鄒同會，汪永強，鄒軍

(內(nèi)江市第二人民醫(yī)院瀘州醫(yī)學院附屬內(nèi)江醫(yī)院檢驗科，四川內(nèi)江 641100)

高爾基體蛋白73與甲胎蛋白對肝癌診斷價值的研究

鄒同會，汪永強，鄒軍

(內(nèi)江市第二人民醫(yī)院瀘州醫(yī)學院附屬內(nèi)江醫(yī)院檢驗科，四川內(nèi)江 641100)

目的探討甲胎蛋白(AFP)與高爾基體蛋白73(GP73)對肝癌早期診斷的價值。方法采用酶聯(lián)免疫法(Enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)對肝癌患者80例、肝硬化患者30例血清中AFP、GP73進行檢測，30例健康體檢者作為對照。結(jié)果①肝癌組、肝硬化組、正常對照組AFP平均濃度為64.5 μg/L、50.1 μg/L、21.9 μg/L(肝癌組vs對照組P＜0.01，肝硬化組vs對照組P＜0.01，肝硬化組vs肝癌組P＜0.01)，肝癌組、肝硬化組、正常對照組GP73平均濃度為268.4 μg/L、192.3 μg/L、49.8 μg/L(P＜0.01)。②AFP診斷肝癌的ROC曲線下面積為0.729，P=0.000，GP73診斷肝癌的ROC曲線下面積為0.892，P=0.000。AFP聯(lián)合GP73對肝癌診斷的ROC曲線下面積為0.902。結(jié)論GP73診斷肝癌的價值高于AFP，AFP+GP73聯(lián)合檢測不能提高診斷效率。

肝細胞癌；甲胎蛋白；高爾基體蛋白 73；ROC曲線

原發(fā)性肝癌(Primary hepatic cancer，PHC)是我國常見惡性腫瘤之一，其中約95%為肝細胞癌(Hepatocellular carcinoma，HCC)，死亡率高，在消化系統(tǒng)惡性腫瘤中僅次于胃癌、食道癌而居第三位。多數(shù)肝癌早期患者缺乏典型的臨床癥狀和體征，因而導致病情的延誤。目前肝癌的早期診斷主要依靠聯(lián)合AFP等多種腫瘤標志物的聯(lián)合免疫診斷，然而當前實驗室開展的絕大多數(shù)常用腫瘤標志物的敏感度和特異性各異，并不適合于早期篩查和普查。本實驗研究的特異性強的新型肝癌標志物將為肝癌的早期診斷提供可靠的依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 研究對象本研究納入研究的為我院2012年3月至2013年1月收治的肝癌患者(HCC)80例、肝硬化30例，正常對照組30例，HCC診斷標準按照2010年NCCN指南，以上各組研究對象在性別、年齡方面差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)

1.2 研究方法

1.2.1 標本的采集與保存患者及查體者均清晨空腹采集靜脈采集3 ml，采血管為一次性真空促凝采血管，以3 000 r/min離心10 min，分離血清置入EP管并盡快放入-70℃冰箱待檢。

1.2.2 高爾基體蛋白73(GP73)檢測采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)，試劑盒購自熱景生物有限公司，采用雙抗體夾心法定量檢測血清或血漿中GP73含量，酶標板上預包被抗GP73單抗，可與樣品中GP73反應結(jié)合，配合加入HRP標記GP73多抗，然后用TMB底物作用顯色，顯色強度與樣品中GP73的濃度呈正比。通過酶標儀檢測吸光度(OD)值，按照GP73校準品制定濃度曲線，計算樣品中GP73的含量。

1.2.3 甲胎蛋白(AFP)檢測采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)，應用雙抗體夾心法測定標本中AFP的水平，檢測嚴格按照說明書操作。

1.3 統(tǒng)計學方法所有數(shù)據(jù)采用PASW17.0統(tǒng)計學軟件處理，計量資料用方差分析，組間比較用LSD均值統(tǒng)計，單項診斷價值采用ROC曲線分析，AFP與GP73聯(lián)合的診斷價值采用SPSS17.0的Binary Logistic回歸，并產(chǎn)生各個體預測概率的新變量。

2 結(jié)果

2.1 肝癌組、肝硬化組與正常對照組AFP濃度肝癌組、肝硬化組、正常對照組AFP平均濃度為64.5 μg/L、50.1 μg/L、21.9 μg/L，三組總體P=0.000，兩兩比較檢驗水準取a=0.017，肝癌組vs對照組P＜0.017，肝硬化組vs對照組P＜0.017，肝硬化組vs肝癌組P＜0.017。

2.2 肝癌組，肝硬化組與正常對照組GP73濃度GP73在肝癌組、肝硬化組、正常對照濃度為268.4 μg/L、192.3 μg/L、49.8 μg/L，三組經(jīng)單因素方差分析P=0.000，兩兩比較用LSD法均值統(tǒng)計表明：肝癌組vs對照組P=0.000，肝硬化組vs對照組P=0.000，肝癌組vs肝硬化組P=0.001。

2.3 AFP與GP73在診斷肝癌的價值經(jīng)ROC曲線分析顯示，AFP診斷肝癌的的ROC曲線下面積為0.729，P=0.000，GP73診斷肝癌的ROC曲線下面積為0.892，P=0.000，GP73診斷肝癌價值高于AFP。取GP73為127.02為最佳診斷分界點，正確診斷(Youden指數(shù))最大，為0.80。AFP與GP73聯(lián)合的診斷價值采用PASW的Binary Logistic回歸，并產(chǎn)生各個體預測概率的新變量，ROC曲線顯示AFP+GP73聯(lián)合檢測的AUC為0.902，較GP73單一指標AUC為0.892比較，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.01)，見圖1。

