[摘要] 目的 探討乙肝病毒感染者血清中HBV-DNA拷貝數(shù)與AFP濃度的變化對(duì)其轉(zhuǎn)歸的影響。方法 收集2012年1月—2013年1月來(lái)該院就診的400例乙肝病毒感染者血清，參照乙型肝炎和原發(fā)性肝癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行如下分組：慢性乙型肝炎組200例，肝炎肝硬化組150例，肝癌組50例。對(duì)收集的標(biāo)本采用實(shí)時(shí)熒光定量的方法檢測(cè)出HBV-DNA水平，化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)AFP的濃度，然后對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果 在所有病例中，慢性乙型肝炎組HBV-DNA拷貝數(shù)為（5.38±1.66），在3組中最高，而肝癌組HBV-DNA拷貝數(shù)為（4.41±1.43）在3組中最低。慢性乙型肝炎組與其他兩組比較，P<0.01，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；3組間AFP濃度的變化進(jìn)行比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。3組中HBV-DNA拷貝數(shù)及AFP濃度變化和組別之間有明顯的相關(guān)性，其中HBV-DNA的變化與病程呈反相關(guān)，而AFP的變化則呈正相關(guān)。 結(jié)論 乙肝病毒感染者應(yīng)定期定量檢測(cè)血清中HBV-DNA的含量，判斷病毒的復(fù)制情況，并同時(shí)檢測(cè)AFP濃度，以期盡早發(fā)現(xiàn)肝組織的損害程度及病情的演變過程，對(duì)乙肝病毒感染者病程轉(zhuǎn)歸的監(jiān)測(cè)和預(yù)后判斷具有重要的意義。

[關(guān)鍵詞] HBV-DNA；AFP；慢性乙型肝炎；肝炎肝硬化；肝癌；病程轉(zhuǎn)歸

[中圖分類號(hào)] R512.6 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-0742（2014）09（c）-0066-03

乙型肝炎病毒（HBV）攜帶者廣泛分布于世界各個(gè)地區(qū)，其主要的病原體是HBV，該病毒能夠?qū)Ω闻K造成持續(xù)的損傷，是一種嚴(yán)重危害人類健康的致病因子。已有研究表明[1，2]，慢性乙型肝炎患者發(fā)展到肝硬化、肝癌的危險(xiǎn)性和血清中HBV-DNA水平呈顯著的相關(guān)性，并且和病情的療效和結(jié)局有著明顯的關(guān)系。AFP是目前診斷原發(fā)性肝癌的敏感而可靠的生化指標(biāo)，但在肝炎、肝硬化患者中AFP也會(huì)升高。因此，該研究就乙肝病毒感染者血清中HBV-DNA水平和AFP的濃度變化探討慢性乙肝病人轉(zhuǎn)歸的過程，動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)乙肝病人病程發(fā)展變化，為臨床診斷提供有價(jià)值的實(shí)驗(yàn)室依據(jù)，盡早發(fā)現(xiàn)肝組織的損害程度及病程發(fā)展，為乙肝病毒感染者的治療、病情的監(jiān)控發(fā)揮重要的臨床指導(dǎo)作用，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

從梅州市人民醫(yī)院肝病科、消化科、介入科和腫瘤外科收集乙肝病毒感染者血清400例，其中慢性乙型肝炎200例，肝炎肝硬化組150例，肝癌組50例。[男性300例，女性100例，平均年齡（46.5±16.3）歲]。所有病例組均排除自身免疫性疾病及各類腸道病毒感染性疾病，并且排除大量飲酒史和吸煙史的患者，肝癌組病例排除轉(zhuǎn)移性肝癌，其他非HBV感染導(dǎo)致的肝癌及伴有其他惡性腫瘤病史的患者，所入選的病例HBV-DNA定量結(jié)果均在103 copies/mL以上，3組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。乙型肝炎診斷標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)中華醫(yī)學(xué)會(huì)傳染病與寄生蟲病學(xué)分會(huì)和肝病分會(huì)2005年制定的“慢性乙型肝炎防治指南”，肝癌診斷標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)中國(guó)抗癌協(xié)會(huì)肝癌專業(yè)委員會(huì)2001年制定的“原發(fā)性肝癌的臨床診斷與分期標(biāo)準(zhǔn)”。獲得患者知情同意后，取靜脈血5 mL離心，血清置-20 ℃凍存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 試劑、儀器和檢測(cè)方法

