摘要： 陰道真菌多為白色假絲酵母菌，偶見(jiàn)陰道纖毛菌、放線菌等，使人類(lèi)致病者85％為白色念珠菌。陰道念珠菌病的診斷要結(jié)合典型癥狀和體征及真菌學(xué)檢查。培養(yǎng)和鏡檢的敏感性和可靠性不同，前者達(dá)90％，后者僅為40％，涂片應(yīng)取陰道后壁的分泌物(如有菌絲中可確診為感染而非帶菌)。

關(guān)鍵詞： 念珠菌；檢測(cè)方法；質(zhì)量控制 【中圖分類(lèi)號(hào)】R446 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B 【文章編號(hào)】1672-8602(2014)03-0213-01

念珠菌病是由念珠菌引起的一種最常見(jiàn)的真菌病。最常見(jiàn)的致病菌為白色念珠菌，常存在于正常人的口腔、皮膚、陰道和消化道內(nèi)，因此念珠菌病多為內(nèi)源性感染，屬條件致病菌。陰道真菌有時(shí)在陰道中存在而無(wú)害，但在陰道抵抗力減低時(shí)容易發(fā)病，真菌性陰道炎以找到真菌為診斷依據(jù)。陰道真菌多為白色假絲酵母菌，偶見(jiàn)陰道纖毛菌、放線菌等，使人類(lèi)致病者85％為白色念珠菌。

1 臨床資料

2012年6月～2013年6月選取60例婦科門(mén)診送檢的陰道分泌物，患者年齡最小18歲，最大53歲，平均年齡38歲。

2 檢測(cè)方法

2.1 采集:陰道標(biāo)本采集前24小時(shí)，禁止性交、盆浴、陰道檢查、陰道灌洗及局部上藥等，以免影響檢查結(jié)果。取材所用消毒的刮板、吸管或棉拭子必須清潔干燥，不粘有任何化學(xué)藥品或潤(rùn)滑劑。陰道窺器插入前必要時(shí)可用少許生理鹽水濕潤(rùn)。根據(jù)不同的檢查目的可自不同部位取材。一般采用鹽水浸濕的棉拭子自陰道深部或陰道后部、宮頸管口等處取材，制備成生理鹽水涂片以觀察陰道分泌物[1]。用生理鹽水懸滴可檢查滴蟲(chóng)，涂制成薄片以95％乙醇固定，經(jīng)過(guò)巴氏染色、姬姆薩染色或革蘭染色，進(jìn)行腫瘤細(xì)胞篩查或病原微生物檢查。

2.2 濕片檢查:同陰道滴蟲(chóng)檢查。必要時(shí)于涂片上加1滴2.5mol／L KOH溶液，混勻并加蓋玻片，低倍鏡下可見(jiàn)到白色假絲酵母菌的卵圓形孢子和假菌絲，再用高倍鏡確認(rèn)。高倍鏡下查見(jiàn)單個(gè)或成群呈卵圓形、無(wú)色透明的孢子，常為芽生或多個(gè)連成鏈狀、分枝狀，即可報(bào)告\"查到真菌\"。如取陰道分泌物涂片并進(jìn)行革蘭染色后油鏡觀察，可見(jiàn)到卵圓形革蘭陽(yáng)性孢子或與出芽細(xì)胞相連接的假菌絲，呈鏈狀及分枝狀。本法簡(jiǎn)便易行，是目前臨床上最常用的方法。

2.3 濃集法檢查:取標(biāo)本于清潔干燥試管內(nèi)，加2.5mol／L NaOH溶液約1ml，混勻后置37℃水浴中3～5min，取出低速離心5min，取沉淀物作涂片鏡檢，可提高陽(yáng)性檢出率。

2.4 培養(yǎng)法:將分泌物接種于真菌培養(yǎng)基(如沙保弱培養(yǎng)基)進(jìn)行分離培養(yǎng)，根據(jù)培養(yǎng)特征、形態(tài)，以及菌落涂片鏡下見(jiàn)到的假菌絲和芽生孢子進(jìn)行診斷。本法陽(yáng)性率高，可分離出感染的菌株，但操作復(fù)雜、費(fèi)時(shí)，臨床應(yīng)用較少。

