王成榮，卞廷松，史兵偉，談小林，楊凱

(1.南京中醫(yī)藥大學(xué)，江蘇南京 210046；2.常州市中醫(yī)醫(yī)院男科，江蘇常州 213003；3.常州市中醫(yī)醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇常州 213003)

·論著·

慢性非細(xì)菌性前列腺炎患者前列腺液中IL-6和IL-22水平的研究

王成榮1，卞廷松2，史兵偉3，談小林2，楊凱1

(1.南京中醫(yī)藥大學(xué)，江蘇南京 210046；2.常州市中醫(yī)醫(yī)院男科，江蘇常州 213003；3.常州市中醫(yī)醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇常州 213003)

目的比較慢性非細(xì)菌性前列腺炎(CAP)患者與正常人前列腺液(EPS)中細(xì)胞因子IL-6和IL-22的水平。方法選擇24例CAP患者為實(shí)驗(yàn)組和10例健康人為對照組，分別取兩組受試者的EPS，采用ELISA法檢測其IL-6和IL-22水平。結(jié)果實(shí)驗(yàn)組IL-6值11.65 pg/ml(4.42～17.78 pg/ml)，IL-22值(8.64±2.58)pg/ml；對照組IL-6值3.52 pg/ml(2.76～8.32 pg/ml)，IL-22值(9.31±2.26)pg/ml。實(shí)驗(yàn)組IL-6水平顯著高于對照組(P＜0.01)，但兩組之間的IL-22水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。結(jié)論IL-6可能與CAP之間存在一定的關(guān)系，IL-6可能具有調(diào)節(jié)前列腺局部免疫反應(yīng)的作用；而IL-22與CAP之間無明顯聯(lián)系，我們推測IL-22可能不參與前列腺的局部免疫反應(yīng)。

慢性非細(xì)菌性前列腺炎；IL-6；IL-22

慢性非細(xì)菌性前列腺炎(Chronic abacterial prostatitis，CAP)是泌尿男性科常見病和多發(fā)病，其對男性患者的生活質(zhì)量以及精神有著較大影響。目前國內(nèi)外研究者對其病因、發(fā)病機(jī)制的認(rèn)識還略顯不足，國內(nèi)外諸多研究已表明炎癥因子與慢性非細(xì)菌性前列腺炎之間有著較為密切的關(guān)系[1-2]。本實(shí)驗(yàn)通過比較CAP患者與正常人前列腺液(EPS)中細(xì)胞因子IL-6、IL-22的水平，探討IL-6、IL-22與CAP之間的關(guān)系，旨為在臨床泌尿男性科醫(yī)生對于此病的診斷、治療及預(yù)后提供一些理論依據(jù)，以便更好地服務(wù)臨床，服務(wù)患者。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2009年7月至2011年1月來南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬常州市中醫(yī)醫(yī)院男科門診就診的CAP患者24例為實(shí)驗(yàn)組，年齡最小20歲，最大47歲，平均28.8歲，選擇正常人10例作為對照組，年齡最小27歲，最大40歲，平均30.7歲。

1.1.1 診斷標(biāo)準(zhǔn)參照吳階平主編的《吳階平泌尿外科學(xué)》制訂。①癥狀：不同程度的尿頻、尿急、尿痛、尿不盡感，尿道灼熱，于晨起、尿末或大便時(shí)尿道偶有少量白色分泌物流出，會(huì)陰部、外生殖器區(qū)、下腹部、恥骨上區(qū)、腰骶及肛門周圍墜脹、疼痛；②前列腺觸診：前列腺表面不平或不對稱；質(zhì)地不均勻，可觸及炎性結(jié)節(jié)；有局限性壓痛；③下尿路兩杯法細(xì)菌培養(yǎng)陰性，EPS鏡檢：卵磷脂小體減少或消失。凡具備①～③中任何一項(xiàng)即可確診。