1.2.1 試劑和儀器 HBV-DNA提取試劑盒由中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司提供，采用羅氏Lightcycler型實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)儀；AFP檢測(cè)試劑是貝克曼配套試劑盒，運(yùn)用美國(guó)貝克曼Accss2全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光儀。

1.2.2 檢測(cè)方法 采用磁珠法提取血清HBV DNA，取適量標(biāo)本至毛細(xì)管中，每次試驗(yàn)設(shè)立4種HBV DNA 標(biāo)準(zhǔn)品，濃度分別為每毫升107、106、105、104 copies，并設(shè)立空白管、陰性、臨界陽(yáng)性、強(qiáng)陽(yáng)性對(duì)照，上機(jī)進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增，檢測(cè)出血清中HBV DNA濃度；AFP檢測(cè)采用化學(xué)發(fā)光法將收集的血清標(biāo)本直接上機(jī)檢測(cè)。檢測(cè)參考范圍是：HBV DNA<500 copies/mL為正常，AFP≤10 ng/L為正常 。質(zhì)量控由衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心提供。

1.3 統(tǒng)計(jì)方法

應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)研究數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。該研究數(shù)據(jù)屬于計(jì)量資料，HBV-DNA含量需經(jīng)過取㏒值的轉(zhuǎn)化，都以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示。3組間的比較采用單因素方差分析，HBV-DNA及AFP在血清中變化與病程的相關(guān)分析采用Brivariate分析法。

2 結(jié)果

①在所有病例中，慢性乙型肝炎組HBV-DNA拷貝數(shù)最高，肝癌組最低。慢性乙型肝炎組分別與肝硬化組、肝癌組比較，P分別為0.003、0.006均<0.01，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；慢性乙型肝炎組AFP濃度的變化與其他兩組做相同的統(tǒng)計(jì)分析，P分別為0.021、0.046均<0.05，差異同樣有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表1、2。

表1 慢性乙肝病毒感染者HBV-DNA、AFP測(cè)定（x±s）

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表2 組間單因素方差分析結(jié)果

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②以不同的組別作為分析因素進(jìn)行Brivariate相關(guān)分析，3組中HBV-DNA拷貝數(shù)及AFP濃度變化和組別之間有明顯的相關(guān)性，其中HBV-DNA的變化與病程呈反相關(guān)，而AFP的變化與病程則呈正相關(guān)，結(jié)果見表2。

