摘要：目的 探討不同冷強(qiáng)度多次低溫暴露對(duì)大鼠卵巢功能的影響及人參多糖的調(diào)節(jié)作用。方法 采用體外細(xì)胞培養(yǎng)法分離培養(yǎng)大鼠卵巢黃體、顆粒細(xì)胞， 設(shè)人參多糖組和實(shí)驗(yàn)組，進(jìn)行37、0、-10℃環(huán)境溫度多次暴露，觀察黃體與顆粒細(xì)胞分泌孕酮的變化，采用放免分析方法測(cè)定孕酮生成含量。結(jié)果 0℃第1次低溫暴露，基礎(chǔ)孕酮生成量升高，第2次和第3次低溫暴露均顯著下降（P<0.05、P<0.01）；-10℃第一次低溫暴露，基礎(chǔ)孕酮生成量下降，第2次和第3次低溫暴露均顯著下降（P<0.01）。人參多糖組增高和下降幅度明顯減少，第2次和第3次0℃冷暴露后，基礎(chǔ)孕酮生成量顯著高于實(shí)驗(yàn)組（ P<0.05、P<0.01）。結(jié)論 低溫暴露強(qiáng)度、次數(shù)對(duì)大鼠卵巢黃體細(xì)胞與顆粒細(xì)胞分泌孕酮功能有影響，人參多糖對(duì)其具有適應(yīng)性調(diào)節(jié)作用。

關(guān)鍵詞：冷暴露；人參多糖；孕酮

低溫因素是應(yīng)激源之一，作用機(jī)體將引起一系列冷應(yīng)激反應(yīng)，由于低溫作用的方式不同反應(yīng)也不同[1]。已知冷應(yīng)激可導(dǎo)致下丘腦- 垂體- 性腺軸分泌功能發(fā)生變化[2]。人參具有“適應(yīng)原”樣作用，人參多糖是是人參中具有重要生理活性的有效成份[3]，為探討人參多糖對(duì)卵巢在不同冷強(qiáng)度、不同暴露時(shí)間功能變化的影響，本文采用體外細(xì)胞培養(yǎng)方法檢測(cè)大鼠卵巢黃體與顆粒細(xì)胞分泌孕酮的含量。

1 資料與方法

1.1一般資料

1.1.1動(dòng)物 Wistar大鼠，體重250～300g，健康雌性，分籠飼養(yǎng)，自由飲水進(jìn)食。適應(yīng)性飼養(yǎng)1w后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.1.2 細(xì)胞 黃體細(xì)胞與顆粒細(xì)胞取自大鼠卵巢。

1.1.3分組 黃體細(xì)胞分為Ⅰ組和Ⅱ組，顆粒細(xì)胞分為Ⅲ組和Ⅳ組，Ⅰ組和Ⅲ組分別進(jìn)行37℃、0℃ 、-10℃環(huán)境溫度暴露，Ⅱ組和Ⅳ組經(jīng)人參多糖干預(yù)后再分別進(jìn)行37℃、0℃ 、-10℃環(huán)境溫度暴露。

1.2 方法[4]。

1.3統(tǒng)計(jì)分析 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

低溫對(duì)黃體與顆粒細(xì)胞基礎(chǔ)孕酮生成量的影響及人參多糖的調(diào)節(jié)作用實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表1所示，Ⅰ組黃體細(xì)胞，0℃重復(fù)3次低溫暴露，其基礎(chǔ)孕酮生成量與37℃暴露比較，第1次低溫暴露為升高，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；第2次低溫暴露降低，差異顯著（P<0.05）；第3次低溫暴露明顯降低，差異非常顯著（P<0.01）。-10℃重復(fù)3低溫冷暴露，其基礎(chǔ)孕酮生成量與37℃暴露比較呈降低趨勢(shì)，第1次低溫暴露降低，差異顯著（P<0.05）；第2次和第3次低溫暴露繼續(xù)降低，差異非常顯著（P<0.01）。Ⅱ組黃體細(xì)胞，0℃重復(fù)3次低溫暴露，第1次和第2次低溫暴露出現(xiàn)上下波動(dòng)，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；第3次低溫暴露，與37℃暴露比較明顯降低（P<0.05），但數(shù)值明顯高于Ⅰ組（P<0.05）。-10℃重復(fù)3低溫冷暴露，其基礎(chǔ)孕酮生成量與37℃暴露比較呈降低趨勢(shì)，第2次和第3次降低差異顯著（P<0.05）；第3次數(shù)值明顯高于Ⅰ組（P<0.05）。