1.1.2 納入標(biāo)準(zhǔn)①符合上述診斷標(biāo)準(zhǔn)；②病程≥3個(gè)月者；③年齡18～50歲。

1.1.3 排除標(biāo)準(zhǔn)①年齡在18歲以下和50歲以上者；②有良性前列腺增生癥、前列腺腫瘤、尿路疾病及嚴(yán)重神經(jīng)官能癥患者；③合并有心血管、腦血管、肝腎和造血系統(tǒng)等嚴(yán)重原發(fā)性疾病以及精神病患者；④急性前列腺炎以及特異性前列腺炎患者；⑤離心尿白細(xì)胞(WBC)＞5個(gè)/HP；⑥以局部疼痛為主要表現(xiàn)的患者應(yīng)注意排除下腹、會(huì)陰、腰骶等部位的其他病變，如輸尿管結(jié)石、精索靜脈曲張等。

1.2 標(biāo)本的收集與保存先用新潔爾滅消毒尿道外口，然后讓患者取膝胸位，醫(yī)生經(jīng)直腸按摩采集前列腺液標(biāo)本，收集于無菌的痰培養(yǎng)皿中，最后移于1.5 ml離心管中，-80℃冷凍保存。

1.3 指標(biāo)檢測采用雙抗體夾心ABC-ELISA法檢測前列腺液中IL-6、IL-22的濃度。試劑分別為人白介素-6(IL-6)，人白介素-22(IL-22)ELISA試劑盒，均購自上海西唐生物科技有限公司。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 原理本實(shí)驗(yàn)采用雙抗體夾心ABC-ELISA法。用抗人IL-22/抗人IL-6單抗包被于酶標(biāo)板上，標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的IL-22/IL-6與單抗結(jié)合，加入生物素化的抗人IL-22/抗人IL-6，形成免疫復(fù)合物連接在板上，辣根過氧化物酶標(biāo)記的Streptavidin與生物素結(jié)合，加入底物工作液顯藍(lán)色，最后加終止液硫酸，在450 nm處測OD值，IL-22和IL-6濃度與OD值成正比，可通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線分別求出標(biāo)本中IL-22以及IL-6濃度。

1.4.2 試劑盒組成(1)酶標(biāo)板；(2)酶標(biāo)抗體工作液；(3)0×標(biāo)本稀釋液；(4)20×濃縮洗滌液；(5)標(biāo)準(zhǔn)品；(6)底物工作液；(7)第一抗體工作液；(8)終止液。

1.4.3 試劑的準(zhǔn)備①10×標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作1：10倍稀釋。②標(biāo)準(zhǔn)品液配制：使用前加入2 ml蒸餾水混勻，IL-6配成10 ng/ml的溶液(IL-22配成20 ng/ml的溶液)。取8個(gè)1.5 ml離心管，第一管加標(biāo)本稀釋液900 μl，第二至第八管加入標(biāo)本稀釋液500 μl。在第一管中加入20 ng/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液100 μl置于漩渦混合器上混勻后用加樣器吸出500 μl，移至第二管。如此反復(fù)作對倍稀釋，從第七管中吸出500 μl棄去。第八管為空白對照。③洗滌液：用重蒸水1：20稀釋。

1.4.4 檢測程序①加樣：每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100 μl，將反應(yīng)板充分混勻后置37℃40 min。②洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌5次，向?yàn)V紙上印干。③每孔加入蒸餾水和第一抗體工作液各50 μl (空白除外)。將反應(yīng)板充分混勻后置37℃20 min。④洗板：同前。⑤每孔加酶標(biāo)抗體工作液100 μl。將反應(yīng)板置37℃10 min。⑥洗板：同前。⑦每孔加入底物工作液100 μl，置37℃暗處反應(yīng)15 min。⑧每孔加入100 μl終止液混勻。⑨30 min內(nèi)用酶標(biāo)儀在450 nm處測吸光值。

