馬雯霞，衷紅梅

(1．西安醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院，陜西 西安 710038；2．陜西省食品藥品檢驗所，陜西 西安 710065）

香菊顆粒具有辛散祛風(fēng)、清熱通竅的功效，臨床用于治療急慢性鼻竇炎、鼻炎等疾病，其現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)收載于《國家食品藥品監(jiān)督管理局·國家藥品標(biāo)準(zhǔn)新藥轉(zhuǎn)正標(biāo)準(zhǔn)》第38冊。標(biāo)準(zhǔn)中測定樣品有效成分黃芪甲苷含量方法為薄層掃描法，由于受點樣、展開、顯色、掃描等多種因素的影響，該法測定結(jié)果差異較大。筆者參考文獻[1－5]，采用高效液相色譜法對香菊顆粒中黃芪甲苷的含量進行測定，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

Waters－Alliance 2695－2487型(YY01520041103)高效液相色譜儀；Alltech ELSD 2000型蒸發(fā)光散射檢測器。香菊顆粒及其陰性樣品（陜西雪龍海姆普德藥業(yè)股份有限公司，批號為100302，100303，100306）；黃芪甲苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號為 110781－200613，供含量測定用）；水為超純水，乙腈為色譜純，正丁醇、氨水均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2．1 色譜條件

色譜柱：Kromasil C18柱（250 mm ×4．6 mm，5 μm），柱溫：30 ℃；流動相：乙腈 － 水 (32∶68)；流速：1．0 mL ／min；氣流速:2．8 mL ／min；漂移管溫度：105℃；進樣量：10 μL。理論板數(shù)按黃芪甲苷峰計算應(yīng)不低于4 000。

2．2 溶液制備

精密稱取黃芪甲苷對照品適量，加甲醇制成每1 mL含0．5 mg的溶液，即得對照品溶液。取樣品（批號為100302）約10 g研細，精密稱定，加甲醇50 mL，加熱回流1 h，濾過，用甲醇15 mL分3次洗滌濾渣及容器，合并濾液和洗滌液，水浴蒸干，殘渣加水20 mL，微熱使溶解，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用氯仿提取3次，每次20 mL，棄去氯仿液，水液用水飽和的正丁醇提取4次，每次15 mL，合并正丁醇液，用1%NaOH溶液洗滌3次，每次15 mL，棄去堿液，正丁醇液用正丁醇飽和的水洗滌2次，每次15 mL，棄去水液，蒸干，殘渣加甲醇使溶解，轉(zhuǎn)移至10 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。取陰性樣品10 g，同供試品溶液制備方法制成陰性對照品溶液。

2．3 方法學(xué)考察

陰性干擾試驗：按擬訂色譜條件，取2．2項下3種溶液，依法進樣測定。結(jié)果供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相同保留時間處有一致的色譜峰，陰性對照品溶液色譜則無此吸收峰，見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察：取質(zhì)量濃度為436 μg／mL的黃芪甲苷對照品溶液，按擬訂色譜條件分別進樣 1，2，5，10，15，20，25，30 μL，記錄色譜圖，計算峰面積，以峰面積的對數(shù)值與進樣量的對數(shù)值進行回歸，得回歸方程 Y＝1．379 X ＋5．961，r＝0．999（n＝8）。表明，黃芪甲苷進樣量在 0．436～13．080 μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗：精密吸取同一對照品溶液10 μL，連續(xù)進樣6次，測定峰面積積分值。結(jié)果平均峰面積為16 147 022，RSD為0．32% （n＝6），表明方法精密度良好。

穩(wěn)定性試驗：精密吸取同一供試品溶液，于制備后20 h內(nèi)進樣6次，記錄峰面積積分值。結(jié)果平均峰面積為2 068 456，RSD為1．06%（n＝6），表明供試品溶液在20 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗：取同一樣品(批號為100302）平行制備6份供試品溶液，按擬訂方法測定黃芪甲苷的含量，結(jié)果平均含量為0．193 1 mg／g，RSD 為 1．90%（n ＝6），表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗：取已知含量的香菊顆粒（批號為100302，每1 g含黃芪甲苷0．193 1 mg）樣品適量，研細，取約10 g，精密稱定，置具塞三角瓶中，精密吸取黃芪甲苷對照品溶液2 mL(質(zhì)量濃度為0．586 4 μg ／mL)，加入樣品，按供試品溶液制備方法制備待測溶液，依法進行含量測定，計算回收率。結(jié)果見表1。

表1 黃芪甲苷加樣回收試驗結(jié)果（n＝6）

2．4 樣品含量測定

取3批香菊顆粒樣品，依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件進樣測定含量。結(jié)果批號為100302，100303，100306的樣品每袋含黃芪甲苷 0．58，0．66，0．79 mg。

3 討論

考察供試品溶液的制備方法時，對原標(biāo)準(zhǔn)中的方法進行了驗證，將原標(biāo)準(zhǔn)中最終定容至2 mL改為定容至10 mL，更便于操作，使結(jié)果更準(zhǔn)確。

改用高效液相色譜法測定香菊顆粒中黃芪甲苷含量，結(jié)果含量均比原標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的每袋不少于0．05 mg高出數(shù)倍，建議將含量測定限度標(biāo)準(zhǔn)改為“每袋含黃芪以黃芪甲苷(C41H68O14)計，不得少于 0．15 mg” 。

參考文獻：

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