陳立立，陳忠明，王冠林，張寬仁

（昆明理工大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，云南昆明 650500）

目前，癌癥已經(jīng)成為危害人類生命健康的最大殺手。癌癥主要是控制細(xì)胞分裂增殖機(jī)制失常而引起的疾病，除此之外，還會(huì)局部侵入正常組織甚至經(jīng)由體內(nèi)循環(huán)系統(tǒng)或淋巴系統(tǒng)轉(zhuǎn)移到身體其它部分。

腫瘤壞死因子相關(guān)的死亡誘導(dǎo)配體 （TNF-related apoptosis inducing ligand，TRAIL）是新發(fā)現(xiàn)的腫瘤壞死因子（tumor necrosis factor，TNF）超家族成員，與其它成員不同，它能選擇性誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞和病毒感染細(xì)胞發(fā)生凋亡，而對(duì)正常細(xì)胞沒(méi)有明顯的毒害作用［1］。因此，自TRAIL發(fā)現(xiàn)以來(lái)，其誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制一直是研究的重點(diǎn)和熱點(diǎn)，利用其誘導(dǎo)的凋亡效應(yīng)殺死腫瘤細(xì)胞具有廣闊的臨床應(yīng)用前景。

然而，近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，很多腫瘤細(xì)胞對(duì)TRAIL產(chǎn)生了耐受，其中一個(gè)很重要的原因是腫瘤細(xì)胞通過(guò)合成抗凋亡蛋白，如凋亡抑制蛋白 （inhibitor of apoptosis，IAP）、（B-cell lymphoma-2，Bcl-2）家族的抗凋亡蛋白、細(xì)胞型Fas相關(guān)死亡域樣白介素-1β轉(zhuǎn)換酶抑制蛋白 （cellular FADD-like IL-1β-converting enzyme-inhibitory protein，c-FLIP）等，從而對(duì)凋亡產(chǎn)生耐受，這是腫瘤抗凋亡的重要調(diào)節(jié)機(jī)制。

c-FLIP是一種抗凋亡蛋白，在許多惡性腫瘤細(xì)胞中都過(guò)量表達(dá)，這使得腫瘤細(xì)胞擁有了一定的逃生機(jī)制［2］。因此，通過(guò)靶向治療來(lái)修復(fù)腫瘤細(xì)胞對(duì)凋亡的敏感性，對(duì)研究化學(xué)治療產(chǎn)生的藥物耐受性具有重要作用。

目前，針對(duì)抗凋亡蛋白IAP、Bcl-2為靶點(diǎn)的抑制劑有很多，多數(shù)已進(jìn)入臨床Ⅰ期、Ⅱ期實(shí)驗(yàn)［3-4］。但是，以c-FLIP為靶點(diǎn)的研發(fā)藥物報(bào)道很少，除了RNA干擾的方法外，尚無(wú)c-FLIP專一性抑制劑或拮抗劑的報(bào)道。本文主要對(duì)以c-FLIP為靶點(diǎn)的癌癥治療的化學(xué)藥物、方法進(jìn)行綜述，探討降低、抑制或拮抗c-FLIP的方法，并提出新的思路，從而尋找一個(gè)潛在的安全的治療癌癥的方法，這對(duì)腫瘤的臨床治療具有重要意義。

1 細(xì)胞凋亡的信號(hào)通路

在癌癥發(fā)生過(guò)程中，抑制和抗凋亡作用是癌細(xì)胞永生化的必要手段。目前，細(xì)胞凋亡信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路主要包括外源途徑和內(nèi)源途徑。

外源途徑，又稱死亡受體凋亡途徑。TRAIL作為死亡受體信號(hào)通路中一個(gè)關(guān)鍵配體，與DR4（death receptor 4）或DR5結(jié)合后導(dǎo)致受體三聚化，細(xì)胞內(nèi)包含死亡結(jié)構(gòu)域（death domain，DD）的蛋白分子聚集成簇并募集接頭蛋白（Fas associated death domain，F(xiàn)ADD）。FADD的DD結(jié)構(gòu)域負(fù)責(zé)和DR4或DR5分子胞內(nèi)的DD結(jié)構(gòu)域結(jié)合，N-端的DED則結(jié)合procaspase-8的 DED，并使其進(jìn)行寡聚化，TRAIL-DR4／DR5-FADD-procaspase-8以串聯(lián)形式組合形成死亡誘導(dǎo)信號(hào)復(fù)合物 （death-inducing signaling complex，DISC）。其中procaspase-8發(fā)生自身裂解，成熟并釋放其活性亞單位caspase-8，直接激活下游效應(yīng)因子caspase-3、caspase-6和caspase-7。最終使得細(xì)胞出現(xiàn)一系列凋亡現(xiàn)象，如Fig 1所示。

