呂曉君,楊雅婷,周素文,潘望平,何開(kāi)勇,孫代華

(1.湖北省食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)研究院,武漢 430064;2.湖北省醫(yī)藥工業(yè)研究院有限公司,武漢 430061)

不同工藝柴葛疏表顆粒主要藥效學(xué)篩選

呂曉君1,楊雅婷1,周素文1,潘望平1,何開(kāi)勇1,孫代華2

(1.湖北省食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)研究院,武漢 430064;2.湖北省醫(yī)藥工業(yè)研究院有限公司,武漢 430061)

目的 比較5種工藝條件下所得柴葛疏表顆粒的抗炎、鎮(zhèn)痛效果,以篩選最佳工藝方法。方法通過(guò)腹腔給予0.6%醋酸溶液制備小鼠急性腹膜炎模型,統(tǒng)計(jì)給藥后小鼠扭體次數(shù),觀察鎮(zhèn)痛作用。通過(guò)二甲苯致小鼠耳廓腫脹模型觀察抗炎作用。結(jié)果柴葛疏表顆粒不同工藝提取物均有鎮(zhèn)痛效果,與陰性組小鼠比較,扭體次數(shù)減少;工藝1,2, 5所得提取物及揮發(fā)油均能降低二甲苯所致小鼠耳廓腫脹度。結(jié)論在相同實(shí)驗(yàn)條件下,柴葛疏表顆粒不同工藝提取物均有鎮(zhèn)痛作用,工藝1,2,5所得提取物及揮發(fā)油的抗炎效果較好。

柴葛疏表顆粒;抗炎作用;鎮(zhèn)痛作用;醋酸;二甲苯

柴葛疏表顆粒由柴胡、連翹、葛根、黃芩等中藥組成,具有疏風(fēng)解表、清熱解毒功效,臨床可用于風(fēng)熱感冒,癥見(jiàn)發(fā)熱、頭痛、身痛、咳嗽、咽痛、黃痰、口干、舌苔薄黃、脈浮數(shù)等。筆者在本實(shí)驗(yàn)中以抗炎、鎮(zhèn)痛主要藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)對(duì)其不同工藝進(jìn)行了篩選,現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物 昆明種小鼠192只,雌雄各半,體質(zhì)量20～22 g,SPF級(jí),由武漢生物制品研究所有限責(zé)任公司動(dòng)物中心提供,生產(chǎn)合格證號(hào):SCXK(鄂)2008-0003。湖北省食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)研究院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)施使用合格證號(hào):SYXK(鄂)2008-0009。飼養(yǎng)條件:晝夜明暗交替12 h,室溫20～26℃,相對(duì)濕度40%～70%,籠具及墊料定期更換,飼料為全價(jià)純鼠顆粒,飲水為純化水。

1.2 試藥 受試物柴葛疏表顆粒,工藝1批號(hào): 20121129,規(guī)格:每克浸膏相當(dāng)于生藥1.41 g;工藝2批號(hào):2012120301,規(guī)格:每克浸膏相當(dāng)于生藥2.29 g;工藝3批號(hào):2012120302,規(guī)格:每克浸膏相當(dāng)于生藥1.70 g;工藝4批號(hào):20121206,規(guī)格:每克浸膏相當(dāng)于生藥2.10 g;工藝5批號(hào):20121207,規(guī)格:每克浸膏約相當(dāng)于生藥1.45 g。揮發(fā)油批號(hào):20130122,規(guī)格(生藥)100.09 g·mL-1。以上均由武漢雙龍藥業(yè)有限公司提供。人擬臨床最大用量為生藥52 g·(60 kg)-1,篩選實(shí)驗(yàn)按人臨床使用量15倍設(shè)計(jì),不同的工藝提取物臨用前均以純化水配制成相當(dāng)生藥0.52 g·mL-1濃度的溶液,揮發(fā)油加聚山梨酯-80配制成每毫升含0. 11 mL的混懸液。陽(yáng)性對(duì)照藥物:吲哚美辛片(臨汾奇林藥業(yè)有限公司生產(chǎn),批號(hào):1102071,規(guī)格:每片25 mg,臨用前研缽研細(xì),用純化水配制成0.375 mg·mL-1混懸液,用于對(duì)二甲苯小鼠耳廓腫脹的影響實(shí)驗(yàn)和醋酸扭體實(shí)驗(yàn))。二甲苯(批號(hào): 20120208)、冰醋酸(批號(hào):20121116)均由國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)。

1.3 儀器 ML303型電子分析天平,梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司制造;動(dòng)物秤JM5102電子秤,余姚紀(jì)銘稱(chēng)重校驗(yàn)設(shè)備有限公司制造;DS-671型電子秤,上海寺岡電子有限公司制造。

1.4 不同提取工藝對(duì)相關(guān)有效成分的影響 取處方中各味藥材,按表1提取方法進(jìn)行有效成分提取,其中黃芩苷、葛根素及連翹苷轉(zhuǎn)移率見(jiàn)表1。結(jié)果顯示,工藝5成分轉(zhuǎn)移率較高。