圖1 AFP與GP73單項與聯(lián)合對肝癌的ROC曲線

3 討論

原發(fā)性肝癌是成年人最常見的惡性腫瘤之一，其術后復發(fā)率高，轉(zhuǎn)移率高，且預后差。對肝癌腫瘤相關標志物研究，合理地進行外周血腫瘤標志物的檢測，有助于肝癌的早期診斷、早期治療、干預以及預測轉(zhuǎn)歸，提高肝癌患者的生存率。

除傳統(tǒng)的腫瘤標志物外，目前從基因?qū)用鎸ふ倚碌哪[瘤標志物一直是研究的熱點。近年來隨著研究的不斷深入，發(fā)現(xiàn)DNA序列以為的調(diào)控機制異常在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用相當普遍，DNA甲基化是真核細胞基因組最常見的一種表觀遺傳學修飾，在細胞增殖、分化、發(fā)育等方面起著重要作用，腫瘤相關基因DNA甲基化研究取得了大量的研究成果，提示DNA甲基化研究對于腫瘤診斷、治療具有巨大的應用潛力，作為腫瘤診斷的分子標志物，各種抑癌基因啟動子區(qū)甲基化檢測研究的最多，研究方法也未成熟[1]。在基因轉(zhuǎn)錄層面，miRNA和長鏈非編碼lncRNA對肝癌診斷的分子標志物研究頗多[2-3]，但從經(jīng)濟與實用方面來講，直接檢測外周血蛋白質(zhì)是最簡便的方法。

甲胎蛋白(AFP)的檢測在臨床應用最廣泛，AFP是目前肝癌診斷和預后的首選標志物，它是胚胎專一性的甲種球蛋白，由胚肝實質(zhì)細胞和卵黃囊細胞合成，在胚胎第12周合成達高峰隨即下降，Tangkijvanich等[4]發(fā)現(xiàn)，當肝癌患者血清AFP濃度＞400 ng/ml時，其腫瘤體積、肝葉受累、浸潤生長及門靜脈血栓形成情況均較低血清AFP濃度組更嚴重，但AFP也受病毒性肝炎的影響，現(xiàn)在更趨向于檢測特異性AFP的檢測[5]，可提高診斷的敏感性與特異性。本研究顯示：肝硬化與肝癌患者血清中AFP都比對照組高，但肝硬化患者AFP水平明顯低于肝癌患者，經(jīng)ROC曲線分析顯示，AFP診斷肝癌的ROC曲線下面積為0.729，診斷價值偏低。

GP73是定位于高爾基體的一種跨膜蛋白，該蛋白主要表達于人類多種組織上皮細胞，在正常肝臟細胞中低表達，文獻報道GP73蛋白能正確區(qū)分正常肝細胞、肝硬化與肝癌細胞，GP73診斷肝癌的ROC曲線下面積為0.824[6]，另有報道GP73診斷肝癌的ROC曲線下面積為0.900[7]，與本研究GP73單項診斷肝癌的ROC曲線面積為0.892，但AFP與GP73聯(lián)合的診斷價值采用SPSS的Binary Logistic回歸，用產(chǎn)生各個體預測概率的新變量做聯(lián)合檢測時的ROC曲線下面積為0.902，與GP73單項的0.892相比，并沒有提高多少，因此聯(lián)合檢測并沒有提高診斷價值，當然還需加大樣本量進行確認。

綜上所述，GP73診斷對肝癌具有較高的診斷價值，聯(lián)合AFP檢測并沒有提高肝癌的診斷價值，

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Diagnostic value of Golgi protein 73 and AFP protein in patients with hepatocellular carcinoma.

ZOU Tong-hui, WANG Yong-qiang,ZOU Jun.Department of Laboratory Medicine,the Second Hospital of Neijiang City,the Affiliated Neijiang Hospital of Luzhou Medical University,Neijiang 631001,Sichuan,CHINA

ObjectiveTo explore the value of alpha-fetoprotein(AFP)and Golgi protein 73(GP73)in the early diagnosis of hepatocellular carcinoma.MethodsAFP and GP73 were detected with enzyme-linked immunosorbent assay(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)in 80 patients with hepatocellular carcinoma and 30 patients with hepatocirrhosis.30 healthy subjects were selected as controls.Results①The mean concentrations of AFP in hepatocellular carcinoma group,hepatocirrhosis group and control group was 64.5,50.1,and 21.9 respectively,among which there were significantly differences(P＜0.01).The concentrations of GP73 in hepatocellular carcinoma group, hepatocirrhosis group and control group was 268.4,192.3 and 49.8 respectively,among which there were significantly differences(P＜0.01).②The areas under ROC curves of AFP and GP73 were 0.729 and 0.892 respectively in diagnosis of hepatocellular carcinoma.The area under ROC curve of AFP combined GP73 was 0.902 for diagnosis of hepatocellular carcinoma.ConclusionCompared with AFP,GP73 is more sensitive and accurate in diagnosis of liver cancer,and it is not necessary to test GP73 combined withAFP.

Hepatocellular carcinoma;Alpha-fetoprotein;Golgi protein 73;ROC curve

R735.7

A

1003—6350（2014）16—2398—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2014.16.0935

2014-03-09)

吳階平醫(yī)學基金會肝病實驗診斷研究基金(編號：LDWMF-SY—2011C007)

鄒同會。E-mail：709578724@qq.com