3 討論

3.1 病毒復(fù)制與肝組織損害的相互關(guān)系

HBV能夠在肝細(xì)胞內(nèi)持續(xù)復(fù)制，反復(fù)感染，而復(fù)制指標(biāo)就是血清中HBV DNA的拷貝數(shù)。HBV對(duì)肝臟的長(zhǎng)期作用導(dǎo)致其炎癥及纖維化，嚴(yán)重者可發(fā)展成為肝硬化甚至肝癌。慢性乙型肝炎的病程發(fā)展和轉(zhuǎn)歸是HBV、肝細(xì)胞和免疫系統(tǒng)三者之間相互作用的結(jié)果，病毒基因整合到宿主細(xì)胞的DNA中[3]，造成DNA損傷，并影響受損DNA的修復(fù)，從而導(dǎo)致細(xì)胞基因組的變異，促使突變細(xì)胞不斷累積，最終導(dǎo)致肝細(xì)胞癌變。AFP是胚胎干細(xì)胞所產(chǎn)生的一種特殊蛋白質(zhì)，在胚胎期由肝臟實(shí)質(zhì)細(xì)胞和卵黃囊細(xì)胞合成，成人血液中的AFP主要來(lái)源于肝癌細(xì)胞，AFP是原發(fā)性肝細(xì)胞肝癌的特異性腫瘤標(biāo)志物，其升高反映肝臟受損后新的肝細(xì)胞再生和修復(fù)，隨著病情的惡化，肝細(xì)胞大量增生，AFP在血清中的含量會(huì)急劇增加，對(duì)高危人群的隨訪中血清AFP增高與肝臟炎癥、纖維化程度有關(guān)聯(lián)。研究發(fā)現(xiàn)肝組織炎癥活動(dòng)度增高，肝組織內(nèi)的HBV-DNA載量也明顯升高，炎癥輕、中、重度之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[4]。慢性乙型肝炎發(fā)展到肝硬化、肝癌很大程度上和病毒復(fù)制情況及反復(fù)發(fā)作惡化的次數(shù)有著密切的關(guān)系。

3.2 病毒復(fù)制量與AFP的關(guān)系

該研究通過對(duì)400例乙肝病毒感染者HBV-DNA、AFP水平的檢測(cè)及統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)血清HBV-DNA濃度在慢性乙肝患者組中最高，肝細(xì)胞癌組最低；而AFP濃度的變化則與其相反，二者的變化在3組之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。這與HBV對(duì)肝細(xì)胞損害的漸進(jìn)過程密切相關(guān)，HBV-DNA在體內(nèi)的復(fù)制不能夠得到很好的控制，病情逐漸加重，使肝臟變形變硬而形成肝硬化，最終突變細(xì)胞的不斷累積導(dǎo)致了原發(fā)性肝癌的發(fā)生[5]。隨著病程的進(jìn)展 血清中AFP的濃度也隨之發(fā)生改變，結(jié)果在表1中顯示，并且二者的變化與病情的發(fā)展呈明顯的相關(guān)性，結(jié)果在表2中顯示，這與乙肝病毒感染是肝癌發(fā)生的主要危險(xiǎn)因素的相關(guān)研究[6]具有一致性，該研究表明慢性HBV感染與AFP存在密切關(guān)聯(lián)，這與HBV慢性感染者肝癌的發(fā)生過程中AFP持續(xù)升高有關(guān)[7]。該研究中發(fā)現(xiàn)同一個(gè)病例從慢性乙肝階段發(fā)展到肝硬化、肝癌的整個(gè)病程中，HBV病毒一直處于復(fù)制階段，對(duì)肝臟造成持續(xù)損傷，并逐步造成肝硬化、纖維化甚至肝癌，這與報(bào)道[8-9]是相符的，同時(shí)血清中AFP的濃度也在高水平范圍內(nèi)不斷的變化，因此控制HBV病毒的復(fù)制將對(duì)慢性乙肝病人病程好的轉(zhuǎn)歸起到極其重要的作用。

大量的研究表明，乙型肝炎病毒感染能夠引起各種急、慢性病毒性肝炎及肝硬化等疾病，與肝癌的發(fā)生密切相關(guān)。綜合該研究分析可知，對(duì)HBV感染者應(yīng)定期進(jìn)行HBV-DNA的定量檢測(cè)，分析病毒的復(fù)制狀況，同時(shí)檢測(cè)AFP的濃度，以期盡早發(fā)現(xiàn)肝組織的損害程度及病程的轉(zhuǎn)歸，達(dá)到早期發(fā)現(xiàn)、早期治療的目的。綜上，慢性乙肝病人病程的發(fā)展是多因素、多機(jī)制共同作用的結(jié)果，動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)HBV-DNA水平、AFP濃度，結(jié)合臨床診斷，綜合分析，為病程的控制和預(yù)后觀察發(fā)揮重要的指導(dǎo)作用。

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（收稿日期：2014-06-27）