張 毅 ，黃 靜 ，郭盈杉

(1．河北省食品藥品檢驗院，河北 石家莊 050011； 2．河北省石家莊市藥品不良反應(yīng)監(jiān)測中心，河北 石家莊 050031)

尿素乳膏為皮膚外用藥，曾用名治裂膏，主要成分為尿素，化學(xué)名為碳酰二胺，主要用于治療魚鱗病、手足皸裂、皸裂性濕疹、老年皮膚瘙癢及掌趾角化癥[1]。該品種質(zhì)量標準收載于2010年版《中國藥典（二部）》[2]，含量測定方法采用顯色后紫外－可見分光光度法。也有文獻報道，采用紫外－可見分光光度法測定尿素乳膏醫(yī)院制劑中尿素的含量[3]。但該方法準確度不高，測定結(jié)果受顯色劑影響較大，使用不同供應(yīng)商提供的對二甲氨基苯甲醛配制顯色劑，空白基質(zhì)的吸光度有很大差別；測定時對供試品溶液放置時間的要求高，測定結(jié)果重現(xiàn)性差。而采用凱式定氮法測定尿素的含量[4]，操作煩瑣，專屬性差。為此，筆者擬建立專屬性強、靈敏度高、重復(fù)性好、操作簡便的高效液相色譜（HPLC）法，用于測定尿素乳膏的含量。

提高微電子技術(shù)是加強綜合國力的重要手段。未來的科技大都離不開微電子技術(shù)，就像現(xiàn)在的生活也離不開微電子技術(shù)一樣，所以發(fā)展微電子技術(shù)是當前科學(xué)界的主流。我們應(yīng)當秉持著堅持不懈的精神，繼續(xù)探索研發(fā)微電子技術(shù)，不斷縮小我國與世界上發(fā)達國家的差距，最終實現(xiàn)我國和世界先進的微電子技術(shù)完美接軌，讓我國走在世界的前列。

1 儀器與試藥

LC2010CHT型高效液相色譜儀（日本島津），包括紫外檢測器、自動進樣器；TU－1901型雙光束紫外可見分光光度計（普析通用）。尿素對照品（USP對照品）；尿素乳膏（含10%尿素，由各生產(chǎn)企業(yè)提供）；空白輔料（按最大處方量自行配置）；對二甲氨基苯甲醛（北京化工廠，批號為920404）；乙腈、甲醇為色譜純，水為去離子水，其他試劑均為分析純。

夜色被時光的流水漂洗凈了，風(fēng)影又開始敲木魚了。木魚的眼睛醒著，一記一記的聲音十分清脆。他正敲著，一根毛辣子蟲掉了下來，不偏不倚地落在他的后頸上，頓感癢癢起來，他便用手朝后頸撓了一下，不料越撓越癢，皮膚都紅腫了一大片。

2 方法與結(jié)果

2．1 色譜條件

色譜柱：月旭 Ultimate XB －NH2柱（200 mm ×4．6 mm，5 μm）；流動相：乙腈－甲醇－10%磷酸調(diào) pH至3．6的水溶液（90∶7∶3）；檢測波長：200 nm；柱溫：30 ℃；流速：0．8 mL ／min；進樣量：20 μL。

2．2 溶液制備

取樣品適量（約相當于100 mg尿素），置100 mL容量瓶中，加流動相適量，水浴加熱使尿素溶解，放冷至室溫，加流動相稀釋至刻度，搖勻，置冰浴中冷卻，濾過，濾液為供試品溶液。按處方量稱取空白基質(zhì)適量，同法制備陰性對照品溶液。稱取尿素對照品10 mg，精密稱定，置10 mL容量瓶中，加流動相振搖使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。

2．3 方法學(xué)考察

重復(fù)性試驗：取批號為100704的樣品，依法制備6份供試品溶液，精密量取20 μL，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標法計算含量。結(jié)果的 RSD為0．48%（n＝6）。