1.4.5 結(jié)果計(jì)算與判斷所有OD值減除空白值后再行計(jì)算。IL-6以標(biāo)準(zhǔn)品1 000、500、250、125、62.5、31.2、15.6、0(pg/ml)為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)[(IL-22以標(biāo)準(zhǔn)品2 000、1 000、500、250、125、62.5、31.2、0(pg/ml)為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)]，使用軟件作圖，畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線。最后根據(jù)樣品OD值計(jì)算出相應(yīng)含量。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法所有數(shù)據(jù)均使用SASS19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)量資料正態(tài)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示，其組間比較采用成組t檢驗(yàn)，偏態(tài)數(shù)據(jù)以M(P25～P75)表示，其組間比較采用Wilcoxon秩和檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

與對照組比較，實(shí)驗(yàn)組EPS中的的IL-6水平顯著高于對照組，差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，而IL-22水平則低于對照組，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，見表1。

表1 兩組受試者的EPS中IL-6和IL-22水平比較(pg/ml，)

表1 兩組受試者的EPS中IL-6和IL-22水平比較(pg/ml，)

3 討論

CP患者的EPS或精液中可以出現(xiàn)某些細(xì)胞因子水平的變化，EPS中細(xì)胞因子水平與慢性前列腺炎有一定的相關(guān)性，這些細(xì)胞因子的變化可以更早、更準(zhǔn)確地體現(xiàn)前列腺的炎癥狀況。IL-6是機(jī)體許多細(xì)胞產(chǎn)生的一種具有多種生物學(xué)活性的細(xì)胞因子,是機(jī)體內(nèi)復(fù)雜細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)中的重要成員。體內(nèi)主要由巨噬細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、角質(zhì)細(xì)胞核T細(xì)胞等產(chǎn)生IL-6。IL-6主要通過自分泌或旁分泌產(chǎn)生，其能增強(qiáng)T細(xì)胞功能和IL-2的產(chǎn)生，具有免疫激活作用，可誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞浸潤到前列腺組織內(nèi)，使T、B細(xì)胞及NK細(xì)胞廣泛激活，促使中性粒細(xì)胞釋放溶酶體酶，從而加劇局部炎癥細(xì)胞浸潤，促進(jìn)炎癥的形成[3]。IL-6的生物學(xué)功能在正常情況下調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答,然而在病理情況下，其濃度的升高可引起免疫病理損傷。因此，患者體內(nèi)IL-6的水平過高表達(dá)，會(huì)對前列腺組織造成損傷。此外，IL-6對肝細(xì)、神經(jīng)組織、造血系統(tǒng)也會(huì)有廣泛影響，具有抗腫瘤效應(yīng)。Paulis等[4]曾對207例慢性前列腺炎患者前列腺液及精漿中的一些細(xì)胞因子水平進(jìn)行研究，他發(fā)現(xiàn)與正常人相比，慢性前列腺炎患者的IL-6水平顯著升高，因此其認(rèn)為IL-6是臨床診斷慢性前列腺炎比較好的指標(biāo)之一。韋超等[5]通過大鼠制造CAP模型，發(fā)現(xiàn)CAP大鼠的前列腺組織內(nèi)IL-6是高水平表達(dá)的，其進(jìn)一步證實(shí)了IL-6參與了前列腺組織炎癥的形成或加劇了炎癥反應(yīng)。因此我們認(rèn)為IL-6能在一定程度上反映前列腺的炎癥情況。