Ⅲ組顆粒細(xì)胞，0℃重復(fù)3次低溫暴露，基礎(chǔ)孕酮生成量與37℃暴露比較，第1次低溫暴露為升高，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；第2次和第3次低溫暴露降低，差異顯著（P<0.05）。-10℃重復(fù)3次低溫暴露，其基礎(chǔ)孕酮生成量與37℃暴露比較呈降低趨勢(shì)，第1次低溫暴露降低，差異顯著（P<0.05）；第2次和第3次低溫暴露繼續(xù)降低，差異非常顯著（P<0.01）。Ⅳ組顆粒細(xì)胞，0℃重復(fù)3次低溫暴露，基礎(chǔ)孕酮生成量與37℃暴露比較，第1次低溫暴露為升高，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；第2次和第3次低溫暴露降低，差異顯著（P<0.05）。-10℃重復(fù)3次低溫暴露，其基礎(chǔ)孕酮生成量與37℃暴露比較呈降低趨勢(shì)，第1次低溫暴露降低，差異顯著（P<0.05）；第2次和第3次低溫暴露繼續(xù)降低，差異非常顯著（P<0.01），見表1。

3 討論

低溫因素可引起機(jī)體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定性、生理和行為等發(fā)生改變，產(chǎn)生非特異性應(yīng)答反應(yīng)。人參具有提高機(jī)體抗應(yīng)激的作用，可以抗缺氧，耐高溫和低溫[5]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，低溫暴露對(duì)黃體與顆粒細(xì)胞孕酮生成量產(chǎn)生作用，出現(xiàn)了升高與降低的變化，而人參多糖在波動(dòng)變化中發(fā)揮了“適應(yīng)原”樣作用。

本實(shí)驗(yàn)黃體與顆粒細(xì)胞的孕酮生成量，0℃環(huán)境重復(fù)低溫暴露出現(xiàn)了先高后低的變化，這可能由于隨著冷暴露強(qiáng)度和時(shí)間的增加，應(yīng)激增強(qiáng)反應(yīng)出現(xiàn)逐步減弱及下降的變化，也可能由于反饋?zhàn)饔靡种屏舜冱S體生成素（LH）的分泌[6]的結(jié)果。-10℃環(huán)境重復(fù)低溫暴露，初次出現(xiàn)了基礎(chǔ)孕酮生成量的降低，表現(xiàn)出冷應(yīng)激抑制hCG刺激的孕酮生成，當(dāng)連續(xù)低溫暴露后孕酮生成量顯著降低。離體細(xì)胞培養(yǎng)的適宜溫度為37℃，而與-10℃暴露溫度差異很大，加之重復(fù)的低溫作用，致使細(xì)胞分泌功能明顯受到抑制。

人參多糖可影響低溫暴露的黃體細(xì)胞和顆粒細(xì)胞的孕酮生成量，在0℃和-10℃環(huán)境重復(fù)暴露后，人參多糖組孕酮生成量顯著高于實(shí)驗(yàn)組，對(duì)低溫誘導(dǎo)的孕酮生成量明顯下降有干預(yù)作用。本研究表明人參多糖具有顯著的抗冷應(yīng)激作用，調(diào)節(jié)低溫暴露條件下卵巢細(xì)胞孕酮生成量，保護(hù)生殖細(xì)胞功能。

參考文獻(xiàn)：

[1]楊煥民，李士澤.動(dòng)物冷應(yīng)激的研究進(jìn)展[J].黑龍江畜牧獸醫(yī)，1999，3：42-44.

[2]楊明，李慶芬.哺乳動(dòng)物冷應(yīng)激的主要神經(jīng)內(nèi)分泌反應(yīng)[J].動(dòng)物學(xué)研究，2002，23 （4）：335-340.

[3]張惠，馬洪林.人參多糖的活性成份及藥理作用[J].中醫(yī)藥研究，1989；12（15：38-40.

[4]孫艷，劉建茹，王洪軍，等.冷應(yīng)激對(duì)人絨毛膜促性腺激素誘導(dǎo)大鼠黃體與顆粒細(xì)胞功能的影響[J].環(huán)境與健康雜志，2008，25（4）：340-342.

[5]劉郁，劉連新.人參功效再認(rèn)識(shí)[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥.2006；17（2）：289.

[6]Jones SR，Kunz SE.Effects of cold stress on survival and reproduction of Haematobia irritans（Diptera：Muscidae）[J].J Med Entomol，1998，35：725-731.

編輯/王敏