pH為7～9，尖孢鐮刀菌在果糖和蔗糖中生長速度最快，葡萄糖最不利于其生長，最適氮源為蛋白胨。[結論]立枯絲核菌（Rhizoctonia solani）和尖孢鐮刀菌（Fusarium oxysporum）共同侵染石竹引起石竹莖腐病。這2種病原菌對環(huán)境的適應能力較強。

關鍵詞石竹莖腐?。徊≡?；鑒定；生物學特性

中圖分類號S681.5文獻標識碼A文章編號0517-6611（2014）06-01674-04

Abstract[Objective] To identify the pathogens and prevent carnation stem rot. [Method] The pathogens were identified and their biological characteristics were studied by molecular biology experimental techniques and phytopathological research methods. [Result] Carnation stem rot was caused by Rhizoctonia solani and Fusarium oxysporum. For Rhizoctonia solani， the optimum growth temperature and pH were 28℃ and 7-8， respectively. The fastest growth rate of the mycelium was achieved under the optimal nutrition such as carbon source for malt sugar and soluble starch， while nitrogen source for peptone. The optimal temperature for Fusarium oxysporum was 28℃ and the pH was 7-9. The mycelium grew fastest in fructose and sucrose and the most unfavorable carbon source was glucose. The optimum nitrogen source for Fusarium oxysporum was peptone. [Conclusion] Rhizoctonia solani and Fusarium oxysporum could infect Dianthus chinensis together and they had strong ability to adapt to the environment.

Key wordsCarnation stem rot； Pathogens； Identification； Biological characteristics

石竹（Dianthus chinensis）是石竹科石竹屬花卉，原產(chǎn)我國北方，生長于草原和山坡，花期5～9月。石竹在綠化應用中常大面積栽植組成花境；亦具有藥用價值，根和全草均能入藥，具有清熱利尿、破血通經(jīng)、散瘀消腫的功效[1]。

石竹性強健，不易染病，關于石竹病害報道較少，而石竹屬植物香石竹的病害研究較多，如尖孢鐮刀菌引起的枯萎病，菊歐文氏菌引起的立枯菌，單孢銹菌引起的銹病，立枯絲核菌引起的立枯病[2-3]。2012年華南農(nóng)業(yè)大學百花園內(nèi)大面積暴發(fā)石竹莖腐病，嚴重影響石竹觀賞性。

石竹莖腐病發(fā)病初期莖基部病斑黃褐色，環(huán)繞整個莖基，病部縊縮呈濕腐狀，繼而莖基部變褐腐爛，病株猝倒枯死，腐爛部位及周圍土壤可見菌絲體1材料與方法

1.1材料

病原菌：從石竹莖基部腐爛處分離得到。

培養(yǎng)基：試驗用培養(yǎng)基為PDA培養(yǎng)基和Richard培養(yǎng)基。

1.2病原菌的分離培養(yǎng)

在病斑的病健交界處切取大小為5 mm×5 mm的組織塊，采用組織分離法進行病原物的分離培養(yǎng)，通過單孢或者單菌絲分離得到純培養(yǎng)物。將分離物置于4 ℃冰箱中保存?zhèn)溆肹4]。

1.3病原菌致病性測定

根據(jù)柯赫氏法則，選擇健康的植株，將直徑5 mm的菌苔貼在刺傷的莖基部，保濕24 h，待植株發(fā)病后，再次分離培養(yǎng)病原菌。以清水接種作為對照。

1.4病原菌鑒定

1.4.1病原菌形態(tài)學鑒定。

將病原菌接種到PDA培養(yǎng)基平板上，26 ℃恒溫培養(yǎng)，觀察菌落形態(tài)。同時，在顯微鏡下觀察病原菌菌絲形態(tài)和孢子形態(tài)。

1.5病原菌生物學特性

菌絲生長及產(chǎn)孢量.將純化保存的病原菌接種至PDA培養(yǎng)基上26 ℃培養(yǎng)3 d，用打孔器取直徑5 mm的菌餅接種至測定培養(yǎng)基，培養(yǎng)3 d后用十字交叉法測量菌落直徑，分析溫度、pH、碳源、氮源對菌絲生長的影響。5 d后，用10 ml無菌水洗脫菌落表面孢子，稀釋10倍后用血球計數(shù)板測定孢子的濃度，計算每培養(yǎng)皿（直徑9 cm）的孢子數(shù)量，分析溫度、pH對產(chǎn)孢量的影響。

溫度：將病原菌接種到PDA培養(yǎng)基后，置于8、12、16、20、24、26、28、32、36 ℃的條件下避光恒溫培養(yǎng)。pH：將病原菌接種到pH 3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13的PDA培養(yǎng)基后恒溫避光培養(yǎng)。碳源、氮源分別以Richard培養(yǎng)基為基礎培養(yǎng)基，用相同含碳量的葡萄糖、麥芽糖、果糖、甘露醇和可溶性淀粉替換蔗糖作為碳源，用相同含氮量的磷酸銨、硝酸銨、硫酸銨、脲和蛋白胨替換硝酸鉀作為氮源。以上試驗每處理3次重復，除溫度試驗外，其余均在26℃條件下黑暗培養(yǎng)。

值，該研究確定了引起石竹莖腐病病原菌為立枯絲核菌（Rhizoctonia solani）和尖孢鐮刀菌（Fusarium oxysporum）。在已知的文獻中，尚未有對石竹莖腐病的研究，但對于石竹科石竹屬香石竹的莖腐病已有報道[7-8]。研究表明，引起香石竹莖腐病的主要病原菌為立枯絲核菌（Rhizoctonia solani AG4HG I）[9]，尖孢鐮刀菌引起香石竹的枯萎病[10]。該研究認為尖孢鐮刀菌和立枯絲核菌均可侵染石竹引起莖部腐爛。但該研究分離得到的立枯絲核菌是否與香石竹立枯絲核菌為同一個菌絲融合群有待于進一步研究。

立枯絲核菌和尖孢鐮刀菌均是土傳病原菌，尚無有效的防治措施。為了更好地防治石竹莖腐病，對2種病原菌的生物學特性進行研究。結果表明，立枯絲核菌最適生長溫度為28 ℃，最適pH為7～8；尖孢鐮刀菌最適生長溫度亦為28 ℃，最適pH為7～9。楊子祥等[11]對香石竹立枯絲核菌的研究表明，病原菌最適生長溫度為30℃，最適pH為5.5；王輝等[12]的研究表明，25 ℃為尖孢鐮刀菌最適生長溫度，最適pH為6，最適合尖孢鐮刀菌生長的氮源是蛋白胨。之所以存在此差異，可能是由于病原菌來源地不同，各個地區(qū)的生態(tài)條件存在差異所致。

立枯絲核菌和尖孢鐮刀菌對環(huán)境的適應能力較強，可以在各種pH土壤中存活，溫度適應范圍廣泛，對營養(yǎng)的需求具有廣泛的適應能力，能利用土壤中的各種碳和氮源營養(yǎng)。隨病原菌量的不斷積累，極易造成大面積發(fā)生和流行。種植者應高度重視，提前預防病害發(fā)生，合理輪作，同時加強抗病品種的選育。

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