羅培和，朱其瓊

（1.欽州市食品藥品監(jiān)督管理局，廣西 欽州 535000；2.廣西食品藥品監(jiān)督管理局,廣西 南寧 530022)

實驗室與分析

HPLC法測定麻杏止咳糖漿中苦杏仁苷的含量

羅培和1，朱其瓊2

（1.欽州市食品藥品監(jiān)督管理局，廣西 欽州 535000；2.廣西食品藥品監(jiān)督管理局,廣西 南寧 530022)

建立高效液相色譜法測定麻杏止咳糖漿中苦杏仁苷含量的方法。采用KromasilC18柱，乙腈-0.1%磷酸溶液（8∶92）為流動相，流速1.0mL·min-1，檢測波長207nm?？嘈尤受赵?.0406～0.812μg范圍內有良好的線性關系，r=0.9999，平均回收率為99.0%，RSD為0.25%。本方法簡便、準確、重現性好，可用于麻杏止咳糖漿的質量控制。

麻杏止咳糖漿；苦杏仁苷；高效液相色譜法；含量測定

麻杏止咳糖漿是由麻黃、苦杏仁、甘草（炙）、石膏等4味藥材加工制成的復方制劑，具有鎮(zhèn)咳、祛痰、平喘的功效。臨床用于急慢性運氣管炎及喘息等。目前其檢驗標準有2個,1個是衛(wèi)生部《藥品標準》中藥成方制劑第20冊[1]，另1個是《國家藥品監(jiān)督管理局藥品標準》（內科肺系二）[2]。第1個標準無含量測定項，第2個標準有鹽酸麻黃堿的含量測定?？嘈尤适欠街兄箍绕酱闹魉?，主要有效成分為苦杏仁苷，其在體內能慢慢分解，產生少量氫氰酸，從而抑制呼吸中樞，使呼吸系統(tǒng)趨于安靜而呈現止咳平喘的功效，過量又會出現中毒癥狀[3], 因此苦杏仁苷的含量將直接影響到麻杏止咳糖漿的安全和療效, 目前尚無有關麻杏止咳糖漿中苦杏仁苷含量測定的報告,通過測定麻杏止咳糖漿中苦杏仁苷的含量，可以作為控制該產品質量的一個重要指標,因此筆者參考有關文獻[4-7]，采用HPLC法建立了麻杏止咳糖漿中苦杏仁苷的含量測定方法,為保證該制劑安全有效提供依據。該方法操作簡便、、結果準確、重現性好，可作為麻杏止咳糖漿的質量控制方法。

1 儀器與試藥

LC-10Atvp型高效液相色譜儀，SPD-10Avp紫外檢測儀，威瑪龍色譜數據工作站，BP211D型電子天平。

苦杏仁苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號110820-200403），麻杏止咳糖漿（自制產品，批號：130101，130102，130103）；乙睛(色譜純)，水為超純水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1色譜條件

色譜柱：Kromasil C18色譜柱(4.6mm×250mm，5μm)；流動相：乙晴-0.1%磷酸溶液（8∶92）；檢測波長：207nm；流速：1.0mL·min-1；柱溫：室溫。進樣量：10μL。在上述色譜條件下苦杏仁苷對照品的保留時間約為10.45min，理論板數按苦杏仁苷峰計算應不低于7000。

2.2對照品溶液的制備

精密稱取在105℃干燥至恒重的苦杏仁苷對照品適量，加甲醇制成40.6μg·mL-1的溶液，用0.45μm的微孔濾膜濾過，作為對照品溶液。

2.3供試品溶液的制備

取本品適量，搖勻，精密量取5.0mL，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50mL，稱定重量，超聲（功率250W，頻率50kHz）處理10min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.4陰性對照溶液的制備

取缺少苦杏仁的其他味藥按部頒標準麻杏止咳糖漿處方工藝制成陰性制劑，按供試品溶液制備方法制備陰性樣品溶液。

2.5線性關系考察

分別精密吸取對照品溶液1、3、5、10、15、20μL注入液相色譜儀，按“2.1”項的色譜條件測定，以峰面積積分值為縱坐標，進樣量（μg）為橫坐標，進行線性回歸，苦杏仁苷回歸方程為Y＝1.97×106X+2.32×103r＝0.9999，結果表明，苦杏仁苷在0.0406～0.812μg范圍內與峰面積線性關系良好。

2.6干擾試驗

精密吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性樣品溶液各10μL注入高效液相色譜儀，分別測定，結果表明，供試品溶液與對照品溶液主峰的保留時間一致，陰性樣品溶液在與苦杏仁苷相同保留時間處無吸收峰，表明陰性樣品無干擾。色譜圖見圖1。

圖1 HPLC色譜圖

2.7精密度試驗

精密吸取對照品溶液10μL，連續(xù)進樣6次，測定峰面積。結果苦杏仁苷RSD為1.1%，表明精密度良好。

2.8穩(wěn)定性試驗

精密吸取同一批號的供試品溶液，于0、4、8、12、24h分別測定峰面積。結果苦杏仁苷RSD為0.45%，結果表明供試品溶液在24h內穩(wěn)定。

2.9重復性試驗

取同一供試品（批號130101）6份，按“2.3”項方法制備，照“2.1”項色譜條件測定。結果苦杏仁苷的平均含量為0.5146 mg·mL-1，RSD為1.3%，表明重復性良好。