圖1 高效液相色譜圖

作為平衡所涉不同利益的有用工具，在投資條約中列入文化例外或沖突條款，在實踐中已有先例。例如，2005年5月28日，文萊、智利、新西蘭、新加坡四國簽訂了《跨太平洋戰(zhàn)略經(jīng)濟伙伴關(guān)系協(xié)議》(以下簡稱TPSEP)，建立自由貿(mào)易區(qū)，成員之間彼此承諾在貨物貿(mào)易、服務(wù)貿(mào)易、知識產(chǎn)權(quán)以及投資等領(lǐng)域相互給予優(yōu)惠并加強合作。TPSEP認識到有必要促進旨在保護有關(guān)國家文化遺產(chǎn)的文化政策，該協(xié)議中規(guī)定了針對文化方面的一般例外的情況，包括有形財產(chǎn)(考古和歷史遺址)及其無形財產(chǎn)(創(chuàng)造性藝術(shù))，目的在于保護具有歷史或考古價值的物品或特定地點。

線性關(guān)系考察：稱取尿素對照品約100 mg，精密稱定，置10 mL容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻。精密量取 0．1，0．5，1．0，1．5，2．0 mL，分別置 10 mL 容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻。分別精密量取20 μL，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，以進樣量(μg，X）為橫坐標、峰面積(Y)為縱坐標繪制標準曲線，得回歸方程 Y＝531 678 X－430 097，r＝0．999 5（n＝5）。結(jié)果表明，尿素進樣量在2～40 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

在野外作業(yè)一天，實在太疲勞了，再加上一天只吃了一頓冷飯，個個都渴望吃頓可口的飯菜，洗個澡，然后美美地睡一覺?？墒枪さ厣?，質(zhì)量檢查小組這時還在認真地逐段檢查。他們突然發(fā)現(xiàn)，由于工序銜接不好，有一處防腐接頭沒有進行膠帶纏繞就下溝埋土了，必須挖土返工。

精密度試驗：稱取尿素對照品約10 mg，精密稱定，置10 mL容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，精密量取20 μL，連續(xù)進樣6次，記錄色譜圖，測定尿素峰面積。結(jié)果的 RSD為0．42%（n＝6）。

穩(wěn)定性試驗：稱取尿素對照品約10 mg，精密稱定，置10 mL容量瓶中，加流動相稀釋至刻度并搖勻，室溫分別放置1，2，4，6，8 h，精密量取20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果尿素峰面積平均值為 1 138 225，RSD 為 0．78%（n＝5）。

專屬性試驗：分別吸取 2．2項下 3種溶液各 20 μL，按擬訂色譜條件進樣測定，記錄色譜圖，見圖1?？梢姡o料不干擾主成分尿素的含量測定。

通過合理設(shè)置辦公輔助區(qū)，能夠緩解醫(yī)患人員的工作壓力，空間使用率較高。醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心中的辦公輔助區(qū)主要包括值班室、辦公室、計算機、休息室與衛(wèi)生間等，設(shè)計人員可以根據(jù)其他功能區(qū)的設(shè)置情況，將辦公輔助區(qū)與功能區(qū)進行合理連接。

10月19日，，該項目總投入為170億元，計劃于2020年建成投產(chǎn)，規(guī)劃年產(chǎn)能30萬輛。上汽大眾新能源工廠占地面積40.56萬m2，是大眾汽車全球首個專門生產(chǎn)MEB平臺純電動車型工廠。新工廠將結(jié)合工業(yè)4.0的理念，采用最新的生產(chǎn)和自動化技術(shù)，大幅提升效率和勞動生產(chǎn)率。在自動化方面，新工廠將采用超過1?400多臺工業(yè)機器人，其中車身車間擁有約1?000臺機器人。

表1 尿素回收率試驗結(jié)果（n＝9）

2．4 樣品含量測定

共收集樣品128批，涉及生產(chǎn)企業(yè)10家，依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件，測定含量，并與現(xiàn)行標準2010年版《中國藥典（二部）》中方法比較。選取批數(shù)較多的5家生產(chǎn)企業(yè)各3批產(chǎn)品列出檢驗結(jié)果，見表2；120批樣品數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析見表3。結(jié)果表明，HPLC法與藥典方法的含量測定結(jié)果有顯著性差異。

表2 HPLC法與藥典方法樣品含量測定結(jié)果比較（標示量的%）

表3 樣品含量測定結(jié)果成對雙樣本 t－檢驗（a＝0．05）

項目平均值方差觀測值泊松相關(guān)系數(shù)假設(shè)平均差df t Stat P(T＜＝t)單尾t單尾臨界P(T＜＝t)雙尾t雙尾臨界藥典方法0．974 05 0．001 566 703 120 0．727 277 157 0 119 7．628 515 208 3．230 31E －12 1．657 759 285 6．460 62E －12 1．980 099 853 HPLC法0．955 117 0．000 768 120

