周紅敏李亞萍張明昊*

（1 鄭州市第六人民醫(yī)院，河南 鄭州 450061；2 鄭州市中醫(yī)院，河南 鄭州450007；3 河南中醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，河南 鄭州450046）

更年樂(lè)水丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

周紅敏1李亞萍2張明昊3*

（1 鄭州市第六人民醫(yī)院，河南 鄭州 450061；2 鄭州市中醫(yī)院，河南 鄭州450007；3 河南中醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，河南 鄭州450046）

目的建立更年樂(lè)水丸的質(zhì)量控制方法。方法采用薄層色譜法對(duì)女貞子、淫羊藿進(jìn)行鑒別，應(yīng)用高效液相色譜法測(cè)定淫羊藿中的淫羊藿苷含量。結(jié)果TLC鑒別女貞子、淫羊藿方法簡(jiǎn)便易行，斑點(diǎn)清晰，專屬性強(qiáng)；高效液相色譜法測(cè)定淫羊藿苷含量，平均回收率為94.17%，RSD為2.2%（n=6）。結(jié)論該方法合理，簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確，可用于更年樂(lè)水丸的質(zhì)量控制。

更年樂(lè)水丸；淫羊藿苷；薄層色譜法；高效液相色譜法

更年樂(lè)水丸是河南中醫(yī)學(xué)院自主研制的用于治療婦女更年期綜合征的中藥制劑，由淫羊藿、巴戟天、肉蓯蓉、女貞子、枸杞子、白芍、香附子、石菖蒲、合歡皮等11味中藥加工而成，具有養(yǎng)心養(yǎng)腎、調(diào)補(bǔ)沖任的功能[1]，可提高機(jī)體免疫力，總體調(diào)節(jié)神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)，能夠全面改善圍絕經(jīng)期女性出現(xiàn)的夜寐不安、心悸、耳鳴、烘熱汗出、煩躁易怒、腰背酸痛等癥狀。為了初步建立更年樂(lè)水丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，本文對(duì)該方中淫羊藿、女貞子等2味中藥進(jìn)行了薄層定性鑒別研究，并以淫羊藿苷為指標(biāo)成分進(jìn)行了含量測(cè)定研究。

1 儀器與試藥

DIONEX高效液相色譜儀購(gòu)自美國(guó)；依利特C18色譜柱購(gòu)自大連依利特分析儀器有限公司。淫羊藿苷對(duì)照品：中國(guó)藥品生物制品檢定所；批號(hào)：110737-200414。齊墩果酸對(duì)照品：購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所。甲醇為色譜純，其他為分析純。

2 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

2.1 薄層鑒別[2]

2.1.1 淫羊藿的鑒別

取淫羊藿10 g，加乙醇50 mL，超聲10 min，殘?jiān)?0 mL蒸餾水使之溶解，乙酸乙酯萃取4次，每次20 mL，合并乙酸乙酯液，殘?jiān)右掖贾? mL，溶解后作為供試品溶液。另取本品加甲醇制成對(duì)照品溶液（0.5 mg/mL）。以上三種溶液各3 μL，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水（10∶1∶1∶1）為展開(kāi)劑，在365 nm波長(zhǎng)的紫外燈下檢視。供試品色譜顯暗紅色斑點(diǎn)。陰性無(wú)干擾，見(jiàn)圖1。

2.1.2 女貞子的鑒別

取本品10 g，加乙醚30 mL，超聲提取20 min，濾過(guò)，加乙醇稀釋至2 mL，作為供試品溶液。同法制備陰性對(duì)照品溶液。另取齊墩果酸加乙醇制成對(duì)照品（1 mg/mL）。以薄層色譜法為依據(jù)進(jìn)行試驗(yàn)，吸取以上3種溶液，以環(huán)己烷-丙酮-乙酸乙酯（5∶2∶1）為展開(kāi)劑，噴以10%硫酸乙醇溶液，110 ℃加熱至斑點(diǎn)顯現(xiàn)清晰。在供試品色譜圖對(duì)照品相應(yīng)的位置上出現(xiàn)顏色相同的斑點(diǎn)。陰性則無(wú)斑點(diǎn)顯現(xiàn)，見(jiàn)圖2。

2.2 淫羊藿苷的含量測(cè)定[3]

2.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

填充劑選擇十八烷基鍵合硅膠，甲醇-水（55∶45）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)設(shè)定為270 nm。理論塔板數(shù)：淫羊藿苷不低于1500，流速0.8 mL/min；柱溫30 ℃。

圖1 淫羊藿的薄層圖譜

圖2 女貞子薄層色譜圖

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取淫羊藿苷4.9 mg，加甲醇溶解、稀釋，制成0.49 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。

2.2.3 制備供試品溶液

精密稱取本品2 g，置索氏提取器中，加60 mL三氯甲烷脫脂后，殘?jiān)?0 mL甲醇提取4 h，揮干甲醇，殘?jiān)右掖级ㄈ葜?0 mL。作為供試品溶液。

2.2.4 線性關(guān)系

精密吸取0.2、0.5、1、2、3 mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液注入5 mL量瓶中，以甲醇稀釋，分別精密吸取10 μL，注入液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定。進(jìn)樣量（mg）設(shè)為橫坐標(biāo)，峰面積設(shè)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程：Y=37.3X-1.4586（R2=0.9999），見(jiàn)圖3。