內(nèi)源途徑，又稱線粒體凋亡途徑。當(dāng)procaspase-8激活不充分時(shí)，主要是通過(guò)線粒體途徑來(lái)執(zhí)行凋亡。通過(guò)Bcl-2家族中只含BH3同源區(qū)的Bid的切割來(lái)誘發(fā)凋亡。caspase-8／10或粒酶B（granzyme B）可以直接切割底物Bid，產(chǎn)生tBid，再進(jìn)一步促進(jìn)Bax和Bak作用線粒體膜，使細(xì)胞色素C（cytochrome C，cyt-C）從線粒體中釋放。釋放到細(xì)胞質(zhì)的cyt-C在dATP存在的條件下能與凋亡相關(guān)因子-1（apaf-1）結(jié)合，使其形成多聚體，并促使procaspase-9與其結(jié)合而形成凋亡小體（apoptosome）。procaspase-9在凋亡小體上自切割活化，導(dǎo)致caspase-3的大量活化及隨后的凋亡，如Fig 1所示。

2 細(xì)胞存亡調(diào)控蛋白c-FLIP

2.1 c-FLIP的結(jié)構(gòu) c-FLIP最初是在研究病毒時(shí)被發(fā)現(xiàn)的。Thome等［5］發(fā)現(xiàn)某些病毒，例如人的皰疹病毒（8HHV8）、人疣痘病毒等，寄生細(xì)胞后，會(huì)使細(xì)胞逃避機(jī)體的免疫監(jiān)視，并且發(fā)現(xiàn)凋亡的細(xì)胞明顯少于正常細(xì)胞。1997年，Irmler等［6］發(fā)現(xiàn)一些病毒 （如 γ-皰疹病毒、痘病毒等）含有一種可抑制細(xì)胞凋亡的基因，通過(guò)這種基因表達(dá)的蛋白能保護(hù)受感染的細(xì)胞不發(fā)生凋亡，從而使得病毒得以存活，繼續(xù)復(fù)制。這種蛋白在結(jié)構(gòu)上與 FLICE（FADD-like IL-1βconverting enzyme／caspase-8）相似，而且能抑制FLICE的作用，故被命名為FLIP，因其來(lái)源于病毒，所以又稱為v-FLIP。目前，已有6個(gè)同族亞型的v-FLIP被證實(shí)。再后來(lái)，人們又分離得到 v-FLIP的人類細(xì)胞類似物 （cellular-FLIP，c-FLIP）。人類c-FLIP基因含13個(gè)外顯子，與procaspase-8／10基因均位于染色體的2q33-34位置，兩者相距大概200bp［7］。

c-FLIP又稱 Casper、iFLICE、FLAME-1、CASH、CLARP、MRIT等，因其與細(xì)胞的死亡、存活信號(hào)密切相關(guān)，所以又稱之為細(xì)胞存亡調(diào)控蛋白。雖然c-FLIP在mRNA水平上存在13種不同切割亞型，但是，到目前為止，在人類細(xì)胞的蛋白水平上，只能檢測(cè)到3種表達(dá)形式：c-FLIPL（55 ku）、c-FLIPS（26 ku）、c-FLIPR（24 ku）［7］。

c-FLIPL和c-FLIPS通過(guò)選擇性切割，可以產(chǎn)生不同的變體。外顯子7會(huì)使得c-FLIPS／R的翻譯終止，而c-FLIPL則可跳過(guò)外顯子7，這也是它最長(zhǎng)的原因。c-FLIPR的mRNA缺失了內(nèi)含子6的切割能力，導(dǎo)致內(nèi)含子6的起始部分的開放閱讀框中出現(xiàn)終止密碼，最終使得c-FLIPR成為3種亞型中最短的一種。而與人類相比，老鼠中只存在兩種亞型即c-FLIP和c-FLIP［8］。LR

