摘要：目的 分析大石山區(qū)天等縣2013年超早期子宮頸癌篩查結(jié)果，探討宮頸脫落細(xì)胞DNA定量分析在宮頸癌篩查中的臨床價(jià)值。方法 對(duì)天等縣3766例婦女進(jìn)行篩查，同時(shí)行宮頸脫落細(xì)胞DNA定量分析及液基薄層細(xì)胞學(xué)（TCT）兩種方法篩查宮頸病變，將其篩查結(jié)果進(jìn)行比較分析。結(jié)果 液基薄層細(xì)胞學(xué)（TCT）檢查出陽(yáng)性病例共45例，通過(guò)陰道鏡活檢，查出陽(yáng)性病例共15例；DNA倍體分析技術(shù)查出130例，病理組織學(xué)診斷結(jié)果：慢性宮頸炎52例，CINⅠ24例，CINⅡ9例，CINⅢ 3例，兩組比較具備統(tǒng)計(jì)學(xué)差異P<0.05，具有可比性。結(jié)論 通過(guò)DNA定量分析技術(shù)對(duì)宮頸癌和癌前病變的檢出率較高，其檢查效果明顯優(yōu)于液基薄層細(xì)胞學(xué)（TCT），尤適用于大規(guī)模防癌普查。

關(guān)鍵詞：天等縣；DNA定量分析技術(shù)；宮頸癌；檢查

現(xiàn)如今宮頸癌的發(fā)病趨勢(shì)正越來(lái)越傾向于年輕化，對(duì)宮頸癌的防治便提出了更高的要求和標(biāo)準(zhǔn)。在臨床中使用有效的檢查方法，能夠提升宮頸癌和癌前病變的檢出率[1]。

1資料與方法

1.1一般資料 選取2013年8月～10月，自愿接受篩查的天等縣婦女共3766人次，年齡為20～65歲，同時(shí)行宮頸脫落細(xì)胞DNA定量分析技術(shù)及液基薄層細(xì)胞學(xué)制片技術(shù)（TCT）兩種方法。

1.2方法

1.2.1實(shí)驗(yàn)室設(shè)備 廈門(mén)麥克奧迪細(xì)胞DNA定量分析系統(tǒng)、離心機(jī)、點(diǎn)觸式混勻器、生化培養(yǎng)箱、凈水器、抽風(fēng)機(jī)、標(biāo)本瓶、宮頸刷、磁力加熱攪拌器、Feulgen染色劑、染色缸等。

1.2.2樣本采集 由婦科醫(yī)生將宮頸刷的刷頭插入宮頸口，朝一個(gè)方向旋轉(zhuǎn)3～5圈，力度要適中，避免用力過(guò)度導(dǎo)致出血。將刷頭拔下，浸沒(méi)在裝有固定液的標(biāo)本瓶里，擰緊瓶蓋，確保液體無(wú)滲漏，標(biāo)本瓶注明標(biāo)識(shí)，立即送檢，如不能及時(shí)送檢，應(yīng)在4冰箱保存。制片前的標(biāo)本常溫保存不超過(guò)2w，4℃保存不超過(guò)1個(gè)月。

1.2.3制片方法 將標(biāo)本瓶在點(diǎn)觸式混勻器上振蕩3～5s，緩緩向尖底離心管中倒入6ml左右的標(biāo)本溶液，離心管經(jīng)平衡后放入離心機(jī)以1500轉(zhuǎn)/min離心5min，逐個(gè)將離心管中的上清液倒出，并在濾紙上盡量吸盡管內(nèi)的殘余液體，針對(duì)每個(gè)標(biāo)本，觀察其離心管中細(xì)胞沉淀的大小不同，確定所需的稀釋體積，向相應(yīng)的離心管加入定量的蒸餾水，原則上稀釋體積為細(xì)胞沉淀體積的2.5～3倍。將離心管放在點(diǎn)觸式混勻器上振蕩3～5s，用吸管吸取適量細(xì)胞懸液，向用于DNA制片的圓底試管（加有細(xì)胞分散液100μL）中加入2滴細(xì)胞懸液，向用于TBS制片的圓底試管（加有細(xì)胞分散液100μL）中加入1滴細(xì)胞懸液。同時(shí)將2個(gè)圓底試管于混勻器上再次振蕩混勻3～5s，用吸管從用于DNA制片的試管中吸取適量的細(xì)胞懸液，于相應(yīng)預(yù)先用粘片劑處理的載玻片正上方約3～5cm處，垂直滴2滴細(xì)胞懸液至載玻片中心，完成DNA制片。然后吹出吸管內(nèi)的殘余液體，從用于TBS制片的試管中吸取適量的細(xì)胞懸液，按同樣的方式完成TBS制片。

