[摘要] 目的 探討凋亡抑制蛋白BIRC5在肝癌中的表達(dá)及其表達(dá)與臨床病理牲的關(guān)系。方法 免疫組化檢測BIRC5在20例正常肝組織及80例肝癌組織中的表達(dá)，分析其表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系。 結(jié)果 BIRC5在肝癌組織中的陽性表達(dá)率為66.3%，明顯高于正常肝組織（5%），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。此外， BIRC5在低分化肝細(xì)胞癌中的表達(dá)率（83.3%）明顯高于高-中分化肝細(xì)胞癌（55.4%）；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者中BIRC5的表達(dá)率（85.7%）明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者（55.9%）；II-III期患者BIRC5的表達(dá)率（83.9%）明顯高于I期患者（57.1%），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；而BIRC5表達(dá)率與年齡、性別、腫瘤最大直徑無明顯相關(guān)（P>0.05）。 結(jié)論 BIRC5表達(dá)與肝癌的發(fā)生密切相關(guān)，可能成為肝癌診斷的新型標(biāo)記物。

[關(guān)鍵詞] BIRC5；肝癌；臨床病理特征

[中圖分類號] R735.7 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1674-0742（2014）09（c）-0073-02

原發(fā)性肝癌是一類常見的惡性腫瘤，對化療藥物敏感性差，病程發(fā)展迅速，預(yù)后不良[1]。肝癌的進(jìn)展是多基因、多階段的發(fā)展過程，涉及一系列分子事件，導(dǎo)致細(xì)胞無限生長并產(chǎn)生惡性表型[2]。目前臨床上致力于尋找肝癌新治療靶點，實現(xiàn)多分子、多通路聯(lián)合治療，以期提高治療效果。肝癌細(xì)胞高表達(dá)生存素（BIRC5），是一個潛在的治療靶點[3]。目前研究表明其表達(dá)與多種腫瘤的轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)、臨床分期、病理分級及多藥耐受明顯的相關(guān)[4]。該研究2009年10月—2012年12月通過免疫組化的方法，研究該基因在肝癌發(fā)病過程中的表達(dá)水平，明確其表達(dá)是否與其臨床病理特征相關(guān)，為肝癌靶向基因治療提供實驗基礎(chǔ)，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

取該院肝癌組織標(biāo)本80例，肝癌組織遠(yuǎn)端相對正常肝組織20例。其中，肝癌患者男47例、女33例，年齡47～67歲之間，平均55.2歲；腫瘤最大直徑≥5cm27例，<5 cm53例；低分化24例，高-中分化56例；發(fā)生淋巴轉(zhuǎn)移轉(zhuǎn)21例，無淋巴轉(zhuǎn)移59例，II～I(xiàn)II期31例，I期49例。所有患者術(shù)前均未接受放化療。

1.2 免疫組化

所有組織標(biāo)本均采用福爾馬林固定，石蠟包埋，3 μm厚切片，二甲苯及酒精梯度脫水，pH為7.2～7.4的檸檬酸鹽抗原修復(fù)液修復(fù)，滴加一抗BIRC5（美國santa cruz公司）（稀釋比例為1∶100）后4度過夜，復(fù)溫30 min后PBS漏光，滴加生物素標(biāo)記二抗（武漢博士德公司）工作液，37 ℃孵育30 min，DAB（北京中杉金橋生物公司）顯色，蘇木精復(fù)染、酒精梯度脫水及中性樹膠封片。

1.3 結(jié)果判定

隨機選取10個高倍視野（物鏡40×）進(jìn)行觀察，根據(jù)細(xì)胞顯色強度及陽性細(xì)胞百分率綜合評價。其中，陽性細(xì)胞數(shù)記分為：<5%為0分，5%～15%為1分，16%～25%為2分，>25%為3分。著色強度記分為：無色為0分，淺黃色和黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；以陽性細(xì)胞數(shù)得分乘以著色強度得分為免疫組化總分，范圍：0～9分，≥4分定義為陽性表達(dá)，其余為陰性表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計方法

應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計學(xué)軟件對研究數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，兩樣本率計數(shù)資料的比較采用χ2檢驗。

2 結(jié)果

2.1 BIRC5在不同肝組織中的表達(dá)

免疫組化染色結(jié)果顯示，BIRC5在正常肝組織中以低表達(dá)為主，20例肝癌組織遠(yuǎn)端相對正常肝組織中有1例（5%）出現(xiàn)BIRC5弱陽性信號，陽性信號散在分布于組織細(xì)胞的胞核及胞漿中；在肝癌組織中以高表達(dá)為主，80例肝癌組織標(biāo)本中有53例（66.3%）出現(xiàn)BIRC5強陽性信號，陽性信號位于組織細(xì)胞的細(xì)胞核內(nèi)。BI4RC5在肝癌組織中的表達(dá)顯著高于正常肝組織，兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=21.76，P=0.000）。