c-FLIPL含有一個(gè)與procaspase-8相似的結(jié)構(gòu)域，即N端含有兩個(gè)相互串聯(lián)的DED，C端含有一個(gè)與caspase同源的結(jié)構(gòu)域，但由于起催化作用的兩個(gè)氨基酸殘基Cys、His分別被Tyr、Arg所取代，因此，不具備了caspase蛋白水解酶的活性，從而不能形成活化的片段。c-FLIPS和v-FLIP很相似，除了具有兩個(gè)DED外，在C端尾巴上還有一個(gè)19個(gè)氨基酸的特殊片段，這個(gè)片段是進(jìn)行泛素化、蛋白酶體降解的關(guān)鍵調(diào)控位點(diǎn)。c-FLIPR的N端也含有DED，但與c-FLIPS相比，其C端則缺少了這些氨基酸片段的延伸［9］。

Fig 1 TRAIL mediated cell apoptosis and survival signaling pathways

2.2 c-FLIP的作用 動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果顯示，c-FLIP在T細(xì)胞增殖和胚胎發(fā)育中起著重要的作用。在研究不同癌癥時(shí)，如結(jié)腸癌、胃癌、胰腺癌、黑色素瘤、B細(xì)胞慢性淋巴細(xì)胞瘤、卵巢癌等，都發(fā)現(xiàn)有c-FLIP的異常表達(dá)［10］。c-FLIP也因此被認(rèn)為是癌細(xì)胞發(fā)生免疫逃逸的決定性因子之一。c-FLIP主要參與TRAIL、Fas、TNF-α介導(dǎo)的凋亡途徑，并且是人類惡性腫瘤對(duì)化療藥物產(chǎn)生耐藥性的主要原因。然而，c-FLIP調(diào)節(jié)凋亡的具體機(jī)制，到目前為止仍不是很清楚。

廖：那時(shí)沒(méi)有人高喊“科普”口號(hào)，但有科普之實(shí)；現(xiàn)在喊口號(hào)、吃科普飯的人越來(lái)越多，但盛名之下，其實(shí)、其質(zhì)又如何呢？這才是最值得我們思考的問(wèn)題！

人源c-FLIP的不同亞型扮演著不同的調(diào)節(jié)作用。c-FLIPL／S與 procaspase-8都能結(jié)合到 FADD，形成不同 DISC，但由于c-FLIPS無(wú)蛋白水解酶的活性片段或類似片段，使得procaspase-8的二聚化及下游的活化受到抑制，最終阻止凋亡級(jí)聯(lián)反應(yīng)的發(fā)生。Kim等［11］研究c-FLIP阻止細(xì)胞凋亡的機(jī)制時(shí)，發(fā)現(xiàn)c-FLIPS可能通過(guò)維持抗凋亡蛋白 XIAP的表達(dá)水平以及激活 Akt途徑來(lái)抑制奧沙利鉑 （oxaliplatin）誘導(dǎo)的凋亡作用。

但c-FLIPL與procaspase-8能形成異源二聚體，c-FLIPL含有無(wú)活性但類似于procaspase-8的蛋白水解酶的活性片段，此異源二聚體的蛋白水解酶活性受到限制，最終只能產(chǎn)生p43／p41-p43-c-FLIP異源二聚體。p43-c-FLIP則有促進(jìn)細(xì)胞增殖及介導(dǎo)細(xì)胞存活的作用 （Fig 1）。在研究 c-FLIP缺失的小鼠時(shí)，Chang等［12］發(fā)現(xiàn)，c-FLIPL具有雙重功能，除了能競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合procaspase-8，具有抗凋亡的能力外，還能有限地激活procaspase-8，具有促凋亡的作用。然而，c-FLIPL抗凋亡和促凋亡的作用，主要是通過(guò)c-FLIPL在細(xì)胞中的表達(dá)水平來(lái)決定。在許多細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)，當(dāng)c-FLIPL的表達(dá)水平較低時(shí)，具有促進(jìn)procaspase-8活化的作用，而在一些細(xì)胞 （如單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和某些腫瘤細(xì)胞）中，當(dāng) c-FLIPL表達(dá)水平為中等時(shí)，便成為procaspase-8活化的抑制劑。而當(dāng)c-FLIPL通過(guò)瞬時(shí)表達(dá)達(dá)到一個(gè)非常高的非生理濃度時(shí)，c-FLIPL僅依靠自身的細(xì)胞毒性作用就能抑制caspase-8的活性，而不需要TRAIL的介導(dǎo)。雖然c-FLIPL在procaspase-8的活化方面扮演著雙重角色，但至少在腫瘤細(xì)胞的生理表達(dá)水平范圍內(nèi)，它仍然扮演一個(gè)非常重要的凋亡抑制蛋白的角色。