表1 不同提取工藝主要有效成分轉(zhuǎn)移率實(shí)驗(yàn)結(jié)果 %

1.5 對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響 取小鼠96只,按體質(zhì)量隨機(jī)分為8組,每組12只,分別為陰性對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組、工藝1～5組受試物及揮發(fā)油組。各組灌胃給藥,0.5 mL·(20 g)-1,每天1次,連續(xù)7 d,陽(yáng)性對(duì)照組最后1 d給藥。陰性對(duì)照組(純化水25 mL·kg-1)、陽(yáng)性對(duì)照組(吲哚美辛, 9.37 mg·kg-1)、各工藝1～5受試物組(生藥13.00 g·kg-1),揮發(fā)油組(2.75 mL·kg-1)。末次給藥后1 h,取二甲苯0.05 mL涂在各組小鼠右耳前后兩面致炎,致炎后30 min將小鼠脫頸椎處死,用直徑9 mm打孔器在小鼠左右耳相同部位打下耳片,用電子天平稱(chēng)質(zhì)量。記錄左右耳片質(zhì)量,計(jì)算腫脹度。腫脹度(mg)=右耳片質(zhì)量-左耳片質(zhì)量。耳廓腫脹抑制率(%)=(陰性對(duì)照組耳廓腫脹度均值-給藥組耳廓腫脹度均值)/陰性對(duì)照組耳廓腫脹度均值×100%[1-2]。

分別分析陰性對(duì)照組與陽(yáng)性對(duì)照組、受試物各組腫脹度差異的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,采用ONE-WAY ANOVA統(tǒng)計(jì)方法,方差齊性采用LSD多重分析,方差不齊采用Dunnett's T3多重分析。

1.6 對(duì)醋酸致小鼠扭體的影響 取小鼠96只,按體質(zhì)量隨機(jī)分為8組,每組12只,分別為陰性對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組、工藝1～5受試物及揮發(fā)油組。各組每天灌胃給藥1次,體積0.5 mL·(20 g)-1,連續(xù)7 d,陽(yáng)性對(duì)照組最后1 d給藥。陰性對(duì)照組(純化水25 mL·kg-1)、陽(yáng)性對(duì)照組(吲哚美辛,9.37 mg·kg-1)、各工藝1～5受試物組(生藥13.00g·kg-1),揮發(fā)油組(2.75 mL·kg-1)。末次給藥后1 h,各組動(dòng)物均腹腔注射0.6%醋酸溶液0.2 mL,注射后立即觀察各組動(dòng)物15 min內(nèi)扭體次數(shù)[3]。分別分析各組扭體次數(shù)的差異,采用ONE-WAY ANOVA統(tǒng)計(jì)方法,方差齊性采用LSD多重分析,方差不齊采用Dunnett's T3多重分析。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響 各組剔除反應(yīng)最高值及最低值后計(jì)算P值,結(jié)果陽(yáng)性對(duì)照組耳廓腫脹度低于陰性對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。工藝1,2,5受試物組及揮發(fā)油組耳廓腫脹度低于陰性對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05,P＜0.01);工藝3,4受試物組與陰性對(duì)照組比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,結(jié)果見(jiàn)表2。

2.2 柴葛疏表顆粒對(duì)醋酸致小鼠扭體的影響 見(jiàn)表3。各組剔除反應(yīng)最高值及最低值后計(jì)算P值,結(jié)果陽(yáng)性對(duì)照組扭體次數(shù)明顯低于陰性對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);所有工藝受試物組與陰性對(duì)照組比較,均差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01或P＜0.05),其中工藝3, 5受試物組及揮發(fā)油組效果最佳。

3 討論

從有效成分的轉(zhuǎn)移率及抗炎、鎮(zhèn)痛作用分析,工藝5為最優(yōu)工藝?？芍?稀乙醇提取黃芩苷轉(zhuǎn)移率優(yōu)于水煎煮;水煮乙醇沉淀或澄清劑除雜對(duì)黃芩苷的損失較大,故黃芩的提取純化優(yōu)選稀乙醇。水煎煮和稀乙醇提取對(duì)葛根素轉(zhuǎn)移率的影響較小,但以稀乙醇提取為優(yōu)。實(shí)驗(yàn)表明,柴葛疏表顆粒工藝1,2,5對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹抑制作用較好;工藝1與工藝2比較,工藝1未醇沉,工藝2醇沉,則抗炎鎮(zhèn)痛作用以未醇沉為優(yōu)。工藝4與工藝5比較,部分藥材均單獨(dú)醇提,只是在水煮后工藝4醇沉,工藝5未醇沉,但抗炎鎮(zhèn)痛作用以未醇沉的工藝5為優(yōu)。工藝3與工藝1比較,工藝3用澄清劑沉淀除雜質(zhì),工藝1未加澄清劑除雜質(zhì),但工藝1的抗炎作用顯著優(yōu)于工藝3?？寡祖?zhèn)痛作用比較,柴葛疏表顆粒的純化工藝不論是醇沉還是澄清劑純化均不能選用,說(shuō)明為了制劑的需要在提取純化工藝中一味純化將影響產(chǎn)品的療效。

表2 8組小鼠耳廓腫脹度與腫脹抑制率實(shí)驗(yàn)結(jié)果 n=10

表3 8組小鼠扭體實(shí)驗(yàn)結(jié)果 n=10

[1] 彭成.中醫(yī)藥動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方法學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2008:831.

[2] 初正云,翟延君,張慧.解毒膠囊的解熱、抗炎、止痛和止咳作用[J].中成藥,2008,30(2):181-184.

[3] 陳奇.中藥藥理研究方法學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社, 2006:814-815,818-820,830-831.

DOI 10.3870/yydb.2014.07.012

R286;R965

A

1004-0781(2014)07-0885-02

2013-07-04

2013-08-15

呂曉君(1983-),女,湖北鐘祥人,主管藥師,碩士,主要研究方向:藥理毒理。電話(huà):027-87271327,E-mail 1012814506@qq.com。

楊雅婷(1979-),女,湖北武漢人,主管藥師,學(xué)士,主要研究方向:藥理毒理。電話(huà):027-87271327,E-mail:yangtan3814@ 2008.sina.com.cn。

周素文(1957-),女,湖北孝感人,主任藥師,學(xué)士,主要研究方向:藥理毒理。電話(huà):027-87271327,E-mail: sw6660@163.com。