[摘要] 目的 探討反式白藜蘆醇（TR，Trans-Resveratrol）對Aβ25-35損傷大鼠海馬NMDA受體NR1、NR2A亞基表達的影響。方法 選擇經(jīng)莫式水迷宮（MWM）訓練合格的大鼠，隨機分為6組：假手術組；模型組；TR高劑量組、TR中劑量組、TR低劑量組、安理申對照組。模型組通過在大鼠海馬內(nèi)注射Aβ25-35制模獲得，在模型組基礎上分別用TR高、中、低劑量TR干預獲得TR高劑量組、TR中劑量組、TR低劑量組，同時用安理申干預獲得安理申對照組，每組6只，采用實時聚合酶鏈反應法（real time PCR）檢測6組大鼠海馬NMDA受體NR1、NR2A表達。 結果 在MWM中模型組逃避潛伏期比TR高、中、低劑量組、安理申組和假手術組明顯延長，各組NMDA受體NR1表達分別為（0.14±0.04）， （1.51±0.54）， （0.22±0.06）， （0.37±0.08，0.61） ± 0.15）（LOW），（0.97±0.16）（安理申）。各組NMDA受體NR2A表達分別為（0.12±0.07）、（1.72±0.34）、（0.16±0.06）、（0.21±0.08）、（0.52±0.15）、（0.67±0.16）。結論 TR可能有下調海馬NMDAR1 、NMDAR2A受體表達，從而減少海馬細胞凋亡的作用。

[關鍵詞] 反式白藜蘆醇；癡呆；大鼠；NMDA受體

[中圖分類號] R725 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-0742（2014）09（c）-0011-03

海馬是學習記憶的重要腦區(qū)，是邊緣系統(tǒng)的一個部分[1]。NMDA受體是谷氨酸受體的一種亞型，參與形成突觸傳遞的長時增強過程，參與調解神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育，同時在癲癇、腫瘤等多種重要過程中發(fā)揮重要作用[2-3]。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的NMDA受體多達7種，包括NR1、NR2（A、B、C和D4種）、NR3（A、B2種），NR2各亞單位之間具有很好的相似性，一般將其分為2種亞群[4]。研究表明，反式白藜蘆醇（Trans-Resveratrol， TR）具有一定的抗氧化作用，在防止高血壓、動脈硬化及提高機體免疫力方面有較好的效果[5]。

研究發(fā)現(xiàn)，利用基因敲除技術敲除NR1基因后，小鼠CA1區(qū)NMDA受體興奮性突觸后電位消失，癡呆大鼠的海馬突觸傳遞發(fā)生改變，其海馬的NR2A表達輕度上調，NR1表達明顯上調。經(jīng)TR干預后海馬及附近腦組織NR1、NR2A表達均下調[9]。因此，我們使用顱鉆鉆孔微注棒Aβ25-35注射損傷雙側大鼠海馬[7-8] ，注射TR后，觀察其對癡呆大鼠保護的效果，并檢測NMDA受體NR1、NR2A的表達情況，以探求臨床上癡呆病人理想藥物治療的實驗研究方法，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

實驗用36只雄性大鼠為本單位實驗動物研究中心提供，體重208～225 g，平均體重215 g。反式白藜蘆醇（TR）粉劑購自西安林禾生物技術有限公司?？辔端豳徸陨ど锕こ蹋ㄉ虾＃┯邢薰?，鹽酸多奈哌齊（安理申）購自衛(wèi)材（中國）藥業(yè)有限公司，Aβ25-35購自SIGMA公司，逆轉錄試劑、熒光液Green Supermix等PCR試劑購自生工生物工程（上海）有限公司。

1.2 儀器

冷凍離心機（德國5417R）、紫外可見分光光度計（TU-1810）、湘儀 H1650-W離心機，Thermo Piko Real 96 Real-time system實時PCR儀，Bioer XP Cycler普通PCR儀、雙臂腦立體定位儀（68002型RWD life science co）、顱鉆（78001型）、超微量注射棒、Morris水迷宮等。

1.3 動物模型制備

選擇經(jīng)莫式水迷宮（MWM）訓練合格的大鼠，隨機分為6組：假手術組；模型組；TR高劑量組、TR中劑量組、TR低劑量組、安理申對照組。模型組通過在大鼠海馬內(nèi)注射Aβ25-35制模獲得，在模型組基礎上分別用TR高、中、低劑量TR干預獲得TR高劑量組、TR中劑量組、TR低劑量組，同時用安理申干預獲得安理申對照組。

