王振明

（濰坊市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，山東 濰坊 261041）

HPV E6/E7 mRNA檢測(cè)對(duì)宮頸細(xì)胞學(xué)診斷為ASC-H的分流作用

王振明

（濰坊市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，山東 濰坊 261041）

目的HPV E6/E7 mRNA檢測(cè)對(duì)宮頸細(xì)胞學(xué)診斷為ASC-H的分流作用。方法對(duì)68例ASC-H患者進(jìn)行HPV E6/E7 mRNA及高危型HPV檢測(cè)，并行陰道鏡檢查及活檢，分析其結(jié)果之間的關(guān)系。結(jié)果HPV E6/E7 mRNA方法檢出ASC-H中CIN2 +宮頸病變的敏感性為63.2%，特異性為75.5%，陽性預(yù)測(cè)值為50%，陰性預(yù)測(cè)值為84.1%。HPV E6/E7 mRNA方法的特異性及陽性預(yù)測(cè)值明顯高于高危HPV方法。結(jié)論HPV E6/E7 mRNA可以作為ASC-H患者是否需要陰道鏡檢查的一個(gè)分流指標(biāo)。

HPV；E6/E7；mRNA；ASC-H

2001 TBS宮頸細(xì)胞學(xué)報(bào)告系統(tǒng)將不典型鱗狀上皮細(xì)胞（atypical squamous cells，ASC）分為2個(gè)類型：不能明確意義的不典型鱗狀上皮細(xì)胞（ASC-US）及不除外高度鱗狀細(xì)胞病變的不典型鱗狀上皮細(xì)胞（ASC-H）。美國(guó)陰道鏡與宮頸病理協(xié)會(huì)主張對(duì)ASC-H患者立即作陰道鏡檢查。為避免低風(fēng)險(xiǎn)人群的過度診斷及侵入性檢查，有研究采用高危人乳頭瘤病毒（HR-HPV）檢測(cè)作為ASC-H患者分流的工具[1]。高危型HPV中致癌基因?yàn)?E6/E7 基因[2]，而 HPV E6/E7 mRNA 含量能較好地反映致癌基因E6/E7的活動(dòng)度，可以更為直觀的評(píng)估高度宮頸鱗狀上皮細(xì)胞內(nèi)病變及宮頸癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)和預(yù)后[3，4]。本研究通過68例ASC-H患者的HPV E6/E7 mRNA進(jìn)行檢測(cè)，并與高危型HPV檢測(cè)比較，探討其對(duì)ASC-H患者分流的價(jià)值。

表2 HPV E6/E7 mRNA、HC2 HPV DNA檢測(cè)方法對(duì)CIN2+的診斷效率

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象

選擇2012年10月至2013年10月于濰坊市人民醫(yī)院就診，TCT檢查結(jié)果為ASC-H；并且行HPV E6/E7 mRNA檢測(cè)、HR-HPV檢測(cè)及陰道鏡下活檢的68例患者作為研究對(duì)象，患者年齡26～69歲，平均年齡45歲。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集

所有受試者由醫(yī)師以窺器暴露子宮頸，擦凈子宮頸口分泌物，用宮頸刷在宮頸口稍用力順時(shí)針旋轉(zhuǎn)3圈后取出，將宮頸脫落細(xì)胞標(biāo)本放入專用保存管中4 ℃保存。

1.2.2 HR-HPV DNA檢測(cè)

采用凱普公司的醫(yī)用核酸快速雜交儀及配套試劑盒檢測(cè)21種HPV亞型，其中13種HR-HPV（16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59和68）。

1.2.3 HPV E6/E7 mRNA檢測(cè)

采用以實(shí)時(shí)多重核酸序列擴(kuò)增（NABSA）技術(shù)為基礎(chǔ)的PreTect HPVProofer檢測(cè)法，檢測(cè)試劑為NucliSENS EasyQ HPV 1.0試劑盒，能檢測(cè)處HPV16、18、31、33和45 五種高危HPV亞型的E6/E7 mRNA表達(dá)。