Tab 1 Medicine or compounds inhibiting c-FLIP expression at the transcriptional level

3 c-FLIP為多種腫瘤化療藥的靶點(diǎn)之一

由于細(xì)胞存亡調(diào)控蛋白c-FLIP在很多腫瘤細(xì)胞中存在，并且在這些腫瘤細(xì)胞中起著很重要的抗凋亡的作用，所以，在近年來(lái)新研究的抗腫瘤藥物中，以c-FLIP為靶點(diǎn)的藥物研發(fā)也越來(lái)越多，如下調(diào)c-FLIP的轉(zhuǎn)錄、翻譯水平，或是促進(jìn)它的降解等。

3.1 轉(zhuǎn)錄及翻譯調(diào)節(jié)（Tab 1、2） 目前，治療DNA損傷的藥物有望下調(diào)c-FLIP的水平。一些化學(xué)治療藥物包括順鉑（cisplatin）［13－14］、阿霉素 （doxorubicin）［15］、拓?fù)洚悩?gòu)酶 I（topoisomerase I）的抑制劑［16］等在不同腫瘤細(xì)胞中通過(guò)抑制c-FLIP的轉(zhuǎn)錄，促進(jìn)癌細(xì)胞對(duì)死亡受體引起的凋亡的發(fā)生。組蛋白脫乙酰酶抑制劑 （histone deacetylase inhibitors）通過(guò)下調(diào)c-FLIP的轉(zhuǎn)錄、翻譯水平，成功地抑制了不同惡性腫瘤細(xì)胞的增殖，并使其發(fā)生凋亡［17－19］。例如，最近，Bijangi-Vishehsaraei等［17］發(fā)現(xiàn)的一種新的組蛋白脫乙酰酶抑制劑［4-（4-Chloro-2-methyphenoxy）-N-hydroxybutanamide，CMH］，通過(guò)下調(diào)c-FLIPL和 c-FLIPS的mRNA和蛋白水平，使得人乳腺癌細(xì)胞MCF-7發(fā)生凋亡。更有趣的是，這種藥物會(huì)使得對(duì)阿霉素具有抗性的突變的MCF-7細(xì)胞具有更強(qiáng)的凋亡作用。

Kinoshita等［20］在研究人成骨肉瘤細(xì)胞MG-63通過(guò)免疫調(diào)節(jié)機(jī)制逃離Fas／CD95介導(dǎo)的凋亡時(shí)發(fā)現(xiàn)，當(dāng)使用順鉑后，發(fā)現(xiàn)它對(duì)凋亡的敏感性增強(qiáng)，進(jìn)一步研究后，發(fā)現(xiàn)順鉑主要是下調(diào)c-FLIPL，而對(duì)其它的抗凋亡蛋白如XIAP等沒(méi)作用。

組蛋白去乙?；负屯?fù)洚悩?gòu)酶I的抑制劑也被作為調(diào)節(jié)c-FLIP水平的新的抗腫瘤藥。Park等［21］在卵巢癌細(xì)胞SKOV3中發(fā)現(xiàn)，曲古抑菌素A（trichostatin A）可以下調(diào)c-FLIPL的mRNA和蛋白水平，而對(duì)c-FLIPS無(wú)明顯影響。與此同時(shí)還發(fā)現(xiàn)，表皮生長(zhǎng)因子（epidermal growth factor，EGF）信號(hào)途徑的抑制劑會(huì)阻礙通過(guò)曲古抑菌素A調(diào)控的c-FLIPL的下調(diào)作用。

