王英慧 王麗茹* 孫 巍 張晨瑤 史恩紅 董 霞

（黑龍江省醫(yī)院血液腫瘤科，黑龍江 哈爾濱 150036）

晚期非小細(xì)胞肺癌患者外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測5例并文獻(xiàn)復(fù)習(xí)

王英慧 王麗茹* 孫 巍 張晨瑤 史恩紅 董 霞

（黑龍江省醫(yī)院血液腫瘤科，黑龍江 哈爾濱 150036）

循環(huán)腫瘤細(xì)胞；非小細(xì)胞肺癌

肺癌目前是世界上最致命的惡性腫瘤，每年有超過100萬人因此病喪生[1]。在我國肺癌也是發(fā)病率及病死率最高的腫瘤，其中，非小細(xì)胞肺癌（non-small cell lung carcinoma，NSCLC）約占所有肺癌病例的85%，而其中超過90%的患者最終死于遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。故尋找能夠進(jìn)行早期診斷、預(yù)測轉(zhuǎn)移的方法對(duì)于提高肺癌患者生存率有重要作用。外周血中循環(huán)腫瘤細(xì)胞（circulating tumor cell，CTC）的出現(xiàn)是腫瘤發(fā)生遷移的重要標(biāo)記，且有研究表明，CTC的檢測可為肺癌的預(yù)后判斷和治療效果監(jiān)測提供重要參考信息[2-3]。CTC的檢測也逐步應(yīng)用于臨床，現(xiàn)將本院5例晚期非小細(xì)胞肺癌患者外周血CTC的檢測情況作一總結(jié)。

1 資料與方法

1.1 病例資料

2013年5例經(jīng)病理學(xué)確診的NSCLC患者，其中男性3例，女性2例；年齡45～60歲。Ⅲ期3例，Ⅳ期2例；腺癌3例，鱗癌2例。均行規(guī)范性化療，2周期后行全面檢查并參照實(shí)體瘤療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)（RECIST）評(píng)價(jià)療效[4]，分為完全緩解（CR）、部分緩解（PR）、穩(wěn)定（SD）及進(jìn)展（PD）。詳見表1。

1.2 儀器和試劑

1.3 標(biāo)本采集

嚴(yán)格消毒后，應(yīng)用真空采血針、試劑盒提供的BD公司ACD采血管采取靜脈血，棄去穿刺后的前2 mL，采集此后的7.5 mL靜脈血，并立即頭尾顛倒混勻采血管5次，并在采集后 24 h內(nèi)室溫避光送檢。

1.4 操作流程

2 結(jié) 果

5例患者中有3例治療前檢出CTC。化療2周期后2例患者同意復(fù)查CTC，其中有1例檢出CTC，但較治療前下降。見表1。

3 討 論

CTC是指自發(fā)或因診療操作由實(shí)體瘤或轉(zhuǎn)移灶釋放進(jìn)入外周血循環(huán)中的腫瘤細(xì)胞，由Ashworth[5]首次報(bào)道并提出CTC的概念，CTC對(duì)于腫瘤的轉(zhuǎn)移起重要作用。隨著研究的逐步深入，發(fā)現(xiàn)準(zhǔn)確檢測CTC不僅有助于腫瘤轉(zhuǎn)移的早期診斷，而且還有助于監(jiān)測治療后的復(fù)發(fā)、患者的預(yù)后及個(gè)體化靶向治療的療效。但CTC在腫瘤患者外周血中含量極微，每106～107個(gè)單個(gè)核細(xì)胞中才有1個(gè)CTC[5]。故首先需要富集腫瘤細(xì)胞以提高檢測的靈敏度，富集的方法主要有2種，一種是根據(jù)細(xì)胞形態(tài)通過細(xì)胞的大小、密度等富集，另一種方法則是根據(jù)細(xì)胞上的特異性標(biāo)志物進(jìn)行富集。通過富集CTC后的檢測分析方法主要包括細(xì)胞計(jì)數(shù)法和基于核酸技術(shù)的分子檢測法[6]。從而針對(duì)CTC的檢測技術(shù)主要分為細(xì)胞富集技術(shù)和分析技術(shù)兩類，將二者完美結(jié)合從而達(dá)到檢測CTC的目的。美國Cytelligen公司開發(fā)的差減富集法+瘤標(biāo)iFISH為新一代CTC的檢測技術(shù)。該技術(shù)應(yīng)用特殊免疫磁珠和獨(dú)特的非血源性細(xì)胞分離介質(zhì)快速高效去除腫瘤患者血液中的白細(xì)胞、紅細(xì)胞，從而有效富集血液中的非血液性循環(huán)腫瘤細(xì)胞，然后將瘤標(biāo)免疫熒光染色與FISH技術(shù)整合為同步實(shí)施的瘤標(biāo)iFISH，從而能高敏感性、高特異性地有效鑒別各種非血源性腫瘤上皮細(xì)胞[7]。本院采用該法檢測5例初治NSCLC患者，結(jié)果有3例可檢出CTC，提示該系統(tǒng)有較高靈敏性。