圖3 高效液相色譜

2.2.5 精密度試驗(yàn)

精密吸取淫羊藿苷對(duì)照品溶液（0.098 mg/mL）10 μL，使用液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定。進(jìn)行重復(fù)測(cè)定5次后，峰面積均值為34.91314，RSD=1.06%（n=5），說(shuō)明有良好的精密度。

2.2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取本品2 g，按供試品溶液制備和測(cè)定項(xiàng)下進(jìn)行操作。分別在0、2、4、8、12、24 h進(jìn)樣，峰面積均值為62.1958，RSD＝1.30%（n=6），24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取本品2 g，共6份，進(jìn)行重復(fù)性試驗(yàn)。峰面積均值為62.9209，RSD＝4.2%（n=6），結(jié)果表明，重復(fù)性良好。

表1 加樣回收率結(jié)果（n=6）

2.2.8 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱取淫羊藿苷對(duì)照品10 mg加甲醇，使之溶解，作為標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。精密量取6份已知含量的水丸1 g，置索氏提取器中。三氯甲烷脫脂后，精密吸取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備儲(chǔ)備液0.4 mL，分置上述索氏提取器中，加甲醇適量，提取4 h，濾液揮干，殘?jiān)?0 mL蒸餾水使溶解，乙酸乙酯萃取4次，每次20 mL，合并乙酸乙酯液，揮干，殘?jiān)右掖既芙?，定容? mL，作為供試品溶液。測(cè)定其含量，回收率為94.17%，RSD為2.2%（n=6）。見(jiàn)表1，說(shuō)明本法有良好的回收率。

2.2.9 測(cè)定法

精密吸取10 μL對(duì)照品溶液與10 μL樣品溶液，加入液相色譜儀，測(cè)定。

2.2.10 樣品含量測(cè)定

見(jiàn)表2。

本品每克含淫羊藿以淫羊藿苷（C33H40O15）計(jì)，不得少于0.4 mg。

3 討 論

祖國(guó)醫(yī)學(xué)認(rèn)為，女子一生中生殖、生長(zhǎng)、發(fā)育、衰老的全過(guò)程與腎有著密切的聯(lián)系，故有“女子以腎為先天”之說(shuō)。圍絕經(jīng)期女性歷經(jīng)、帶、胎、產(chǎn)，屢耗氣血，主要累及心、肝、脾、腎，出現(xiàn)多臟腑功能紊亂，機(jī)體陰平陽(yáng)秘的局面被破壞，從而變生諸癥。目前西醫(yī)常采用激素替代療法治療圍絕經(jīng)期綜合征，但其有禁忌證和不良反應(yīng)且潛在致癌。而中醫(yī)藥治療本病具有療效顯著、不良反應(yīng)小等優(yōu)點(diǎn)，在治療圍絕經(jīng)期綜合征方面具有重要意義[4]。實(shí)驗(yàn)所用制劑更年樂(lè)水丸是依據(jù)多年臨床經(jīng)驗(yàn)組方，經(jīng)現(xiàn)代工藝加工而成，其中淫羊藿、巴戟天、肉蓯蓉等3味補(bǔ)腎陽(yáng)之藥為君藥；女貞子、枸杞子等2味補(bǔ)肝腎陰之藥為臣藥，能有效改善圍絕經(jīng)期女性的各種癥狀。相關(guān)研究表明[5，6]，淫羊藿可使心腦血管血流量增加，促進(jìn)造血功能，而淫羊藿苷是淫羊藿的有效成分之一，故選擇淫羊藿苷作為控制本品質(zhì)量的指標(biāo)成分，從而能更好地控制產(chǎn)品質(zhì)量。本文提供了更年樂(lè)水丸定性和定量的測(cè)定方法，為全面控制產(chǎn)品質(zhì)量提供了依據(jù)。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果（n=6）

[1] 伍柏堅(jiān)，黃曉丹，和海龍.更年樂(lè)膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的改進(jìn)研究[J].廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào)，2013，29（6）：1-6.

[2] 張兆旺.中藥藥劑學(xué)[M].北京：中國(guó)中醫(yī)藥出版社，2003：364-366.

[3] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：2010年版一部[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010.

[4] 張麗霞，李翠萍，黃霞，等.更年樂(lè)水丸對(duì)圍絕經(jīng)期造模大鼠內(nèi)分泌系統(tǒng)的影響[J].中華中醫(yī)藥雜志，2009，24（11）：1525-1526.

[5] 范曾麗，權(quán)秋梅.淫羊藿的藥理研究進(jìn)展[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，40（17）：9264-9266.

[6] 賈丹兵，劉珊，李乃民，等.HPLC測(cè)定參姜鎖陽(yáng)益氣片中淫羊藿苷的含量[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2011，17（1）:35-36.

R282.710.3

B

1671-8194（2014）21-0091-02

河南省教育廳自然科學(xué)研究項(xiàng)目（2006320006）河南中醫(yī)學(xué)院教育教學(xué)改革項(xiàng)目（2013JX14）

*通訊作者