Jani等［22］在研究結(jié)腸癌細(xì)胞時(shí)，發(fā)現(xiàn)多種結(jié)腸癌細(xì)胞都對(duì)TRAIL或奧沙利鉑產(chǎn)生了耐藥性，究其原因，在這些腫瘤細(xì)胞中抗凋亡蛋白c-FLIP和 Mcl-1（myeloid cell leukemia-1，Bcl-2家族的一個(gè)新成員）的表達(dá)都有所上升，導(dǎo)致NF-κB上調(diào)，最終導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞具有了抵抗凋亡的能力，但實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，結(jié)腸癌細(xì)胞在經(jīng)過(guò)NF-κB的抑制劑奎納克林 （quinacrine）或是 Iκκ（inhibitor of nuclear factor kappa-B kinase，Iκκ）抑制劑BMS-345541處理后，細(xì)胞對(duì)凋亡的敏感性大大增加，使得細(xì)胞恢復(fù)了凋亡活性。Charette等［26］發(fā)現(xiàn)，salirasib處理肝癌細(xì)胞后，下調(diào)了Ras的表達(dá)，而且還能抑制哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白 （mammalian target of rapamycin，mTOR）的表達(dá)，使得與凋亡相關(guān)的caspase-3被激活、細(xì)胞色素C釋放、死亡受體上調(diào)，以及細(xì)胞存亡調(diào)控蛋白c-FLIP在mRNA水平上的表達(dá)降低，最終使得肝癌細(xì)胞發(fā)生凋亡。

Katz等［31］發(fā)現(xiàn)，使用多激酶抑制劑索拉非尼 （sorafenib）對(duì)治療惡性胸膜間皮瘤具有很好的療效，在索拉非尼作用3 h后，很多抗凋亡蛋白，包括Mcl-1、c-FLIPL、生存素以及cIAP等發(fā)生磷酸化或是表達(dá)水平降低，從而增強(qiáng)了惡性胸膜間皮瘤對(duì)TRAIL的敏感性。

Olsson等［36］用濃度 300μg·L－1TRAIL處理慢性 B淋巴細(xì)胞白血病 （B-cell chronic lymphocytic leukemia，B-CLL）后，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞仍然耐受，但當(dāng)加入RNA的合成抑制劑放線菌素D（actinomycin D）后發(fā)現(xiàn)，B-CLL細(xì)胞對(duì)TRAIL誘導(dǎo)的凋亡開始敏感。最終通過(guò)蛋白質(zhì)印跡等實(shí)驗(yàn)，證明了細(xì)胞對(duì)TRAIL產(chǎn)生耐受的根本原因在于c-FLIPL的過(guò)高表達(dá)，而放線菌素D的作用則是使得c-FLIPL和c-FLIPS的表達(dá)都降低。

Day等［2］發(fā)現(xiàn)，在低濃度的紫杉醇 （taxol）作用下，會(huì)引起CCRF-HSB-2人急性淋巴母細(xì)胞型白血病細(xì)胞發(fā)生caspase-8／10依賴的凋亡，而且會(huì)引起c-FLIPS和c-FLIPL下調(diào)。另外，紫杉醇會(huì)通過(guò)轉(zhuǎn)錄后調(diào)控和非caspase依賴機(jī)制來(lái)降低c-FLIP的表達(dá)。

Tab 2 Medicine or compounds inhiniting c-FLIP expression at the post-transcriptional level

3.2 干擾RNA的方法：siRNA RNA干擾 （RNA interference，RNAi）是一種廣泛存在于高等植物和動(dòng)物中的由雙鏈RNA介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄后基因沉寂 （post transcriptional gene silencing，PTGS）的現(xiàn)象。外源雙鏈RNA在細(xì)胞內(nèi)一種被稱為Dicer的核酸酶的作用下，被剪切成含19-23個(gè)核苷酸對(duì)的小RNA片段，稱為小干擾 RNA（small interfering RNA，siRNA）。后者與Dicer及其它一些蛋白質(zhì)共同構(gòu)成RNA誘導(dǎo)的沉寂復(fù)合物 （RNAi inducing silence complex，RISC），依靠堿基互補(bǔ)規(guī)律識(shí)別與siRNA同源的mRNA分子，并將其降解。在腫瘤的基因治療過(guò)程中，通過(guò)人工合成特定癌基因靶向的siRNA，并將其導(dǎo)入腫瘤細(xì)胞中，可以特異性地抑制目的基因的表達(dá)。干擾RNA的方法可以直接抑制c-FLIP蛋白的翻譯過(guò)程，使得 c-FLIP的表達(dá)量降低。Chawla-Sarkar等［37］通過(guò)siRNA技術(shù)成功地下調(diào)了抗凋亡蛋白Bcl-2、FLIP和IAPs的表達(dá)。