3 培養(yǎng)與鑒定

在沙氏培養(yǎng)基上生長(zhǎng)情況，于25℃或37℃培養(yǎng)都能生長(zhǎng)，呈閃光、軟而平滑、高出培養(yǎng)基表面、奶油色、酵母樣菌落。陳舊的菌落顏色發(fā)深，逐漸變硬，并有皺褶，中央可見(jiàn)氣泡，沒(méi)有氣中菌絲，營(yíng)養(yǎng)菌絲豐富。鏡檢有假菌絲和大量芽生孢子。在葡萄糖蛋白胨液體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)情況：于37℃培養(yǎng)48h，白色念珠菌呈管底生長(zhǎng)，無(wú)菌膜。在血清培養(yǎng)基上生長(zhǎng)情況：將純培養(yǎng)的念珠菌接種到0.5ml～1.0ml正常人或羊血清中，于37℃孵育0.5～3h，白色念珠菌產(chǎn)生芽管，芽管長(zhǎng)為細(xì)胞的3～4倍，末端的寬度為細(xì)胞的1／2[2]。在玉米吐溫－80瓊脂培養(yǎng)基上生長(zhǎng)情況：于25℃孵育24h，白色念珠菌形成許多樹(shù)枝狀菌絲及頂端厚壁孢子。在葡萄糖蛋白胨瓊脂中加入0.005％氯化三苯基四氮唑(TZC)，白色念珠菌不變色或僅呈淡紅色，其他念珠菌或酵母菌變?yōu)榧t色，熱帶念珠菌最為明顯，呈深紅色或紫色。用生理鹽水制成待檢菌懸液，加于無(wú)碳源的培養(yǎng)基中，混勻，倒入平皿內(nèi)，凝固備用。在平皿培養(yǎng)基中貼附各種碳源的濾紙片(直徑6mm濾紙片，滅菌后吸入10％碳源溶液，放37℃溫箱蒸干)，置25℃～28℃培養(yǎng)兩天觀察結(jié)果。凡能同化者，在相應(yīng)的碳源周?chē)梢?jiàn)有一明顯生長(zhǎng)圈。

4 質(zhì)量控制

陰道分泌物檢查，是女性泌尿生殖系統(tǒng)疾病診斷常做的檢查。主要為各種陰道炎、性傳播疾病等的診斷提供重要依據(jù)。因此，應(yīng)把好標(biāo)本的采集送檢關(guān)，嚴(yán)格控制質(zhì)量，保證結(jié)果的準(zhǔn)確性。熟練掌握濕涂片中出現(xiàn)的正常和異常成分的形態(tài)及數(shù)量變化的意義，如紅細(xì)胞、成堆的白細(xì)胞、真菌和陰道滴蟲(chóng)等在高倍視野的形態(tài)變化特征，以高倍視野報(bào)告結(jié)果，報(bào)告應(yīng)力求準(zhǔn)確可靠。取陰道分泌物時(shí)應(yīng)停外用藥2～3d，以提高陽(yáng)性檢出率。如所用玻璃器材應(yīng)干凈；涂片做到取材統(tǒng)一或定量，檢查及時(shí)，觀察標(biāo)準(zhǔn)一致，掌握好方法學(xué)的各個(gè)環(huán)節(jié)，注意復(fù)查；報(bào)告方式要力求一致，嚴(yán)格控制各種影響因素[3]。因陰道分泌物檢查工作量較大，濕涂片檢查因標(biāo)本不易保存，易污染，送檢不方便等，可將陰道分泌物涂片進(jìn)行瑞－吉或亞甲藍(lán)染色處理，既可用于檢查滴蟲(chóng)、真菌、淋球菌、核異質(zhì)細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞及線索細(xì)胞，判定清潔度，還可將涂片較長(zhǎng)時(shí)間存放，便于復(fù)查監(jiān)督而進(jìn)行質(zhì)量控制，建立室內(nèi)質(zhì)量控制制度。也可在較大范圍開(kāi)展室間質(zhì)量評(píng)價(jià)，以提高陰道疾病實(shí)驗(yàn)診斷的整體水平。

參考文獻(xiàn)

[1] 朱慧蘭， 谷進(jìn)， 李平，等. 外陰陰道念珠菌病的病原檢測(cè)及體外藥敏檢測(cè)［J］. 中國(guó)抗感染化療雜志， 2001， 3: 175～176.

[2] 張軍民， 席麗艷， 魯長(zhǎng)明，等. 醫(yī)院分離深部真菌菌株流行病學(xué)調(diào)查和藥敏試驗(yàn)研究［J］. 中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志， 2007， 30: 27～29.

[3] 李若瑜，王端禮.密切結(jié)合臨床，提高真菌學(xué)檢驗(yàn)水平.中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2003，9（9）:521-523.