1.4 NMDA受體NR1、NR2A表達檢測

利用RT-PCR檢測NMDA受體NR1、NR2A的表達，方法參照檢測試劑盒進行，PCR反應條件采用兩步法進行，具體步驟為：95 ℃，3 min； 65 ℃，3 min。

1.5 統(tǒng)計方法

應用SPSS18.0統(tǒng)計軟件分析所有數(shù)據(jù)，計量資料以（x±s）表示，組間比較用Levene 檢驗分析。

2 結果

2.1 各組NMDA受體NR1、NR2A表達

各組NRI及NR2A的表達結果見表1，與模型組相比，各組NR1及NR2A的表達差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），且高劑量組反式白藜蘆醇干預組的NR1的表達明顯減少，與中、低劑量反式白藜蘆醇干預組相比效果好。

表1 NMDAR1在各組的表達（x±s）

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注：*與模型組比較差異有統(tǒng)計學意義，P<0.05。

2.2 TR各劑量組海馬凋亡細胞病理觀察

TR各劑量組海馬凋亡細胞病理切片結果如圖1所示，TR高劑量組海馬的凋亡細胞數(shù)明顯低于TR低劑量組、對照組及模型組，TR低劑量組海馬凋亡細胞數(shù)相對對照組及模型組較少。

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圖1 各組海馬的凋亡細胞觀察

A：TR高劑量組海馬的凋亡細胞

B：TR低劑量組海馬的凋亡細胞

C：正常對照組海馬的凋亡細胞

D：模型組海馬的凋亡細胞

3 討論

海馬是人類腦部的重要區(qū)域，具有調解神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育的重要作用，是邊緣系統(tǒng)的一個部分，海馬受損是引起阿爾茨海默病的主要病因[6-7]。

NMDA受體是谷氨酸受體的一種亞型，參與形成突觸傳遞的長時增強過程，研究發(fā)現(xiàn)當海馬神經(jīng)元突觸內(nèi)NMDA受體被阻斷時，細胞變性死亡將會增加[8-10]。海馬中主要表達的NMDA受體有NR1和NR2A，NR1可以在細胞中單獨表達有功能的同聚受體，但對激動反應很小，NR2A不能單獨形成有功能的通道，只有和NR1組合才能表現(xiàn)活性，并使后者反應明顯加強，所以把NR1、NR2A放一起研究并起互相印證的作用[11-13]，研究發(fā)現(xiàn)，谷氨酸可能在神經(jīng)病理變化及癡呆癥狀中起重要作用，在有癡呆的大鼠甘氨酸結合能力降低，提示NMDA受體的功能缺損，Lu等[15]采用免疫印跡法分析AD 患者死后腦NR1下降39% ，NR2B下降40%，提示NMDA受體的功能缺失后， AD患者嗅內(nèi)皮質中NR1mRNA含量較正常人下降34%，而用用高壓液相色譜分析腦組織標本中的右旋- 天冬氨酸含量發(fā)現(xiàn)[16] AD患者的天冬氨酸較相同年齡正常對照組下降，但在神經(jīng)病理變化較小的小腦中無明顯變化，這些說明右旋-天冬氨酸的降低可能參與NMDA受體功能下調及記憶喪失的過程。Hasanein等[17]則發(fā)現(xiàn)AD患者神經(jīng)受損區(qū)具有特異性，Aβ25-35 在AD患者腦內(nèi)堆集、產(chǎn)生神經(jīng)毒性可能是通過NMDA受體促進氧自由基的生成所引起的[18]，所以該實驗通過檢測NMDA受體含量變化，推測抗氧化藥物白藜蘆醇是否對癡呆大鼠有作用，結果發(fā)現(xiàn)隨著TR劑量的增加，海馬組織NMDA受體的表達減少，癡呆癥狀有所改善，TR對癡呆大鼠海馬起到保護作用，TR對大腦海馬的保護作用可能是通過下調海馬中NMDA受體NR1及N2A的表達完成的，但其具體作用機制還需要進一步研究發(fā)現(xiàn)。

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（收稿日期：2014-06-24）