在體外，以c-FLIP基因?yàn)榘悬c(diǎn)的siRNA技術(shù)改變了傳統(tǒng)的癌癥治療方法。Day等［38］發(fā)現(xiàn)在很多腫瘤細(xì)胞中，c-FLIPsiRNA的脂質(zhì)體復(fù)合物，能夠成功干擾c-FLIP基因，使得體外的MCF-7細(xì)胞發(fā)生自發(fā)性的凋亡，而且注射c-FLIP siRNA的脂質(zhì)體復(fù)合物到小鼠的MCF-7移植瘤中，移植瘤也出現(xiàn)了自發(fā)性凋亡。

除此之外，非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 A549、結(jié)腸癌細(xì)胞HCT116等的c-FLIP基因的表達(dá)都會(huì)因此降低。但是，在體內(nèi)siRNA卻仍有很多局限性，臨床上要將siRNA用來(lái)治療腫瘤，可能還需要一段時(shí)間。

3.3 c-FLIP的降解（Tab 3） c-FLIP抑制劑或拮抗劑主要是通過(guò)泛素化-蛋白酶系統(tǒng)來(lái)實(shí)現(xiàn)對(duì)c-FLIP的降解。廣譜的代謝抑制劑是最早被用來(lái)研究抑制c-FLIP表達(dá)的機(jī)制。目前，許多化合物都對(duì)細(xì)胞中的c-FLIP有廣泛的下調(diào)作用，如蛋白合成抑制劑環(huán)十二碳三烯 （cyclohexamide）或者茴香霉素 （anisomycin）［39］?；瘜W(xué)治療藥5-氟尿嘧啶 （5-FU）也被證實(shí)能下調(diào)癌細(xì)胞系的c-FLIPL和c-FLIPS［40］。蛋白酶抑制劑硼替佐米（bortezomib）被廣泛應(yīng)用于許多不同的細(xì)胞系。何杰金病細(xì)胞、星形細(xì)胞瘤細(xì)胞、鼻腔神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞、髓系白血病細(xì)胞、骨髓瘤細(xì)胞等，在經(jīng)過(guò)硼替佐米處理過(guò)后，c-FLIP的水平都有所下降。然而，Zhao等［41］則發(fā)現(xiàn)，硼替佐米主要作用的是c-FLIPL，但也有作用于c-FLIPS的，c-FLIPL的下調(diào)和c-FLIPS的上調(diào)好像有關(guān)。在研究小分子的蛋白酶抑制劑MG-132時(shí)發(fā)現(xiàn)，它在不同的細(xì)胞系中對(duì)c-FLIP都有下調(diào)、抑制的作用。MG-132、PS-34在慢性淋巴細(xì)胞性白血病細(xì)胞中，能夠上調(diào)TRAIL和它的死亡受體DR4、DR5的表達(dá)量，最終下調(diào)了c-FLIP的表達(dá)。很明顯，硼替佐米和MG-132促進(jìn)每種細(xì)胞對(duì)TRAIL誘導(dǎo)凋亡的敏感性，這表明凋亡的恢復(fù)并不是c-FLIPL和c-FLIPS同時(shí)下調(diào)的結(jié)果。但是，要真正解釋c-FLIP的亞型的作用，還需要進(jìn)一步的研究。

3.4 死亡配體與傳統(tǒng)化學(xué)治療藥物聯(lián)合用藥 研究發(fā)現(xiàn)，單純降低c-FLIP的蛋白或RNA水平，不能明顯促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的凋亡。所以，在降低抗凋亡蛋白的表達(dá)的同時(shí)，還必須同時(shí)激活外源性凋亡機(jī)制，而激活外源性凋亡機(jī)制則與死亡配體 TRAIL、FasL或 TNF-α等有關(guān) （如 Tab 1、2、3）。

但是，一直以來(lái)，死亡受體及其配體都被認(rèn)為會(huì)引起細(xì)胞毒性的級(jí)聯(lián)反應(yīng)，不光對(duì)腫瘤細(xì)胞，對(duì)正常細(xì)胞也會(huì)有一定的毒害作用。而且，研究還發(fā)現(xiàn)，死亡配體和受體具有許多非凋亡相關(guān)的功能，包括調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、分化、細(xì)胞趨化因子的產(chǎn)生、炎癥反應(yīng)以及促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的功能，如TNF-α引起的炎癥反應(yīng)導(dǎo)致的腫瘤生長(zhǎng)［45］、Fas及其配體會(huì)介導(dǎo)具有免疫功能的正常淋巴細(xì)胞發(fā)生凋亡等［46］。

