摘要：目的 比較人參皂苷Rg3旋光異構(gòu)體即[20（S）-Rg3和20（R）-Rg3]對小鼠肝癌H22荷瘤小鼠抗氧化能力的影響。方法 通過建立肝癌H22實體瘤模型，腹腔連續(xù)給藥干預，檢測瘤重。利用試劑盒檢測其超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、黃嘌呤氧化酶（xanthine oxidase，XOD）和丙二醛（malondialdehyde，MDA）的含量。結(jié)果 20（S）-Rg3和20（R）-Rg3能顯著抑制肝癌H22實體瘤的生長，抑瘤率分別為23.6%和40.9%，增強肝癌小鼠SOD活性（P<0.05），降低肝癌小鼠XOD活性和MDA含量（P<0.05）。結(jié)論 Rg3改善機體內(nèi)抗氧化能力，具有抗腫瘤作用，且20（R）-Rg3的抗腫瘤和抗氧化作用優(yōu)于其異構(gòu)體20（S）-Rg3。

關鍵詞：人參皂苷Rg3；抗氧化；肝癌H22細胞

人參是傳統(tǒng)的名貴中草藥，在東方國家被廣泛用于醫(yī)療保健，被譽為\"百草之王\"。人參皂苷是人參的主要活性成分，如人參皂苷Rb1、Rb2和Rg3等[1]。其中人參皂苷Rg3屬原人參二醇型皂苷，其存在兩種同分異構(gòu)體，即20（S）-Rg3和20（R）-Rg3[2]，它們的生物學活性存在差異。目前，研究表明它們對內(nèi)皮細胞凋亡[3]、免疫佐劑作用[4]的影響存在明顯的差異。但有關它們對荷瘤小鼠抗氧化作用的比較研究尚未見報道，這影響了人參臨床應用的療效。因此，本文擬建立肝癌H22實體瘤動物模型，系統(tǒng)地比較研究它們對腫瘤生長和抗氧化能力的影響，并探討其抗腫瘤作用的機制，為人參皂苷Rg3在臨床中的應用提供實驗和理論基礎。

1資料與方法

1.1一般資料

1.1.1實驗動物 SPF級KM小鼠40只，雌雄各半，體重18～22g，由湖北省實驗動物研究中心提供。由江漢大學動物實驗中心提供SPF級飼養(yǎng)環(huán)境，溫度為24±1°C，濕度為50±10%，自由飲水采食。

1.1.2試劑與耗材 肝癌H22細胞購于武漢大學動物實驗中心；20（S）-Rg3和20（R）-Rg3購于中國食品藥品檢定研究院，純度>98%；SOD試劑盒、MDA試劑盒、XOD試劑盒購于南京建成生物工程研究所；其他試劑均為分析純。

1.2方法

1.2.1構(gòu)建實體瘤小鼠模型 斷頸椎處死兩只肝癌H22腹水瘤種鼠，無菌條件下取腹水瘤細胞并稀釋1×106個/ml，各小鼠右腋下皮下接種0.2ml細胞懸液，即可建立肝癌H22小鼠移植瘤模型。

1.2.2實驗動物的分組與給藥 30只實驗小鼠皮下接種后，隨機分為3組（n=10）：模型對照組、20（R）-Rg3組、20（S）-Rg3組；另取10只正常小鼠設為正常對照組。24h后，正常對照組和模型對照組腹腔注射等量的生理鹽水（0.2ml/10g/d BW），20（R）-Rg3組和20（S）-Rg3組腹腔注射20（R）-Rg3或20（S）-Rg3（0.3mg/kg/d BW）。連續(xù)給藥10d后，所有實驗鼠稱重，頸椎脫臼處死。剝?nèi)∑は聦嶓w瘤稱重，稱重后分別按以下公式計算抑瘤率：

抑瘤率=[（對照組平均瘤重-給藥組平均瘤重）/對照組平均瘤重]×100%

1.2.3SOD的測定 嚴格按SOD試劑盒說明書進行操作，OD550nm測吸光度值，按照以下公式計算SOD活力。

組織勻漿中SOD的活力：

SOD抑制率（%）=A對照-A對照空白-（A測定-A測定空白）（A對照-A對照空白）×100%

總SOD活力（U/mgprot）=SOD抑制率×反應體系稀釋倍數(shù)（0.24ml）（0.02ml）÷待測樣本蛋白濃度（mgprot/ml）

1.2.4XOD的測定 嚴格按XOD測定試劑盒說明書進行操作，OD530nm測吸光度值，按照以下公式計算XOD活性。

組織勻漿中XOD的活性：

組織中XOD活性（U/gprot）=ODU-ODB12.6×10-3×N×1c×t÷Cprot

1.2.5MDA的測定 嚴格按MDA測定試劑盒說明書進行操作，OD532nm測吸光度值，按照以下公式計算MDA含量。

組織中MDA的含量：

組織中MDA含量（nmol/mgprot）=測定OD值-對照OD值標準OD值-空白OD值×標準品濃度（10nmol/ml）÷待測樣本蛋白濃度（mgprot/ml）

2數(shù)據(jù)統(tǒng)計

實驗數(shù)據(jù)采用統(tǒng)計軟件SPSS 19.0進行獨立樣本t檢驗方法進行組間比較，數(shù)據(jù)以平均值士標準誤（x±s）表示，P<0.05為有統(tǒng)計學意義。

