摘要：目的 觀察新疆石榴皮生用與制用對(duì)急性腹瀉大腸濕熱證模型大鼠IL -1β、IL-6及腸道病理變化的影響。方法 將50只清潔級(jí)Wistar大鼠隨機(jī)分為空白組、模型組、治療1組、治療2組、對(duì)照組5組各10只。除空白組外，其余4組采用高糖高脂飲食、高溫高濕環(huán)境、番瀉葉水煎劑灌胃建立急性腹瀉大腸濕熱證模型。造模同時(shí)治療1組、2組及對(duì)照組分別予生石榴皮、制石榴皮煎液及思密達(dá)灌胃6d，觀察各組大鼠一般狀況，結(jié)腸回腸病理及IL-6（白介素-6）及IL -1β（白介素-1β）水平。結(jié)果 ①治療1組、治療2組及對(duì)照組較模型組大鼠大便成形、一般狀況改善；②模型組、治療2組IL-1β、IL-6含量顯著高于空白組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；治療1組、治療2組及對(duì)照組IL-1β、IL-6水平較模型組下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；③治療1組、2組較模型組腸道炎癥變化減輕，且治療1組改善效果更顯著。結(jié)論新疆石榴皮在改善急性腹瀉大腸濕熱證模型大鼠一般狀況，腸道炎癥反應(yīng)方面生用優(yōu)于制用；在降低IL -1β、IL-6水平方面，生用較制用指標(biāo)更接近空白組。

關(guān)鍵詞：急性腹瀉；大腸濕熱證；新疆石榴皮；實(shí)驗(yàn)研究

石榴皮為石榴干燥成熟的果皮，曬干生用或炮制炒用，其性溫、味酸澀，具有澀腸止瀉、止血、殺蟲之功效。研究發(fā)現(xiàn)石榴皮的主要成分是總多酚，新疆石榴皮總多酚含量高于內(nèi)地，在藥效學(xué)方面有不可替代的優(yōu)勢(shì) [1-2]。近年來研究報(bào)道針對(duì)急性腹瀉大腸濕熱證新疆石榴皮有較好的止瀉作用，為進(jìn)一步探討生用和制用療效及機(jī)理，進(jìn)行本次研究，具體內(nèi)容如下：

1 臨床資料

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及飼料 6～8w齡雌性Wistar大鼠50只，體重 160～200g。高糖高脂飼料為普通飼料加5%～10%的蜂蜜，12%豬油制成。（均由新疆醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供）

1. 2藥品 ①石榴皮（購自新疆維吾爾醫(yī)院），產(chǎn)地新疆。石榴皮的炒制及水煎液的制備均由新疆醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)室完成，制成1g/ml （即1mL含生藥1.0g）的藥液。②思密達(dá)（博福-益普生（天津）制藥有限公司生產(chǎn)，批準(zhǔn)文號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字H20000690）制成濃度為8%的混懸液。③番瀉葉參考文獻(xiàn)[3]制成0.3g/ml（即1mL含生藥0.3g）的藥液。

1.3試劑 IL-1β、IL-6酶聯(lián)免疫分析試劑盒購自武漢博士德生物有限公司。

1.4儀器 人工氣候箱SHH-500GS型、電子體重秤、低溫離心機(jī)KWS-MAE型、移液器、冰箱BCD-206型、BIO-RAD酶標(biāo)儀Xmark、智能型電熱恒溫培養(yǎng)箱、全自動(dòng)洗板機(jī)、超薄切片機(jī)、顯微鏡、照相機(jī)等。

2 方法

2.1 造模方法

2.1.1 實(shí)驗(yàn)分組及模型制備 參照李學(xué)、魏連波及周干南等[4]造模方法將50只清潔級(jí)Wistar大鼠，適應(yīng)性喂養(yǎng)3d后隨機(jī)分為空白組、模型組、治療1組、治療2組及對(duì)照組5組，每組10只。空白組予自然環(huán)境、普通飼料喂養(yǎng)，其余4組造模。造模過程如下：①高糖、高脂飼料飼養(yǎng)10d；②放置于高溫倉中（溫度為35℃，相對(duì)濕度85﹪）持續(xù)8h/d，連續(xù)3d；③予自然環(huán)境，普通飼料喂養(yǎng)1d后自由飲水，禁食10h予番瀉葉水煎劑0.3g/ml， 1.0 mL/100g/d灌胃。

2. 1.2給藥方法 造模成功后，治療1組、2組、對(duì)照組及模型組上午定時(shí)予番瀉葉煎劑（0.3g/ml），1.0 mL/100g/d灌胃，1次/d，下午分別予生石榴皮煎劑（1g/ml）、制石榴皮煎劑（1g/ml） 、思密達(dá)混懸液（濃度為8%）1.0 mL/100g/d及等量蒸餾水灌胃，1次/d，共6d。

2.2檢測(cè)方法

2.2.1一般狀況的觀察 觀察大鼠的精神、活動(dòng)、飲食水、毛發(fā)、肛周、糞便、體重等情況。

2.2.2血清IL-1β、IL-6測(cè)定 腹腔麻醉，取大鼠腹主動(dòng)脈血5 mL，離心取上清液 2 mL于- 20C冰箱儲(chǔ)存； IL-1β、IL-6均采用酶聯(lián)免疫分析法，由新疆醫(yī)科大學(xué)一附院免疫實(shí)驗(yàn)室協(xié)助檢測(cè)。