1.2.4分級(jí)方法 TBS分類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)：①未見(jiàn)惡性細(xì)胞和上皮內(nèi)病變，②未明確意義的不典型鱗狀上皮細(xì)胞，③不典型鱗狀上皮細(xì)胞，④低度鱗狀上皮內(nèi)病變，⑤高度鱗狀上皮內(nèi)病變，⑥鱗狀細(xì)胞癌。

在生理狀態(tài)下，人體絕大多數(shù)的細(xì)胞處于靜止期，DNA含量相當(dāng)恒定。當(dāng)致癌因素作用于細(xì)胞早期，細(xì)胞核內(nèi)DNA結(jié)構(gòu)和含量發(fā)生改變，最終發(fā)展為細(xì)胞形態(tài)異常和惡性增殖。因此，細(xì)胞DNA定量分析系統(tǒng)可通過(guò)測(cè)量細(xì)胞核內(nèi)DNA含量的變化，在形態(tài)改變不明顯前即可檢測(cè)出那些病變細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)癌及癌前病變的早期診斷。正常細(xì)胞DNA指數(shù)值（DI）多為1，DNA指數(shù)值大于2.5為異常細(xì)胞。凡是有DNA指數(shù)ID>2.5的細(xì)胞，都要在顯微鏡下逐一進(jìn)行核實(shí)，以排除系統(tǒng)誤將垃圾及細(xì)胞核重疊認(rèn)為癌細(xì)胞或異常細(xì)胞[2]。DNA報(bào)告情況：①未見(jiàn)DNA倍體異常細(xì)胞，②可見(jiàn)少量細(xì)胞增生（5%～10%增生），③可見(jiàn)1～2個(gè)DNA倍體異常細(xì)胞（1～2個(gè)DI≥2.5），④可見(jiàn)細(xì)胞異常增生（≥10%增生），⑤可見(jiàn)3個(gè)及3個(gè)以上DNA倍體異常細(xì)胞（3個(gè)及3個(gè)以上個(gè)DI≥2.5），⑥可見(jiàn)異倍體細(xì)胞峰。其中，結(jié)果1代表檢測(cè)陰性，建議定期進(jìn)行正常篩查（2～3年）。②、③代表可疑或少量病變，建議4～6個(gè)月進(jìn)行復(fù)查，以便明確原因；④、⑤、⑥代表檢測(cè)陽(yáng)性，建議進(jìn)行陰道鏡檢查及活體組織檢查；⑦標(biāo)本不滿(mǎn)意（上皮細(xì)胞數(shù)不足1000個(gè)），1個(gè)月后復(fù)查（重新取材）。

1.2.5病理組織學(xué)分型 TBS異常和DNA定量檢測(cè)陽(yáng)性病例均進(jìn)一步按病理學(xué)要求進(jìn)行活檢采樣，送麥克奧迪公司進(jìn)一步做病理學(xué)檢查。宮頸活體組織學(xué)分為：①炎癥或正常；②CIN病變由輕至重分別為：CINI，CINII，CINIII；③宮頸癌。在所有分型中均為陽(yáng)①②性。

1.2.6兩種方法篩查的陽(yáng)性率對(duì)比 常規(guī)細(xì)胞學(xué)（TBS制片）共檢查出45例陽(yáng)性病例， DNA定量分析技術(shù)共檢查出130例陽(yáng)性病例。45例常規(guī)細(xì)胞學(xué)（TBS制片）陽(yáng)性病例全在DNA片130例陽(yáng)性頰骨之列。所有陽(yáng)性病例全部由婦科醫(yī)生行宮頸活組織采樣送往麥克奧迪公司細(xì)胞室進(jìn)行病理組織學(xué)檢查。