2.2 BIRC5在肝癌中的表達(dá)與其臨床病理特征的關(guān)系

BIRC5在肝癌組織中的表達(dá)與分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及分期相關(guān)，其中，BIRC5在低分化肝細(xì)胞癌中的表達(dá)率為83.3%，明顯高于高-中分化肝細(xì)胞癌中的表達(dá)（55.4%）；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者中BIRC5的表達(dá)率為85.7%，明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者（55.9%）；II-III期患者BIRC5的表達(dá)率為83.9%，明顯高于I期患者（57.1%），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；而與年齡、性別、腫瘤最大直徑無明顯相關(guān)（P>0.05），見表1。

表1 BIRC5在肝癌中的表達(dá)與其臨床病理特征的關(guān)系[n（%）]

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3 討論

該研究通過觀察凋亡抑制蛋白BIRC5在肝癌中的表達(dá)及其表達(dá)與臨床病理牲的關(guān)系，評價了BIRC5表達(dá)與肝癌發(fā)生的關(guān)系。該研究結(jié)果顯示，IRC5在肝癌組織中的陽性表達(dá)率明顯高于正常肝組織，提示BIRC5可能作為一癌基因參與肝癌的發(fā)生。此外，BIRC5在肝癌中的表達(dá)與患者的臨床病理特征具有密切聯(lián)系，其中BIRC5在低分化肝細(xì)胞癌患者中的表達(dá)明顯高于高-中分化肝細(xì)胞癌組織，提示BIRC5的表達(dá)與肝癌細(xì)胞的分化有關(guān)，高BIRC5表達(dá)可能促進(jìn)肝癌細(xì)胞的低分化，促使肝癌細(xì)胞的惡性程度增加。此外，BIRC5表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及分期密切相關(guān)，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者中的表達(dá)明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，II-III期患者中的表達(dá)明顯高于I期患者。由于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移往往影響患者的臨床分期及預(yù)后，為此我們推測BIRC5的異常表達(dá)也參與了肝癌的發(fā)展過程，高BIRC5表達(dá)患者可能預(yù)后不良。該研究提示BIRC5在肝癌中的表達(dá)水平與腫瘤惡性、進(jìn)展程度呈正比，未來臨床上可將其作為肝癌診斷新型標(biāo)記物，提高肝癌診療水平。

BIRC5是凋亡抑制蛋白家族IAPs（inhibitor of apoptosis proteins）中結(jié)構(gòu)最簡單、抗凋亡作用最強的蛋白分子。目前，BIRC5在多種惡性腫瘤研究中均有報道，梁紅玲等[5]報道稱 BIRC5在肺癌組織中普遍存在高表達(dá)，主要在胞核中表達(dá)，少部分可表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)中，為廣譜的分子靶點之一。該研究還提示BIRC5在肺癌男性患者中表達(dá)高于女性患者，而該研究中BIRC5與患者性別并未見相關(guān)性，可能與肺癌男性患者患者吸煙率較高有關(guān)，需要進(jìn)一步研究。楊瑞、Seth等[6-7] 報道了BIRC5所編碼的Survivin在膀胱腫瘤細(xì)胞中起到促細(xì)胞增殖及調(diào)整細(xì)胞的生存時間、抑制細(xì)胞凋亡的作用，抑制BIRC5基因或下游產(chǎn)物表達(dá)，可能會促進(jìn)膀胱腫瘤細(xì)胞凋亡，從而阻止腫瘤生長。儲兵等報道稱BIRC5參與了鼻咽癌發(fā)病過程，在鼻咽癌細(xì)胞中表達(dá)明顯上調(diào)[8]。張小麗等[9]研究表明BIRC5參與了大腸癌發(fā)病過程，并與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)。賀榮芳等[10]研究表明BIRC5在惡性淋巴瘤異常呈高表達(dá)，并與患者的臨床分期相關(guān)。BIRC5在細(xì)胞凋亡過程中也發(fā)揮著重要作用。凋亡失衡的理論貫串于腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中[11]，選擇性地干預(yù)細(xì)胞凋亡信號傳導(dǎo)、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡程序啟動正成為治療惡性腫瘤的有效療法。該研究發(fā)現(xiàn)在肝癌樣本BIRC5表達(dá)水平升高，提示對肝癌患者采用針對BIRC5靶點的干預(yù)可能是治療肝癌癌的策略之一。然而，BIRC5在肝癌中的具體作用機理尚不清楚，有待于深入研究。

綜上所述，BIRC5在肝癌細(xì)胞中呈高表達(dá)，其表達(dá)水平與腫瘤預(yù)后有相關(guān)性，因此，BIRC5可作為一個潛在的診斷和治療靶點應(yīng)用于肝癌臨床診療中，未來對BIRC5在腫瘤中的研究應(yīng)進(jìn)一步將基礎(chǔ)實驗和臨床實驗聯(lián)系起來，致力于相關(guān)抗癌靶向藥物的研發(fā)。

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（收稿日期：2014-06-25）