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        中藥川貝對(duì)小鼠急性毒性和致突變性的研究

        2014-05-30 17:24:15艾霞徐恩亞
        安徽農(nóng)業(yè)科學(xué) 2014年9期
        關(guān)鍵詞:急性毒性

        艾霞 徐恩亞

        摘要[目的]通過急性毒性試驗(yàn)和微核試驗(yàn)了解川貝水提取物對(duì)小鼠的急性毒性和致突變性。[方法]川貝急性毒性試驗(yàn)中采用最大給藥量,記錄小鼠給藥1周內(nèi)的生理反應(yīng)及體征變化,然后通過剖檢及血液學(xué)指標(biāo)研究川貝的急性毒性。通過微核試驗(yàn)檢測(cè)川貝水提取物對(duì)小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞的影響,了解川貝的致突變性。[結(jié)果]小鼠在最大給藥量折合生藥為90 000 mg/kg的劑量下沒有明顯異常反應(yīng),體重、血液指標(biāo)與對(duì)照組無差異,剖檢無內(nèi)臟病變。微核試驗(yàn)結(jié)果呈陰性。[結(jié)論]川貝水提取物對(duì)小鼠無急性毒性及致突變性,可作為獸醫(yī)臨床用藥安全使用。

        關(guān)鍵詞川貝水提取物;急性毒性;最大給藥量;微核試驗(yàn)

        中圖分類號(hào)S567文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào)0517-6611(2014)09-02615-02

        作者簡(jiǎn)介艾霞(1979-),女,山東泰安人,講師,碩士,從事基礎(chǔ)獸藥研究

        川貝是一種臨床常用中藥材,是百合科植物川貝母(Fritillaria cirrhosa D. Don)、暗紫貝母(Fritillaria unibracteata Hsiao et K. C. Hsia)、甘肅貝母(Fritillaria przewalskii Maxim)、梭砂貝母(Fritillaria delavayi Franch)的干燥鱗莖,其性甘、苦,微寒,歸心、肺經(jīng)[1],有潤(rùn)肺散結(jié)、止咳化痰的功效。研究表明,川貝具有鎮(zhèn)咳[2]、祛痰[3]、平喘[4-6]、鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛[7]、抗氧化[8]、抗?jié)僛9]、抗菌[6,10]等功能,臨床上可用于治療急性氣管炎、支氣管炎、肺結(jié)核等病癥。筆者通過川貝水提取物的急性毒性和微核試驗(yàn),了解川貝對(duì)小鼠的毒性和致突變性,旨在為中藥川貝在畜禽飼料添加劑中的應(yīng)用和獸醫(yī)臨床用藥安全提供理論依據(jù)。

        1 材料與方法

        1.1 材料

        1.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。清潔級(jí)小鼠購于中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所,昆明種,雌雄各半,體重為20~24 g。

        1.1.2 試驗(yàn)材料。川貝購自天津中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院。

        1.2方法

        1.2.1 川貝水提取物的浸提。在200 ml蒸餾水中加入干燥川貝60 g,大火加熱沸騰后改為小火煎煮30 min,過濾煎液后再添加200 ml蒸餾水于藥渣中,沸水浸提20 min,濃縮2次濾液體積至60 mI,最終濃度達(dá)到1 g/ml(即1 g生藥/ml),置于冰箱中冷藏備用。

        1.2.2 急性毒性試驗(yàn)。

        1.2.2.1 預(yù)試驗(yàn)。隨機(jī)分配每組10只小鼠(禁食12 h),雌雄各半,共2組。每組小鼠同時(shí)均按照0.03 ml/g的給藥劑量灌胃1次,川貝提取物給藥濃度分別為1.0和0.1 g/ml。給藥后小鼠常規(guī)飼養(yǎng),觀察并記錄1周內(nèi)各組的死亡數(shù)量,找出10%和100%的藥物致死濃度。若小鼠均無死亡,可以采用最大給藥量進(jìn)行急性毒性試驗(yàn)。

        1.2.2.2 最大給藥量試驗(yàn)。設(shè)置試驗(yàn)組和對(duì)照組,各組隨機(jī)分配20只小鼠(禁食不禁水12 h),雌雄各半。參照預(yù)試驗(yàn)結(jié)果,試驗(yàn)組采用100%給藥濃度(1.0 g/ml),對(duì)照組給予生理鹽水,2組均采用最大體積0.03 ml/g的灌胃量。每隔4 h灌胃1次,共灌胃3次。灌胃后的小鼠正常飼養(yǎng),觀察并記錄1周內(nèi)2組小鼠的體征變化及生理反應(yīng)。1周后剖檢觀察各組小鼠主要臟器(肝、心、脾、腎)的病變情況,計(jì)算臟器系數(shù)(各臟器重量與體重之比),并測(cè)定各組小鼠的血液學(xué)指標(biāo)。