然而，近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的死亡配體TRAIL只對(duì)腫瘤細(xì)胞具有作用，而對(duì)正常細(xì)胞幾乎沒(méi)有影響，因此，被認(rèn)為是一種很好的抗癌藥。但是，Naka等［47］在研究具有嚴(yán)重聯(lián)合免疫缺陷的小鼠時(shí)發(fā)現(xiàn)，當(dāng)其被移植了結(jié)腸腫瘤時(shí)，TRAIL單獨(dú)用藥時(shí)抗腫瘤效果不是很明顯，但是，如果將TRAIL與傳統(tǒng)的化療藥物，如5-FU或伊立替康聯(lián)合用藥時(shí)，具有很明顯的抗腫瘤效果。所以，將TRAIL與傳統(tǒng)的化學(xué)治療藥物聯(lián)合用藥，能增加TRAIL對(duì)腫瘤細(xì)胞的敏感性，這樣可以協(xié)同提高對(duì)腫瘤的治療效果。

Tab 3 Medicine or compounds inducing c-FLIP degradation

4 結(jié)語(yǔ)與展望

c-FLIP不同亞型在不同癌細(xì)胞中是否具有不同的作用，其具體的作用機(jī)制目前仍不清楚。雖然已經(jīng)發(fā)現(xiàn)藥物對(duì)其具有抑制作用，但通常不是對(duì)c-FLIP各種亞型都有作用，而只是針對(duì)c-FLIP的某一種亞型有作用。

作為死亡受體凋亡途徑中一個(gè)關(guān)鍵的負(fù)調(diào)控因子，c-FLIP是腫瘤治療的一個(gè)非常關(guān)鍵的作用靶點(diǎn)。雖然很多化學(xué)治療藥物對(duì)c-FLIP都具有一定的下調(diào)作用，但是，到目前為止，除了siRNA的方法，無(wú)論是在mRNA水平，還是在蛋白水平，還沒(méi)有一個(gè)直接只作用于c-FLIP的小分子抑制劑。這也使得研究小分子的c-FLIP專一抑制劑或拮抗劑具有重要的意義。

因?yàn)閏-FLIP與procaspase-8相比，起催化作用的兩個(gè)氨基酸殘基被取代，因此，不具備caspase蛋白水解酶的活性，從而不能形成活化的片段，使其沒(méi)有酶切活性。又由于 v-FLIP家族中MC159的晶體結(jié)構(gòu)已被解析出來(lái)，c-FLIP與procaspase-8的DED區(qū)域通過(guò)氨基酸序列比對(duì)，可以看出二者的DED區(qū)域具有明顯的差異，這說(shuō)明兩者與FADD的DED結(jié)合位點(diǎn)可能有很大的差異。最近，Majkut等［48］發(fā)現(xiàn)，c-FLIP與 FADD結(jié)合于 FADD的 DED的 α1-螺旋和 α4-螺旋，procaspase-8與FADD結(jié)合于FADD的DED的α2-螺旋和α5-螺旋。根據(jù)這一特性，可以尋找一些能夠干擾c-FLIP的DED募集到FADD的小分子化合物，而且這些化合物不會(huì)抑制procaspase-8的活化。目前，可以通過(guò)建立高通量或高內(nèi)涵篩選體系，有望從眾多的化合物中篩選出c-FLIP的專一性拮抗劑。

但是，在尋找降低c-FLIP表達(dá)的藥物過(guò)程中，發(fā)現(xiàn)很多藥物或化合物在殺死腫瘤細(xì)胞的同時(shí)，對(duì)正常細(xì)胞同樣會(huì)造成損傷。比如楝酰胺（rocaglamide），雖然它能夠明顯降低c-FLIP的表達(dá)，但是，實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，它對(duì)正常細(xì)胞也有很大的毒害作用，正因?yàn)槿绱?，其沒(méi)有被廣泛應(yīng)用。傳統(tǒng)化學(xué)治療藥物對(duì)正常細(xì)胞也有類似毒害作用，這使得將來(lái)的研究方向更加明確，需要找到一種只針對(duì)于腫瘤細(xì)胞有作用，而對(duì)正常細(xì)胞沒(méi)有傷害的靶向特異性藥物。

總之，以細(xì)胞存亡調(diào)控蛋白c-FLIP為靶點(diǎn)篩選出它的專一性抑制劑，并激活外源性凋亡通路，將為癌癥治療提供新的方法與思路，對(duì)腫瘤的臨床治療具有重要的指導(dǎo)意義。

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