1.2.4 陰道鏡檢查及活檢

對(duì)68例ASC-H 患者由臨床醫(yī)師進(jìn)行陰道鏡檢查，并對(duì)可疑病灶進(jìn)行陰道鏡下定位活檢，未見明顯異常者，采取3、6、9、12點(diǎn)活檢。所有病理切片均由資深病理學(xué)專家復(fù)核。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，各組間率的比較采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 ASC-H 患者HPV E6/E7 mRNA、HR-HPV DNA檢測(cè)結(jié)果比較（表1）。68例ASC-H 患者經(jīng)陰道鏡活檢，包括19例宮頸炎，30例CIN1，10例CIN2，8例CIN3及1例宮頸癌。CIN2+組HPV E6/E7 mRNA、HR-HPV DNA陽性率均明顯高于CIN2-組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。其中CIN2- 組（包含CIN1及宮頸炎）HPV E6/E7 mRNA陽性率（24.5%）明顯低于HR-HPV DNA的陽性率（44.9%），顯示出較高的特異性。

表1 68例ASC-H 患者HPV E6/E7 mRNA、HR-HPV DNA檢測(cè)結(jié)果

2.2 HPV E6/E7 mRNA、HC2 HPV DNA檢測(cè)方法對(duì)CIN2+的診斷效率的比較（表2）。HPV E6/E7 mRNA方法檢出ASC-H中CIN2+宮頸病變的敏感性為63.2%，低于HR-HPV DNA方法，但特異性顯著高于HRHPV DNA方法。HPV E6/E7 mRNA方法檢出ASC-H中CIN2 +的陰性預(yù)測(cè)值與HR-HPV DNA方法無明顯差別，但陽性預(yù)測(cè)值明顯高于HRHPV DNA方法。

3 討 論

宮頸細(xì)胞學(xué)檢查是宮頸病變的重要檢查手段，目前采用國(guó)際通用的2001 TBS報(bào)告系統(tǒng)。涂片中的異常細(xì)胞僅有1個(gè)或2個(gè)，不足以診斷鱗狀上皮內(nèi)高度病變時(shí)，報(bào)告ASC-H。美國(guó)陰道鏡與宮頸病理協(xié)會(huì)主張對(duì)ASC-H患者立即作陰道鏡檢查。本次研究在68例ASC-H患者的病理組織學(xué)診斷結(jié)果中，19例 ASC-H患者（27.9%）為隱藏的CIN2+宮頸病變患者，說明ASC-H患者有較高的高度宮頸鱗狀上皮細(xì)胞內(nèi)病變患病率。但是，研究中也有49例 ASC-H 患者（72.1%）為CIN1與宮頸炎患者，這類患者在診療上僅需要按時(shí)隨訪，因此，積極的陰道鏡檢查可能存在過度診斷，由此會(huì)給患者帶來不良感受。合理有效地分別對(duì)待ASC-H患者的處理，對(duì)臨床醫(yī)師來說始終是一個(gè)不可避免的難題。大量流行病學(xué)和生物學(xué)研究表明，反復(fù)持續(xù)的高危型HPV感染是宮頸癌及其癌前病變發(fā)病的主要危險(xiǎn)因素，針對(duì)ASC-H病例HR-HPV檢測(cè)呈陽性者，進(jìn)一步行陰道鏡活檢可以縮小有創(chuàng)檢查的人群范圍，使其成為較好的分流方式[5]。但是，HPV感染的普遍性和感染后有一過性消除的特點(diǎn)，導(dǎo)致HPV檢測(cè)的特異性不高。