2.2.3結(jié)腸、回腸組織病理檢查（HE染色法） 取血后處死大鼠，切取結(jié)腸、回腸段各1cm，清水沖凈置于10%福爾馬林溶液浸泡24h以上固定，由新疆醫(yī)科大學(xué)病理實(shí)驗(yàn)室脫水、透明、浸蠟、切片、HE染色。顯微鏡下觀察染色情況并拍照。

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所有數(shù)據(jù)均采用SPSS？17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，以P<0.05表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，多組樣本比較單因素方差分析。

3 結(jié)果

3.1一般狀況觀察 造模鼠進(jìn)入高溫倉后，精神不振，拱背懶動(dòng)，食量減少，部分大鼠出現(xiàn)稀便；予番瀉葉水煎劑后大鼠精神萎靡、行動(dòng)緩慢、被毛蓬松泛黃、食欲不振、飲水少、肛周紅腫、便溏、便色黃褐性黏味臭、體重下降?？瞻捉M大鼠活躍，大便呈顆粒狀，無上述改變。治療1組、治療2組及對(duì)照組用藥后大鼠諸癥較前改善、便次減少成形、穢濁氣味減輕、活動(dòng)飲食水量增大、皮毛漸光澤、體重逐漸回升。治療2組個(gè)別大鼠見稍稀軟便。

3.2 5組大鼠IL-1β、IL-6含量測(cè)定見表1所示，①模型組、治療2組IL-1β、IL-6含量顯著高于空白組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.000，P<0.001）。②治療1組、2組及對(duì)照組IL-1β、IL-6水平較模型組下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.000，P<0.001）。

3.3結(jié)腸、回腸組織病理檢查結(jié)果

3.3.1 模型組腸粘膜充血、水腫、滲出，有大量炎細(xì)胞浸潤(rùn)，呈現(xiàn)急性炎癥反應(yīng)?？瞻捉M腸粘膜完好，細(xì)胞形態(tài)無異常。如圖1、2所示。

3.3.2治療1組腸黏膜完整，細(xì)胞形態(tài)無異常，炎癥明顯好轉(zhuǎn)。對(duì)照組腸粘膜完整，細(xì)胞形態(tài)無異常、炎癥明顯好轉(zhuǎn)。如圖3、4所示。

3.3.3治療2組粘膜仍可見充血，水腫、黏膜下可見炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；對(duì)照組腸粘膜完整，細(xì)胞形態(tài)無異常、炎癥明顯好轉(zhuǎn)。如圖5、6所示。

4 討論

本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)， 針對(duì)急性腹瀉大腸濕熱證模型大鼠的一般狀況、結(jié)腸、回腸炎癥改善方面，新疆石榴皮煎劑生用優(yōu)于制用，在降低調(diào)控因子IL-1β、IL-6水平方面，新疆石榴皮生用指標(biāo)更接近空白組。大腸濕熱證中醫(yī)辨證為熱證、實(shí)證，治用清熱利濕法，制石榴皮通過炒法加熱使藥性由溫變熱，其治療違背了中醫(yī)“熱者寒之”的治療原則。現(xiàn)代藥理研究石榴皮主要有效成分為鞣質(zhì)，其具有收斂性，內(nèi)服可治療泄瀉，加熱炮制后鞣質(zhì)含量顯著降低，生石榴皮鞣質(zhì)平均含量為13. 79%，制石榴皮碳鞣質(zhì)平均含量為5. 99%[5]。后期藥理實(shí)驗(yàn)結(jié)果亦表明本次實(shí)驗(yàn)中石榴皮生品有效成分含量高于制品。

目前研究證實(shí)大腸濕熱證的發(fā)生與機(jī)體的免疫和炎癥過程相關(guān)，細(xì)胞因子IL-1、IL-2、IL-6水平升高[6]及腸道急性炎癥變化可能是大腸濕熱證的客觀指標(biāo)。IL-1β介導(dǎo)了炎癥的重要過程，IL-6參與多種炎性疾病的病生過程在機(jī)體免疫反應(yīng)中起重要作用。故本次試驗(yàn)選用IL-1β、IL-6及大鼠腸道病理切片作為檢測(cè)指標(biāo)。通過新疆石榴皮煎液生用與制用治療對(duì)比研究，為新疆石榴皮治療急性腹瀉大腸濕熱證提供藥理依據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

[1]趙國(guó)平，戴慎，陳仁壽.中藥大辭典[M].2 版.上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，2006：301-302.

[2]陳孝娟，顧政一.不同產(chǎn)地的石榴總多酚的含量測(cè)定[J]，時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)，2011，22（53）：541-5.

[3]周干南，胡之華.小鼠腹瀉模型的制備與腹瀉指數(shù)的應(yīng)用[J].中草藥，1994，25（4）：195-199.

[4]李 學(xué)，魏連波等.中醫(yī)大腸濕熱證模型SD大鼠腸道的病理變化[J].河北中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2004，19（4） ：4-5.

[5]崔翠翠.張學(xué)蘭.李慧芬炮制對(duì)石榴皮中沒食子酸、鞣花酸和鞣質(zhì)含量的影響[J].中成藥，2010，32（4）：613-615.

[6]慕瀾，佟麗等.大腸濕熱證模型大鼠血清部分白細(xì)胞介素含量的變化[J].中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合消化雜志，2003，11（5）：262-263.

編輯/蘇小梅