3結(jié)果

3.1Rg3對腫瘤生長的影響 由表1所知，Rg3對肝癌H22瘤的生長有顯著的抑制作用，且20（R）-Rg3的作用效果明顯優(yōu)于20（S）-Rg3。

3.2 Rg3對小鼠SOD活性的影響 圖1顯示，與正常組相比，模型組小鼠SOD活性明顯降低（P<0.05）。與模型組相比較，Rg3組的小鼠SOD活性均明顯增強（P<0.05）。與20（S）-Rg3組小鼠比較，20（R）-Rg3組的小鼠SOD活性更高（P<0.05）。

※表示與正常對照組有顯著性差異（P<0.05）。

3.3 Rg3對小鼠XOD活性的影響 與正常組相比，模型組小鼠XOD的活性明顯升高（P<0.05）。與模型組相比較，Rg3組小鼠XOD含量均明顯下降（P<0.05）；與20（S）-Rg3組小鼠比較，20（R）-Rg3組小鼠XOD含量顯著降低（P<0.05）。

3.4 Rg3對小鼠MDA含量的影響 與正常組相比較，模型組小鼠MDA的含量顯著升高（P<0.05）。與模型組相比較，Rg3組的小鼠MDA水平均明顯下降（P<0.05）；與20（S）-Rg3組小鼠比較，20（R）-Rg3組的小鼠XOD含量顯著降低（P<0.05）。

4討論

研究證實，機體內(nèi)抗氧化能力與腫瘤的關系甚為密切[5]。機體抗氧能力過低，氧自由基增多，引起細胞的損傷，導致細胞癌變，而腫瘤的發(fā)生可激發(fā)產(chǎn)生大量的自由基，使細胞內(nèi)相關酶活性降低，造成機體免疫機能降低。

研究表明，許多中草藥可通過清除自由基，抑制脂質(zhì)過氧化發(fā)揮抗氧化功效[6]，本研究探討了人參皂苷Rg3對H22荷瘤小鼠的抗氧化作用。結(jié)果顯示，Rg3可顯著抑制肝癌H22實體瘤的生長，增強免疫器官中SOD活性，降低小鼠免疫器官XOD和MDA水平，表明Rg3具有一定的腫瘤活性和抗氧化活性。

MDA是機體在代謝過程中自由基引發(fā)的脂質(zhì)過氧化反應的終產(chǎn)物之一，對細胞有毒性。研究報道，腫瘤的生長可引起過強的細胞膜脂質(zhì)過氧化反應，導致體內(nèi)活性氧及脂質(zhì)過氧化物（如MDA）大量堆積[9]。本研究結(jié)果顯示，荷瘤小鼠MDA水平顯著升高，而連續(xù)給藥Rg3后的荷瘤小鼠MDA含量明顯減少。說明Rg3可能通過清除或降低體內(nèi)MDA的含量，從而保護機體器官和細胞不受其損害。

綜上所述，Rg3在一定程度上能抑制腫瘤的生長和提高機體的抗氧化能力，且20（R）-Rg3的抗腫瘤和抗氧化活性優(yōu)于20（S）-Rg3。因此，在臨床上應用Rg3作為治療藥或輔助藥，20（R）-Rg3的效果可能更佳。然而，Rg3具有抑制肝癌H22荷瘤小鼠實體瘤生長的作用，這可能是與其提高荷瘤小鼠免疫器官組織內(nèi)抗氧化酶活性和自由基清除能力有關，但其具體作用機制還有待進一步研究。

參考文獻：

[1]周超群，周珮.人參皂苷Rd的研究進展[J].中草藥，2009，40（5）：832-836.

[2]Chang KH，Jee HS，Lee NK，et al.Optimization of the enzymatic production of 20（S）-ginsenoside Rg3 from white ginseng extract using response surface methodology[J].N Biotechnol，2009，26（3-4）：181-186.

[3]Min JK，Kim JH，Cho YL，et al.20（S）-ginsenoside Rg3 prevents endothelial cell apoptosis via inhibition of a mitochondrial caspase pathway[J].Biochem Biophys Res Commun，2006，349（3）：987-994.

[4]Wei X，Chen J，Su F，et al.Stereospeci？city of ginsenoside Rg3 in promotion of the immune response to ovalbumin in mice[J].Int Immunol，2012，24（7）：465-471.

[5]Sen S，De B，Devanna N，et al.Total phenolic，total flavonoid content，and antioxidant capacity of the leaves of meyna spinosa roxb，an indian medicinal plant[J].Chin J Nat Med，2013，11（2）：149-157.

[6]Shirwaikar A，Patel B，Kamariya Y，et al.In vitro free radical scavenging potential of defatted ethanolic extract of the seeds of lepidium sativum linn[J].Chin J Nat Med，2011，9（6）：435-440.

[7]梁惠，劉穎，張士璀.文昌魚多糖對荷S180小鼠淋巴細胞增殖和抗氧化水平的影響[J].食品科學，2012，33（17）：249-253.

[8]梁惠，劉穎，張士璀.文昌魚多糖對荷S180小鼠淋巴細胞增殖和抗氧化水平的影響[J].食品科學，2012，33（17）：249-253.

[9]郭蘭，趙志宇，韓淑英.蕎麥花葉提取物抗氧化活性與抑瘤作用的實驗研究[J].中國實驗方劑學雜志，2012，18（23）：176-810.

編輯/申磊