李金花，劉 恒

（哈藥集團藥物研究院，黑龍江 哈爾濱 150020）

筆者在本試驗中建立了正相高效液相色譜法測定奧沙利鉑相關雜質左旋異構體含量的方法。

1 儀器與試藥

Waters e2695型高效液相色譜儀。注射用奧沙利鉑(哈藥集團生物工程有限公司，批號為 20110901，20110902，20110903)；奧沙利鉑對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號為100584-200902)；奧沙利鉑左旋異構體對照品（European Pharmacopoeia Reference Standard，批號為 2.1）；甲醇、乙醇為色譜純，水為重蒸純化水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：手性色譜柱（Chiralcel-OC-H，日本Daicel化學工業(yè)公司，填料為甲氨酸酯纖維素衍生化合物吸附硅膠(250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：甲醇 - 乙醇（70 ∶30）；檢測波長：254 nm；柱溫：40 ℃ ；流速：0.3 mL /min。

2.2 專屬性試驗

精密量取奧沙利鉑對照品、奧沙利鉑左旋異構體適量，加甲醇溶解并制成一定質量濃度的混合對照品溶液，另取乳糖適量，加甲醇制成一定質量濃度的輔料溶液即空白對照溶液。分別取混合對照品溶液和空白對照溶液各20 μL注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。結果在擬訂色譜條件下，輔料對雜質D檢測無干擾，檢測方法專屬性強，分離度好。色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2.3 方法學考察

線性關系考察：配制含奧沙利鉑左旋異構體限度濃度（0.1%）的40%，60%，80%，100%，120%的溶液5份。按擬訂色譜條件，取上述各溶液20 μL，分別注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，以質量濃度（C,μg/mL）為橫坐標、峰高（A，μv）為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程 A＝540 C-3.4(r＝0.999 2)。結果表明，本品質量濃度在0.24～0.72 μg/mL范圍內與峰面積線性關系良好。

回收率試驗：配制相對于左旋異構體（雜質D）限度濃度（0.1%)的 80%，100%，120%3個低、中、高不同濃度的奧沙利鉑對照品溶液各3份，各精密量取20 μL，分別注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，計算平均回收率，結果見表1。

精密度試驗：取加入一定量左旋異構體的供試品溶液，分別由2個分析人員使用不同儀器進行測試。結果平均含量分別為0.118%(RSD 為 2.0%)及 0.113%(RSD 為 2.1%)。

穩(wěn)定性試驗：取本品5瓶加甲醇溶解并迅速轉移至100 mL容量瓶中，并用甲醇稀釋至刻度，放置10 min后，精密量取上清液6 mL置25 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度,搖勻，避光存放，于0，2，4，6，8 h時進樣，以雜質 D的峰高來考查溶液的穩(wěn)定性。結果表明，注射用奧沙利鉑供試品溶液非常穩(wěn)定，在8 h內無雜質D生成。

最低檢出限：在擬訂色譜條件下，當質量濃度為0.15 μg/mL，進樣量為 20 μL時，S/N＞3，即奧沙利鉑左旋異構體的最低檢出限為 3.75 ng。

表1 雜質D回收率試驗結果(n＝9)

2.4 樣品中左旋異構體的含量測定

取本品適量，加甲醇溶解并制成每1 mL含0.6 mg的溶液，作為供試品溶液；另取奧沙利鉑對照品及左旋異構體對照品適量，加甲醇溶解并稀釋成每1 mL含奧沙利鉑0.6 mg、每1 mL含左旋異構體0.3 μg的溶液，搖勻，作為對照品溶液。精密量取供試品溶液和對照品溶液各20 μL分別進樣。結果均未檢出雜質左旋異構體。

3 討論

奧沙利鉑是繼順鉑、卡鉑之后的第3代新型鉑類抗癌藥物，用于進展期結腸癌、直腸癌一線治療。其注射劑——注射用奧沙利鉑，由于療效確切、不良反應較小而被廣泛應用[1]。為了保證產品質量及臨床用藥安全，特對其質量標準中的相關雜質左旋異構體進行了檢測方法研究，并進行了嚴格控制。由于左旋異構體結構與奧沙利鉑結構相近，采用反相高效液相色譜法很難分離，故確定采用正相系統(tǒng)建立檢測方法。經全波長掃描，本雜質在254 nm波長處有最大吸收，故選用254 nm作為測定波長。確定的檢測方法準確、簡便、快速，無輔料干擾，適用于注射用奧沙利鉑制劑中雜質D的檢測。

參考文獻：

[1]王燕莉，邱日想，蔡曄芬，等.奧沙利鉑的藥理作用與臨床應用研究[J].北方藥學，2012，9(12)：19-20.