3 討論

以流動相作溶劑，在200～400 nm波長范圍內(nèi)測定了尿素對照品的紫外光譜圖。結(jié)果尿素在196 nm波長處有最大吸收，因此選擇200 nm為檢測波長。

流動相的選擇試驗中，流動相A參照第33版美國藥典中C13尿素原料含量測定方法的乙腈－甲醇－水（89∶10∶1），尿素峰形不對稱，拖尾嚴重；流動相B為乙腈－甲醇－0．01 moL／L磷酸二氫銨溶液（89∶10∶1），尿素峰形有所改善，但仍有拖尾現(xiàn)象；流動相 C為乙腈 －甲醇 －10%磷酸調(diào) pH至 3．6的 0．01 moL／L磷酸二氫銨溶液（89∶10∶1），尿素峰形對稱，分離度良好，保留時間適中；流動相 D為乙腈 －甲醇 －10%磷酸調(diào) pH至 3．6的水溶液（90∶7∶3），尿素峰形對稱，分離度良好，保留時間適中?？紤]到鹽在大量有機溶劑中容易析出，選擇流動相D進行試驗。

流動相pH對尿素的保留時間、峰形影響較大。隨著pH減小，主峰保留時間變短，峰形改善，分離度增加；但pH太低會影響色譜柱壽命，當pH＝3．6時，保留時間適當，峰形對稱，分離度能達到要求。

溶劑的選擇時，曾以乙醇和流動相作為溶劑分別進行試驗，尿素在這2種溶劑中的溶解性都比較好。考慮到尿素的檢測波長為200 nm，為末端吸收，且乙醇在末端有較大吸收，而流動相90%為乙腈，短波長溶劑吸收干擾小，因此選擇流動相作為溶劑。

最低檢測限確定：稱取尿素對照品約10 mg，精密稱定，置10 mL容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻。吸取上述溶液適量，用流動相逐級稀釋，依法進樣。按3倍信噪比計算，尿素的最低檢測限為 0．04 μg。

回收率試驗：稱取空白輔料約900 mg，共9份，分別置100 mL容量瓶中，分別加入尿素對照品約80，100，120 mg各3份，加流動相，按供試品溶液制備方法處理，精密量取20 μL，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，計算回收率。結(jié)果見表1。

柱溫對尿素的峰形、保留時間影響不大，但考慮到環(huán)境溫度的變化可能造成的影響，故選擇柱溫為30℃。

本試驗結(jié)果顯示，HPLC法與現(xiàn)行標準2010年版《中國藥典（二部）》中紫外法的含量測定結(jié)果有顯著性差異，前者明顯偏低，說明紫外法的含量測定結(jié)果受到了輔料的干擾，不能準確反映藥品的實際質(zhì)量，修訂后的含量測定方法更科學(xué)、有效和可控。

參考文獻：

[1]林慧萍，鄒慧龍，梁曉美．4種醫(yī)院制劑穩(wěn)定性考察[J]．中國藥業(yè)，2011，20（2）：51 － 52．

根據(jù)形勢任務(wù)的需要，結(jié)合轄區(qū)地理位置和氣候條件，密切關(guān)注轄區(qū)社會動態(tài)，按照“組織健全，訓(xùn)練有素，規(guī)模適當，反應(yīng)迅速”的要求，建立民兵應(yīng)急隊伍，提升應(yīng)急分隊“平時服務(wù)、急時應(yīng)急、戰(zhàn)時應(yīng)戰(zhàn)”的能力。針對“人員分散集中難、外出務(wù)工在位少、崗位職責(zé)協(xié)調(diào)難”等現(xiàn)實問題，按照“專業(yè)對口、因地制宜、就地取材、就近支援”的原則，及時調(diào)整優(yōu)化結(jié)構(gòu)，確保配齊建強應(yīng)急隊伍。

[2]國家藥典委員會．中華人民共和國藥典（二部）[M]．北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2010：379．

[3]劉 煒，孫 穎，曾蔚欣，紫外分光光度法測定尿素乳膏中尿素的含量[J]．天津藥學(xué)，2011，23（6）：20 －21．

[4]GB／T 2441．1－2008，尿素的測定方法第一部分：總氮含量[S]．