有研究分析表明，CTC數(shù)目與RECIST評(píng)價(jià)肺癌療效具有一定的吻合度，兩種評(píng)價(jià)方法無差異，CTC數(shù)目與臨床療效呈負(fù)相關(guān)。通過CTC數(shù)目可以預(yù)測晚期NSCLC患者的化療療效，相比RECIST評(píng)價(jià)更能反映患者病情的微觀變化和腫瘤轉(zhuǎn)移的特征，具有前瞻性、簡便性和可重復(fù)性等優(yōu)點(diǎn)，有利于NSCLC患者的個(gè)體化治療[8]。本文3例檢出CTC的患者有2例患者治療后復(fù)查均提示CTC 數(shù)目較治療前下降，同時(shí)，RECIST評(píng)價(jià)療效分別為SD及PR，亦提示兩種方法具有一定的吻合度。采用該法檢測外周血CTC數(shù)目評(píng)價(jià)NSCLC療效具有一定指導(dǎo)意義。

盡管目前對(duì)CTC檢測無法統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，但大量研究結(jié)果已證明CTC的存在與腫瘤患者無病生存時(shí)間（disease free survival，DFS）、無進(jìn)展生存期（progression free survival，PFS）及總生存期（overall survival，OS）相關(guān)[9]。在非小細(xì)胞肺癌系統(tǒng)中，Krebs等發(fā)現(xiàn)化療前檢測少于5個(gè)CTC的患者比多于5個(gè)CTC的患者有更長的無進(jìn)展生存期和總生存期[10]。本文中CTC數(shù)＜5的3例患者經(jīng)2個(gè)周期治療均達(dá)PR，提示預(yù)后相對(duì)較好；而CTC數(shù)＞5的2例患者分別為SD及PD，提示預(yù)后不佳。外周血中CTC數(shù)量可以作為NSCLC患者預(yù)后的判斷依據(jù)之一。

CTC檢測技術(shù)發(fā)展迅速并逐步應(yīng)用于臨床，CTC計(jì)數(shù)對(duì)肺癌療效判定以及預(yù)后判斷等有重要指導(dǎo)意義，但任何一種檢測技術(shù)都有不足之處，差減富集法+瘤標(biāo)iFISH技術(shù)雖然有較高敏感性及特異性，但也未達(dá)到100%，臨床上仍需結(jié)合其他檢查等綜合分析。另外，動(dòng)態(tài)檢測CTC變化，更有利于發(fā)揮其臨床價(jià)值，但因其費(fèi)用昂貴，目前臨床上尚難以廣泛開展。

[1] Anon. Moving cancer up the global health agenda[J].Lancet,2010, 375(9731):2051.

[2] Punnoose EA1,Atwal S,Liu W,et al.Evaluation of circulating tumor cells and circulating tumor DNA in non-small cell lung cancer: association with clinical endpoints in a phase II clinical trial of pertuzumab and erlotinib[J].Clin Cancer Res,2012,18(8): 2391-2401.

[3] 凌蕓,王芳,朱全,等.非小細(xì)胞肺癌特異性循環(huán)腫瘤細(xì)胞的檢測及其臨床意義.中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2013,36(11):1002-1007.

[4] Eisenhauer EA,Therasse P,Bogaerts J,et al.New response evalua-tion criteria in solid tumours: revised RECIST guideline(versuib 1.1) [J].Eur J Cancer,2009,45(2):228-247.

[5] Ashwoprth TR.A case of cancer in which cells similar to those in the tumours were seen in the blood after death[J].Aust Med J,1869, 14:146-149.

[6] 魏葆琚,韓曉紅.外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞的檢測及其臨床意義[J].中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2012,35(11):1053-1056.

[7] Lin P,Cui W,Shuman M.A Novel Integrated Subtraction Enrichment Technology (SET) and Immunostaining-FISH (iFISH) to Detect Circulating Tumor Cell[J].Sci Trans Med Submitted,2013,56(3): 2126-2127..

[8] 李晶,姜北,萬鵬,等.晚期非小細(xì)胞肺癌患者循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測的臨床意義[J].中國全科醫(yī)學(xué),2013,16(9):3202-3204.

[9] 吳飛,婁加陶.循環(huán)腫瘤細(xì)胞在肺癌診治中的應(yīng)用[J].中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2013,36(11):983-986.

[10] Matthew GK,Robert S,lynsey P,et al.Evaluation and prognostic signif i cance of circulating tumor cells in patients with non-smallcell lung cancer[J].J Clin Oncol,2011,29(12):1556-1563.

表1 5例NSCLC患者的臨床資料及CTC檢測結(jié)果

R734.2

B

1671-8194（2014）22-0269-02

*通訊作者：E-mail：wangliru106@163.com