石小鵬，繆珊，畢琳琳，李捷，苗青，黨碧艷，栗艷

(1.第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院藥劑科，西安 710032;2.第四軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)系天然藥物學(xué)教研室，西安 710032)

芪生膠囊是由白芍、生地、黃芪、延胡索等8味中藥組成的復(fù)方制劑［醫(yī)院制劑批準(zhǔn)文號(hào):蘭制字(2011)F68138］，具有滋陰清熱、益氣活血的功效，主要用于治療萎縮性胃炎。白芍是方中君藥，有鎮(zhèn)痛和鎮(zhèn)靜作用，其中芍藥苷對(duì)平滑肌有解痙和抑制作用，并有良好的抗炎及抗?jié)冏饔茫?-3］。因此，筆者采用高效液相色譜(HPLC)法測(cè)定其含量［4-10］。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 20AT型高效液相色譜儀(日本島津公司);LC-20AT型二元高壓梯度泵;SPD-M20A型紫外檢測(cè)器;LC-solution工作軟件;SB5200型超聲波提取器(上海必能信超聲儀器有限公司);R200D型電子分析天平(德國(guó)Sartorius公司)。

1.2 試藥 芍藥苷對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，含量＞97%，批號(hào):110713-200910);甲醇為色譜純，水為超純水，其余試劑均為分析純;芪生膠囊由第四軍醫(yī)大學(xué)藥物研究所提供(批號(hào):120801，120802，120803)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件和系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn) Kromasil C18色譜柱(4.6mm ×250mm，5 μm)，甲醇-水(15∶85)為流動(dòng)相，流速1.0mL·min－1，檢測(cè)波長(zhǎng)230 nm，柱溫:室溫，進(jìn)樣量20 μL，理論塔板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)算不低于3 000。

2.2 對(duì)照品溶液的制備 取芍藥苷對(duì)照品6.25 mg精密稱(chēng)定，加甲醇溶解，用甲醇稀釋定容至25mL，制成濃度為0.25 mg·mL－1對(duì)照品溶液，作為對(duì)照品溶液貯備液備用。

2.3 供試品溶液的制備 取芪生膠囊內(nèi)容物約0.3 g，精密稱(chēng)定，加75%甲醇20mL，搖勻，室溫放置過(guò)夜，次日超聲 20min，2 500 r·min－1離心 10min(r=6.5 cm)，分取上清液，藥渣再加75%甲醇20mL，搖勻，超聲20min，離心10min，分取上清液，合并2次上清液并濾過(guò)(濾膜孔徑0.45 μm)，濾液置50mL量瓶，用75%甲醇定容至刻度，作為供試品貯備液，精密量取供試品貯備液1mL，加甲醇稀釋至2mL，作為供試品溶液。

2.4 陰性對(duì)照實(shí)驗(yàn) 按處方制備缺白芍的芪生膠囊陰性對(duì)照樣品。取陰性對(duì)照樣品，按供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照溶液，精密吸取對(duì)照品溶液、缺白芍陰性對(duì)照溶液和供試品溶液各20 μL，注入液相色譜儀測(cè)定。芍藥苷對(duì)照品溶液與芪生膠囊樣品溶液在同一保留時(shí)間檢出色譜吸收峰，而陰性對(duì)照溶液在此保留時(shí)間未檢出色譜吸收峰(圖1)，表明處方中其他藥材不干擾芍藥苷的含量，說(shuō)明芍藥苷專(zhuān)屬性較強(qiáng)。

2.5 線性范圍考察 精密吸取對(duì)照品貯備液10，20，30，40，50 μL，分別移入1mL 量瓶，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別吸取20 μL注入液相色譜儀，按以上色譜條件測(cè)定，以峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，濃度為橫坐標(biāo)(X)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y=30 604X－7 263，r=0.999 9。結(jié)果表明，芍藥苷在濃度為 2.5 ～12.5 μg·mL－1時(shí)，線性關(guān)系良好。

2.6 精密度考察 取芪生膠囊(批號(hào):120802)供試品溶液和芍藥苷對(duì)照品溶液(7.5 μg·mL－1)，重復(fù)進(jìn)樣5次，按以上色譜條件測(cè)定峰面積，測(cè)得供試品溶液峰面積RSD=0.42%(n=5)，對(duì)照品溶液峰面積RSD=0.67%(n=5)，結(jié)果表明精密度符合測(cè)定要求。

2.7 穩(wěn)定性考察 取芪生膠囊(批號(hào):120801)供試品溶液和芍藥苷對(duì)照品溶液(5.0 μg·mL－1)，按以上色譜條件，每隔2 h進(jìn)樣一次，共進(jìn)5次，測(cè)得供試品溶液峰面積RSD=0.81%(n=5)，對(duì)照品溶液峰面積RSD=0.56%(n=5)，結(jié)果表明芍藥苷在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

A.陰性對(duì)照品;B.對(duì)照品;C.供試品;1.芍藥苷?qǐng)D1 芍藥苷高效液相色譜圖A.negative control;B.control substance;C.sample;1.paeoniflorinFig.1 HPLC chromatogram of paeoniflorin

2.8 重復(fù)性考察 取芪生膠囊同一批號(hào)內(nèi)容物(批號(hào):120803)約0.3 g，精密稱(chēng)定，共稱(chēng)5份樣品，按供試品溶液制備方法制備，作為供試品溶液，精密吸取供試品液20 μL注入液相色譜儀，按上述色譜條件測(cè)定含量，結(jié)果平均含量為 3.68 mg·g－1，RSD=0.44%(n=5)。

2.9 加樣回收率考察 精密稱(chēng)取已知含量的同一批號(hào)樣品，置圓底燒瓶，分別加入0.5 mg·mL－1芍藥苷對(duì)照品2，2，3，3，4 和4mL，按供試品溶液項(xiàng)下的制備方法制成供試品溶液，再按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算芍藥苷回收率，測(cè)定結(jié)果平均回收率99.97%，RSD=0.94%，說(shuō)明此方法具有良好的準(zhǔn)確性，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 芍藥苷加樣回收率測(cè)定結(jié)果Tab.1 Determination results of paeoniflorin recovery

2.10 樣品測(cè)定 取3批芪生膠囊，按供試品溶液制備方法制成供試品溶液，再按上述色譜條件注入液相儀中，測(cè)定芍藥苷的含量，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 芪生膠囊中芍藥苷含量測(cè)定結(jié)果Tab.2 Determination results of paeoniflorin content in Qisheng Capsule

3 討論

本復(fù)方制劑中，白芍作為方中君藥，具有鎮(zhèn)痛鎮(zhèn)靜作用，而芍藥苷作為其含量最高的有效成分，具有抗炎和抗?jié)冏饔?，故選用芍藥苷含量作為本制劑的質(zhì)量控制指標(biāo)。

參考相關(guān)文獻(xiàn)，對(duì)芍藥苷進(jìn)行200～400 nm全波長(zhǎng)掃描，結(jié)果在230 nm時(shí)芍藥苷的吸收值最大，故選用230 nm波長(zhǎng)為檢測(cè)波長(zhǎng)。經(jīng)過(guò)反復(fù)考察，最終選擇甲醇-水(15∶85)為流動(dòng)相，流速為 1.0mL·min－1，檢測(cè)波長(zhǎng)為230 nm，其分離效果最好。

研究表明，本實(shí)驗(yàn)采用HPLC法測(cè)定芍藥苷含量，該檢測(cè)方法準(zhǔn)確可靠，不僅可作為芪生膠囊的質(zhì)量評(píng)價(jià)方法，還為其質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)的建立提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

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