羅培和，朱其瓊

（1.欽州市食品藥品監(jiān)督管理局，廣西 欽州 535000；2.廣西食品藥品監(jiān)督管理局,廣西 南寧 530022)

實(shí)驗(yàn)室與分析

HPLC法測(cè)定麻杏止咳糖漿中苦杏仁苷的含量

羅培和1，朱其瓊2

（1.欽州市食品藥品監(jiān)督管理局，廣西 欽州 535000；2.廣西食品藥品監(jiān)督管理局,廣西 南寧 530022)

建立高效液相色譜法測(cè)定麻杏止咳糖漿中苦杏仁苷含量的方法。采用KromasilC18柱，乙腈-0.1%磷酸溶液（8∶92）為流動(dòng)相，流速1.0mL·min-1，檢測(cè)波長207nm?？嘈尤受赵?.0406～0.812μg范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系，r=0.9999，平均回收率為99.0%，RSD為0.25%。本方法簡便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可用于麻杏止咳糖漿的質(zhì)量控制。

麻杏止咳糖漿；苦杏仁苷；高效液相色譜法；含量測(cè)定

麻杏止咳糖漿是由麻黃、苦杏仁、甘草（炙）、石膏等4味藥材加工制成的復(fù)方制劑，具有鎮(zhèn)咳、祛痰、平喘的功效。臨床用于急慢性運(yùn)氣管炎及喘息等。目前其檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)有2個(gè),1個(gè)是衛(wèi)生部《藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑第20冊(cè)[1]，另1個(gè)是《國家藥品監(jiān)督管理局藥品標(biāo)準(zhǔn)》（內(nèi)科肺系二）[2]。第1個(gè)標(biāo)準(zhǔn)無含量測(cè)定項(xiàng)，第2個(gè)標(biāo)準(zhǔn)有鹽酸麻黃堿的含量測(cè)定?？嘈尤适欠街兄箍绕酱闹魉?，主要有效成分為苦杏仁苷，其在體內(nèi)能慢慢分解，產(chǎn)生少量氫氰酸，從而抑制呼吸中樞，使呼吸系統(tǒng)趨于安靜而呈現(xiàn)止咳平喘的功效，過量又會(huì)出現(xiàn)中毒癥狀[3], 因此苦杏仁苷的含量將直接影響到麻杏止咳糖漿的安全和療效, 目前尚無有關(guān)麻杏止咳糖漿中苦杏仁苷含量測(cè)定的報(bào)告,通過測(cè)定麻杏止咳糖漿中苦杏仁苷的含量，可以作為控制該產(chǎn)品質(zhì)量的一個(gè)重要指標(biāo),因此筆者參考有關(guān)文獻(xiàn)[4-7]，采用HPLC法建立了麻杏止咳糖漿中苦杏仁苷的含量測(cè)定方法,為保證該制劑安全有效提供依據(jù)。該方法操作簡便、、結(jié)果準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可作為麻杏止咳糖漿的質(zhì)量控制方法。

1 儀器與試藥

LC-10Atvp型高效液相色譜儀，SPD-10Avp紫外檢測(cè)儀，威瑪龍色譜數(shù)據(jù)工作站，BP211D型電子天平。

苦杏仁苷對(duì)照品（中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)110820-200403），麻杏止咳糖漿（自制產(chǎn)品，批號(hào)：130101，130102，130103）；乙睛(色譜純)，水為超純水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1色譜條件

色譜柱：Kromasil C18色譜柱(4.6mm×250mm，5μm)；流動(dòng)相：乙晴-0.1%磷酸溶液（8∶92）；檢測(cè)波長：207nm；流速：1.0mL·min-1；柱溫：室溫。進(jìn)樣量：10μL。在上述色譜條件下苦杏仁苷對(duì)照品的保留時(shí)間約為10.45min，理論板數(shù)按苦杏仁苷峰計(jì)算應(yīng)不低于7000。

2.2對(duì)照品溶液的制備

精密稱取在105℃干燥至恒重的苦杏仁苷對(duì)照品適量，加甲醇制成40.6μg·mL-1的溶液，用0.45μm的微孔濾膜濾過，作為對(duì)照品溶液。

2.3供試品溶液的制備

取本品適量，搖勻，精密量取5.0mL，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50mL，稱定重量，超聲（功率250W，頻率50kHz）處理10min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.4陰性對(duì)照溶液的制備

取缺少苦杏仁的其他味藥按部頒標(biāo)準(zhǔn)麻杏止咳糖漿處方工藝制成陰性制劑，按供試品溶液制備方法制備陰性樣品溶液。

2.5線性關(guān)系考察

分別精密吸取對(duì)照品溶液1、3、5、10、15、20μL注入液相色譜儀，按“2.1”項(xiàng)的色譜條件測(cè)定，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，苦杏仁苷回歸方程為Y＝1.97×106X+2.32×103r＝0.9999，結(jié)果表明，苦杏仁苷在0.0406～0.812μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

2.6干擾試驗(yàn)

精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性樣品溶液各10μL注入高效液相色譜儀，分別測(cè)定，結(jié)果表明，供試品溶液與對(duì)照品溶液主峰的保留時(shí)間一致，陰性樣品溶液在與苦杏仁苷相同保留時(shí)間處無吸收峰，表明陰性樣品無干擾。色譜圖見圖1。

圖1 HPLC色譜圖

2.7精密度試驗(yàn)

精密吸取對(duì)照品溶液10μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積。結(jié)果苦杏仁苷RSD為1.1%，表明精密度良好。

2.8穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取同一批號(hào)的供試品溶液，于0、4、8、12、24h分別測(cè)定峰面積。結(jié)果苦杏仁苷RSD為0.45%，結(jié)果表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.9重復(fù)性試驗(yàn)