2結(jié)果

2.1兩種不同方法宮頸癌陽(yáng)性率比較，見(jiàn)表1。

2.2對(duì)篩查結(jié)果為陽(yáng)性婦女行陰道鏡下活檢結(jié)果進(jìn)行比較 DNA倍體分析技術(shù)檢查出CINⅠ24例，CINⅡ 9例，CINⅢ 3例，宮頸炎52例；常規(guī)細(xì)胞學(xué)篩查出CINI 8例，CINII 3例，CINⅢ 4例，宮頸炎24例。DNA定量分析技術(shù)活檢的陽(yáng)性率明顯高于傳統(tǒng)的宮頸細(xì)胞學(xué)檢查，P<0.05兩種不同檢查方法具有明顯差異，見(jiàn)表2。

3討論

病理組織學(xué)檢查是子宮頸癌診斷金標(biāo)準(zhǔn)，常規(guī)細(xì)胞學(xué)技術(shù)（TCT）和DNA倍體分析技術(shù)是子宮頸癌篩查辦法，以上二表可以看出，DNA定量分析技術(shù)陽(yáng)性檢出率是3.45%，明顯高于常規(guī)細(xì)胞學(xué)技術(shù)（TCT）陽(yáng)性檢出率1.19%，而常規(guī)細(xì)胞學(xué)技術(shù)（TCT）與病理組織學(xué)檢查的符合率33.33%明顯高于DNA定量分析技術(shù)27.69%。

癌細(xì)胞在癌變過(guò)程中DNA含量改變?cè)谇?，形態(tài)改變?cè)诤?，?xì)胞DNA定量分析系統(tǒng)可通過(guò)測(cè)量細(xì)胞核內(nèi)DNA含量的變化，在形態(tài)改變不明顯前即可檢測(cè)出那些病變細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)癌及癌前病變的早期診斷，對(duì)于那些由慢性宮頸炎或不明原因的（無(wú)癥狀）引起的DNA含量改變的篩查人群366例及早采取有效的臨床干預(yù)措施，進(jìn)一步檢查治療，把病變阻斷在癌前或早期[3]，具有極其重要的臨床意義。

子宮頸液基細(xì)胞學(xué)（TCT）價(jià)格較低，應(yīng)用較廣，細(xì)胞DNA倍體定量分析技術(shù)的取材方法和制片與液基細(xì)胞學(xué)（TCT）一樣，但染色和閱片不同。TCT是巴氏染色，人工閱片；DNA定量分析是Feulgen染色，自動(dòng)閱片。其克服了TCT檢測(cè)技術(shù)人員診斷水平、視覺(jué)疲勞、診斷工具的差異。超早期檢查，可以提前3～5年發(fā)現(xiàn)早期宮頸癌。通過(guò)DNA定量分析系統(tǒng)對(duì)細(xì)胞核DNA含量與倍體狀況進(jìn)行測(cè)定和分析，較常規(guī)細(xì)胞學(xué)方法在宮頸癌的早期發(fā)現(xiàn)及診斷方面更有優(yōu)勢(shì)，可彌補(bǔ)基層單位因細(xì)胞學(xué)診斷技術(shù)有限的缺陷，適合在宮頸癌的早期發(fā)現(xiàn)和識(shí)別。

本次篩查結(jié)果表明：DNA定量分析檢測(cè)方法篩查子宮頸癌雖然價(jià)格較高，檢測(cè)步驟復(fù)雜繁瑣，染色時(shí)間長(zhǎng)，各種染色試劑及用水要求嚴(yán)格，所用儀器設(shè)備較多，但檢出率明顯高于價(jià)格比較低廉的常規(guī)液基細(xì)胞學(xué)涂片-巴氏分級(jí)方法，DNA定量分析更適用于基層單位進(jìn)行大規(guī)模子宮頸癌普查，更有效預(yù)防子宮頸癌。

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編輯/孫杰