        1.2.3 微核試驗(yàn)。小鼠50只,平均隨機(jī)分為5組,雌雄各半。陽性對(duì)照組經(jīng)腹腔注射環(huán)磷酰胺45 mg/kg;3組給藥組灌服川貝提取物,灌胃劑量分別為2.0、1.0和0.1 g/kg;陰性對(duì)照組灌服蒸餾水,24 h后各組均重復(fù)給藥1次。第2次給藥6 h后處死小鼠,迅速取兩側(cè)股骨制骨髓涂片,經(jīng)甲醇固定、吉姆薩染色后鏡檢并計(jì)數(shù)每只小鼠的1 000個(gè)嗜多染紅細(xì)胞,記錄其中含微核的嗜多染紅細(xì)胞數(shù),按照以下公式計(jì)算嗜多染紅細(xì)胞微核率:嗜多染紅細(xì)胞微核率(‰)=含微核的嗜多染紅細(xì)胞數(shù)/嗜多染紅細(xì)胞總數(shù)×1 000。

        2結(jié)果與分析

        2.1急性毒性試驗(yàn)

        2.1.1預(yù)試驗(yàn)。以100%最大給藥量和10%給藥量給藥后,2組小鼠活動(dòng)、飲食均未見異常,未表現(xiàn)中毒反應(yīng),1周內(nèi)均未見死亡,無法獲得半數(shù)藥物致死量,因此采用最大給藥量試驗(yàn)。

        2.1.2 最大給藥量試驗(yàn)。

        2.1.2.1 小鼠行為及體重變化。由表1可知,以最大給藥濃度和最大給藥體積給藥3次(最大給藥量為60 000 mg/kg)后,發(fā)現(xiàn)給藥組小鼠僅給藥當(dāng)天少動(dòng)且進(jìn)食減少。給藥1周內(nèi)2組小鼠的進(jìn)食、排便、皮毛、呼吸、行動(dòng)均無異常,無其他毒性反應(yīng)。1周內(nèi)2組小鼠體重均有所增長(zhǎng),試驗(yàn)組與對(duì)照組無顯著性差異(P>0.05)。

        2.1.2.2 臟器的病理剖檢。1周后剖檢2組小鼠肝、腎、心、脾,發(fā)現(xiàn)試驗(yàn)組與對(duì)照組小鼠各臟器形狀、大小與色澤均正常,未見病變情況。由表2可知,試驗(yàn)組小鼠的肝、腎、心、脾的臟器系數(shù)與對(duì)照組無顯著性差異(P>0.05)。

        2.1.2.3 血液生理生化指標(biāo)。由表3可知,試驗(yàn)組小鼠血液的紅細(xì)胞(RBC)、白細(xì)胞(WBC)、血紅蛋白(HGB)、堿性磷酸酶(ALT)、天門冬氨酸氨基移換酶(AST)均處于正常范圍,與對(duì)照組無顯著差異(P>0.05)。

        2.2微核試驗(yàn)由表4可知,3組給藥組與陰性對(duì)照組之間均無顯著性差異(P>0.05),陽性對(duì)照組與其余4組均存在極顯著性差異( P<0.01),試驗(yàn)結(jié)果表明川貝提取物微核試驗(yàn)結(jié)果呈陰性,對(duì)小鼠無致突變性。

        表4小鼠微核試驗(yàn)結(jié)果(n=10)

        組別微核細(xì)胞數(shù)微核率∥‰陽性對(duì)照組37837.8陰性對(duì)照組191.93 g/ml給藥劑量組181.82 g/ml給藥劑量組202.01 g/ml給藥劑量組191.9注:各組嗜多染紅細(xì)胞數(shù)均為10 000。

        3 結(jié)論與討論

        該試驗(yàn)中川貝水提取物在最大給藥量下未導(dǎo)致小鼠死亡,且小鼠均沒有表現(xiàn)出中毒反應(yīng),各項(xiàng)生理指標(biāo)均正常,表明川貝急性毒性極低,這與以前研究結(jié)果相符[11]。微核試驗(yàn)結(jié)果呈陰性,表明川貝水提取物無致突變性。由此可見,川貝可較安全地應(yīng)用于獸醫(yī)臨床治療。然而,目前對(duì)川貝的研究主要集中于少數(shù)生物堿單體,大量單體成分及非生物堿部分的作用機(jī)制在臨床治療上還有待進(jìn)一步探討。川貝的鎮(zhèn)咳、平喘等一系列作用機(jī)制仍需深入研究。因此,在現(xiàn)有成果的基礎(chǔ)上,應(yīng)進(jìn)一步深入開展工作,為川貝這種中藥資源的綜合開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。

        參考文獻(xiàn)

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