取同一供試品（批號(hào)130101）6份，按“2.3”項(xiàng)方法制備，照“2.1”項(xiàng)色譜條件測(cè)定。結(jié)果苦杏仁苷的平均含量為0.5146 mg·mL-1，RSD為1.3%，表明重復(fù)性良好。

2.10加樣回收率試驗(yàn)

精密量取已知含量的樣品9份（含量為0.5146 mg·mL-1），每份2.5 mL，分別精密加入苦杏仁苷對(duì)照品溶液（0.4060 mg·mL-1）1mL、2mL、3mL，按供試品溶液制備方法制備，按上述色譜條件測(cè)定含量，計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見表1。

表1 苦杏仁苷量測(cè)定加樣回收率測(cè)定結(jié)果（n=9）

2.11樣品測(cè)定結(jié)果

取3批麻杏止咳糖漿（130101、130102、130103），按2.3項(xiàng)方法制備供試品溶液6份（每批2份），精密吸取供試品溶液與對(duì)照品溶液各10μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測(cè)定，照外標(biāo)法（峰面積）計(jì)算苦杏仁苷的含量，結(jié)果見表2。

表2 樣品測(cè)定結(jié)果表

3 討論

3.1溶劑的選擇

先后采用甲醇、70%甲醇、乙醇作為溶劑對(duì)樣品進(jìn)行超聲提取，提取液進(jìn)行HPLC測(cè)定。結(jié)果表明，以甲醇作溶劑雜質(zhì)峰干擾少，樣品分離完全，分離度較好，測(cè)得的苦杏仁苷含量較高，故選用甲醇為提取溶媒。

3.2提取方法研究

采用甲醇回流法、甲醇浸提法和甲醇超聲法提取樣品，提取液進(jìn)行HPLC測(cè)得，考察了不同的提取方法對(duì)樣品中苦杏仁苷含量測(cè)定的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)傳統(tǒng)溶劑浸提法與回流提取法測(cè)得的苦杏仁苷含量相近，而超聲提取法測(cè)得的苦杏仁苷含量較高，且操作簡單，提取時(shí)間短。

3.3流動(dòng)相的選擇

對(duì)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道的流動(dòng)相進(jìn)行篩選，分別采用甲醇-水（17∶83）、水-甲醇-乙腈（75∶20∶5）、乙腈-0.1%磷酸溶液（8∶92）、甲醇-0.1%磷酸溶液（20∶80）進(jìn)行考察，結(jié)果表明以乙腈-0.1%磷酸溶液（8∶92）作為流動(dòng)相，對(duì)照品與樣品中其他組分達(dá)到基線分離，分離度達(dá)6.5，分離效果最好，且保留時(shí)間適中，陰性對(duì)照無干擾峰出現(xiàn)。

3.4超聲時(shí)間對(duì)含量提取的影響

比較不同的超聲時(shí)間，分別采用10、20、30min，甲醇超聲提取制備供試品溶液，經(jīng)含量測(cè)定比較發(fā)現(xiàn)，樣品含量在10～30min保持恒定，故選擇超聲提取10min。

4 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)建立了麻杏止咳糖漿中苦杏仁苷的HPLC含量測(cè)定方法，方法簡便、可靠、準(zhǔn)確，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

[1] 中華人民共和國藥典委員會(huì). 中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第20冊(cè)[M]. 北京：中華人民共和國藥典委員會(huì)，1991：338.

[2] 國家藥品監(jiān)督管理局. 國家中成藥標(biāo)準(zhǔn)匯編內(nèi)科肺系（二）分冊(cè)[M]. 北京：人民衛(wèi)生出版社，2002：263-264.

[3] 江蘇新醫(yī)學(xué)院. 中藥大辭典（上）[M]. 上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，1986：1100-1102.

[4] 中華人民共和國藥典委員會(huì). 中華人民共和國藥典一部[M]. 北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：187-188.

[5] 甄攀.麻杏止咳片中苦杏仁苷的HPLC分析[J].中成藥，2003，25（2）：115.

[6] 王乾蕾，李運(yùn)景，余健，夏憲平，等.高效液相色譜法測(cè)定清肺合劑中苦杏仁苷含量[J].中國藥業(yè)，2008，17（19）：31-32.

[7] 稅丕先，孫琴，莊元春，等.HPLC測(cè)定止嗽定喘片中苦杏仁苷的含量[J].中成藥，2007，29(12)：1870-1872.

[8] 韋志英，楊志麗，陸海琳，等.HPLC法測(cè)定桃仁配方顆粒中苦杏仁苷的含量[J].廣西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2010，13（4）：49-50.

Determination of Amygdalin in Maxing Cough Syrup by HPLC

LUO Pei-he1,ZHU Qi-qiong2
(1.Qinzhou Food and Drug Administration,Qinzhou 535000,China; 2.Guangxi Food and Drug Administration,Nanning 530022，China）

A HPLC method for determination of amygdalin in Maxing cougy syrup by HPLC was established.Applied KromasilC18 column(250mm×4.6mm,5μm), the mobile phase was acetonitrile-0.1% phosphoric acid solution(8:92), the fow rate of 1.0mL·min-1, the detecting wavelength was at 207nm. The linear range of amygdalin was 0.0406～0.8112μg (r=0.9999),the average recovery was 99.0%, RSD was 0.25%.The method was simple，accurate and reproducible，it could be used for quality control of maxing cough syrup.

Maxing cough syrup; amygdalin；HPLC；content determination

R 927.2 O 657.7+2

A

1671-9905(2014)02-0042-03

2013-11-20