E6/E7基因是高危型HPV中的兩條癌基因片段，它們是導(dǎo)致宮頸細(xì)胞癌變的關(guān)鍵。E6蛋白能結(jié)合P53蛋白，使P53蛋白失去抑癌作用。E7蛋白能調(diào)控Rb家族及細(xì)胞周期調(diào)控蛋白，從而使細(xì)胞無限增殖。一旦HPV 整合入人基因組，E6/E7 mRNA的表達(dá)不受限制，將增加到一個(gè)引起惡性轉(zhuǎn)化的水平，檢測(cè)這種癌基因的轉(zhuǎn)錄即能確診高危反復(fù)感染者。有文獻(xiàn)報(bào)道E6/E7 mRNA 水平與病變的嚴(yán)重程度相關(guān)，在高級(jí)別宮頸病變中對(duì)高危HPV mRNA 檢測(cè)相比HPV DNA 檢測(cè)有更好的特異性[6]。本研究對(duì)68例ASC-H患者的HPV E6/E7 mRNA及HR-HPV DNA檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，在檢出CIN2+宮頸病變方面，HPV E6/E7 mRNA較HR-HPV DNA具有更高的特異性和陽性預(yù)測(cè)值。對(duì)HPV E6/E7 mRNA陽性ASC-H患者立即進(jìn)行陰道鏡活檢，陰性ASC-H患者進(jìn)行隨訪，我們認(rèn)為是可行的。作為ASC-H分流的一種新方法，需要進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量來探討HPV E6/E7 mRNA檢測(cè)對(duì)ASC-H的分流作用。

[1] 梅平,劉艷輝,李旻,等.高危型人乳頭狀瘤檢測(cè)在不除外高度鱗狀上皮內(nèi)病變的不典型鱗狀上皮細(xì)胞中的意義[J].中華病理學(xué)雜志,2009,38(5):337-339.

[2] Moody CA,Laimins LA.Human papillomavirus oncoproteins: pathways to transformation[J].Nat Rev Cancer,2010,10(8):550-560.

[3] 盧文波,姜智南,陳順美,等.人乳頭狀瘤病毒E6/E7mRNA檢測(cè)宮頸高度病變的臨床評(píng)價(jià)[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志,2009,19(22):3145-3147.

[4] Hovland S,Muller S,Skomedal H,et al.E6/E7 mRNA expression analysis: a test for the objective assessment of cervical adenocarcinoma in clinical prognostic procedure[J].Int J Oncol,2010,36(6):1533-1539.

[5] 盧薇薇,任國(guó)平,呂梨.高危型HPV-DNA 檢測(cè)對(duì)宮頸細(xì)胞學(xué)診斷為ASC-H的分流作用[J].全科醫(yī)學(xué)臨床與教育,2009,7(2):102-104.

[6] Ratnam S,Coutlee F,Fontaine D,et al.Clinical performance of the PreTect HPV-Proofer E6/E7 mRNA assay in comparison with that of the Hybrid Capture 2 test for identif i cation of women at risk of cervical cancer[J].J Clin Microbiol,2010,48(8):2779-2785.

Use of HPV E6/E7 mR NA Testing to Deal with Atypical Squamous Cells Cannot Exclude HSIL

WANG Zhen-ming
(Department of Laboratory, Weifang People’s Hospital, Weifang 261041,China)

ObjectiveUse of HPV E6/E7 mRNA testing to deal with atypical squamous cells cannot exclude HSIL.MethodsHPV E6/E7 mRNA and HRHPV DNA were examined in 68 patients with ASC-H. Colposcopic examination and biopsy were taken, all results were evaluated.ResultsThe sensitivity, specificity, the positive predictive value and the negative predictive value for detecting CIN2 + lesions of ASC-H were 63.2%, 75.5%,50%, and 84.1%, respectively, for HPV E6/E7 mRNA test; The HPV E6/E7 mRNA testing is superior to HR-HPV DNA testing in specificity, the positive predictive value.ConclusionsHPV E6/E7 mRNA may serve as a predict select whether a patient with ASC-H should take Colposcopic examination immediately.

Human papillomavirus; E6/E7; mRNA; ASC-H

R711.32

B

1671-8194（2014）21-0070-02