2.10加樣回收率試驗

精密量取已知含量的樣品9份（含量為0.5146 mg·mL-1），每份2.5 mL，分別精密加入苦杏仁苷對照品溶液（0.4060 mg·mL-1）1mL、2mL、3mL，按供試品溶液制備方法制備，按上述色譜條件測定含量，計算加樣回收率，結果見表1。

表1 苦杏仁苷量測定加樣回收率測定結果（n=9）

2.11樣品測定結果

取3批麻杏止咳糖漿（130101、130102、130103），按2.3項方法制備供試品溶液6份（每批2份），精密吸取供試品溶液與對照品溶液各10μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定，照外標法（峰面積）計算苦杏仁苷的含量，結果見表2。

表2 樣品測定結果表

3 討論

3.1溶劑的選擇

先后采用甲醇、70%甲醇、乙醇作為溶劑對樣品進行超聲提取，提取液進行HPLC測定。結果表明，以甲醇作溶劑雜質峰干擾少，樣品分離完全，分離度較好，測得的苦杏仁苷含量較高，故選用甲醇為提取溶媒。

3.2提取方法研究

采用甲醇回流法、甲醇浸提法和甲醇超聲法提取樣品，提取液進行HPLC測得，考察了不同的提取方法對樣品中苦杏仁苷含量測定的影響，結果發(fā)現傳統(tǒng)溶劑浸提法與回流提取法測得的苦杏仁苷含量相近，而超聲提取法測得的苦杏仁苷含量較高，且操作簡單，提取時間短。

3.3流動相的選擇

對相關文獻報道的流動相進行篩選，分別采用甲醇-水（17∶83）、水-甲醇-乙腈（75∶20∶5）、乙腈-0.1%磷酸溶液（8∶92）、甲醇-0.1%磷酸溶液（20∶80）進行考察，結果表明以乙腈-0.1%磷酸溶液（8∶92）作為流動相，對照品與樣品中其他組分達到基線分離，分離度達6.5，分離效果最好，且保留時間適中，陰性對照無干擾峰出現。

3.4超聲時間對含量提取的影響

比較不同的超聲時間，分別采用10、20、30min，甲醇超聲提取制備供試品溶液，經含量測定比較發(fā)現，樣品含量在10～30min保持恒定，故選擇超聲提取10min。

4 結論

本實驗建立了麻杏止咳糖漿中苦杏仁苷的HPLC含量測定方法，方法簡便、可靠、準確，可用于該制劑的質量控制。

[1] 中華人民共和國藥典委員會. 中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準中藥成方制劑第20冊[M]. 北京：中華人民共和國藥典委員會，1991：338.

[2] 國家藥品監(jiān)督管理局. 國家中成藥標準匯編內科肺系（二）分冊[M]. 北京：人民衛(wèi)生出版社，2002：263-264.

[3] 江蘇新醫(yī)學院. 中藥大辭典（上）[M]. 上海：上?？茖W技術出版社，1986：1100-1102.

[4] 中華人民共和國藥典委員會. 中華人民共和國藥典一部[M]. 北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：187-188.

[5] 甄攀.麻杏止咳片中苦杏仁苷的HPLC分析[J].中成藥，2003，25（2）：115.

[6] 王乾蕾，李運景，余健，夏憲平，等.高效液相色譜法測定清肺合劑中苦杏仁苷含量[J].中國藥業(yè)，2008，17（19）：31-32.

[7] 稅丕先，孫琴，莊元春，等.HPLC測定止嗽定喘片中苦杏仁苷的含量[J].中成藥，2007，29(12)：1870-1872.

[8] 韋志英，楊志麗，陸海琳，等.HPLC法測定桃仁配方顆粒中苦杏仁苷的含量[J].廣西中醫(yī)學院學報，2010，13（4）：49-50.

Determination of Amygdalin in Maxing Cough Syrup by HPLC

LUO Pei-he1,ZHU Qi-qiong2
(1.Qinzhou Food and Drug Administration,Qinzhou 535000,China; 2.Guangxi Food and Drug Administration,Nanning 530022，China）

A HPLC method for determination of amygdalin in Maxing cougy syrup by HPLC was established.Applied KromasilC18 column(250mm×4.6mm,5μm), the mobile phase was acetonitrile-0.1% phosphoric acid solution(8:92), the fow rate of 1.0mL·min-1, the detecting wavelength was at 207nm. The linear range of amygdalin was 0.0406～0.8112μg (r=0.9999),the average recovery was 99.0%, RSD was 0.25%.The method was simple，accurate and reproducible，it could be used for quality control of maxing cough syrup.

Maxing cough syrup; amygdalin；HPLC；content determination

R 927.2 O 657.7+2

A

1671-9905(2014)02-0042-03

2013-11-20