IL-22最先于2000年由Dumoutier等[6]用IL-9刺激一株T淋巴瘤細(xì)胞系所發(fā)現(xiàn)。人的IL-22主要是由T細(xì)胞產(chǎn)生，包括Th22細(xì)胞、Th17細(xì)胞，同時(shí)在NK細(xì)胞中可少量產(chǎn)生，而在巨噬細(xì)胞、成熟或不成熟的DC，以及非免疫細(xì)胞中都沒有發(fā)現(xiàn)有IL-22的表達(dá)，目前的研究表明IL-22主要靶向于消化道、皮膚與呼吸器官的非造血細(xì)胞，它在黏膜固有免疫中起重要作用[7-8]。IL-22的受體僅表達(dá)于表皮細(xì)胞和一些器官的纖維母細(xì)胞表面，現(xiàn)如今研究IL-22功能最透徹的疾病是銀屑病[7]。IL-22的受體復(fù)合物是以IL-10R2與IL-22R1構(gòu)成的異源二聚體，其中IL-10R2廣泛表達(dá)在各組織中，IL-22R1則主要表達(dá)在皮膚、腎臟、胰腺、肝臟、小腸，而在T細(xì)胞、NK細(xì)胞和單核細(xì)胞中不表達(dá)，因此IL-22具有獨(dú)特的作用，它由免疫細(xì)胞產(chǎn)生，但并不作用于這些免疫細(xì)胞，而是作用于組織細(xì)胞。我們檢索了一些文獻(xiàn)，在慢性前列腺炎方面目前還未發(fā)現(xiàn)有關(guān)IL-22的研究報(bào)道。因此，我們選擇了IL-6和IL-22兩種因子作為研究對象，擬分別從IL-6和IL-22方面來研究它們與CAP之間的關(guān)系，由于IL-6在CAP中的作用，這方面已有一些研究。因此，我們此次最主要的是研究探討IL-22是否與CAP的發(fā)病之間有聯(lián)系。

研究結(jié)果顯示，CAP患者EPS中IL-6水平較之正常人明顯升高(P＜0.01)，結(jié)合前人研究進(jìn)一步說明了IL-6與CAP之間的密切聯(lián)系，其參與了前列腺組織炎癥的形成或者是加劇了炎癥反應(yīng)；而兩組之間IL-22水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示IL-22與CAP之間可能沒有聯(lián)系，我們推測IL-22可能不參與前列腺的局部免疫反應(yīng)。IL-22與慢性非細(xì)菌性前列腺炎之間關(guān)系到底是什么，其中緣由耐人尋味，有待于我們以及廣大同仁的進(jìn)一步研究探討。

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Levels of IL-6 and IL-22 in expressed prostatic secretion of patients with chronic abacterial prostatitis.

WANG Cheng-rong1,BIAN Ting-song2,SHI Bing-wei3,TAN Xiao-lin2,YANG Kai1.
1.Nanjing University of TCM,Nanjing 210046,Jiangsu,CHINA;2.Department of Andrology,Changzhou Hospital of TCM,Changzhou 213003,Jiangsu, CHINA;3.Department of Clinical Laboratory,Changzhou Hospital of TCM,Changzhou 213003,Jiangsu,CHINA

ObjectiveTo compare the levels of IL-6 and IL-22 in expressed prostatic secretion(EPS)of between patients with chronic abacterial prostatitis(CAP)and healthy men.MethodsTwenty-four patients with CAP were chosen as experimental group,and 10 healthy people were chosen as control group.The levels of IL-6 and IL-22 in EPS were detected by ELISA.ResultsThe levels of IL-6 and IL-22 of experimental group were 11.65 pg/ml(4.42～17.78 pg/ml)and(8.64±2.58)pg/ml.The levels of IL-6 and IL-22 of control group were 3.52 pg/ml (2.76～8.32 pg/ml)and(9.31±2.26)pg/ml.Compared with the control group,the levels of IL-6 in experimental group was significantly higher(P＜0.01),and the levels of IL-22 in experimental group showed no statistically significant difference(P＞0.05).ConclusionThere may be a certain relation between IL-6 and CAP.IL-6 may regulate local immune response of prostate.There is no obvious relation between IL-22 and CAP,which indicates that IL-22 may not participate in the local immune response of prostate.

Chronic abacterial prostatitis(CAP);IL-6;IL-22

R697+.33

A

1003—6350（2014）22—3314—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2014.22.1298

2014-04-30)

江蘇省中管局項(xiàng)目(編號：LB09100)

卞廷松。E-mail：bst232370@163.com