摘要：2014年3月底湖北省恩施州鶴峰縣養(yǎng)羊戶從外省購入山羊后，山羊出現(xiàn)發(fā)熱、咳嗽、流涎、腹瀉等小反芻獸疫疑似癥狀。采集3只病死山羊病料、8只發(fā)病山羊棉拭子和8份血清樣品分別進(jìn)行病原學(xué)和血清學(xué)檢測(cè)。利用阻斷ELISA試劑盒對(duì)8份血清樣本進(jìn)行抗體檢測(cè)，結(jié)果全部陽性；利用小反芻獸疫病毒特異性熒光定量RT-PCR方法， 從11只病羊樣品中均檢測(cè)到小反芻獸疫病毒核酸，結(jié)果經(jīng)國家外來動(dòng)物疫病研究中心復(fù)核確認(rèn)，確診為湖北省首例山羊小反芻獸疫疫情。

關(guān)鍵詞：山羊；小反芻獸疫；診斷 ；熒光定量RT-PCR

中圖分類號(hào)：S858.27 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1007-273X（2014）10-0017-02

小反芻獸疫（Peste des petites ruminants，PPR）是由小反芻獸疫病毒（Peste des petites ruminants virus，PPRV）引起的小反芻動(dòng)物的一種急性接觸性傳染性疾病[1]，是副粘病毒科麻疹病毒屬的成員。國際動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）將該病列為A類動(dòng)物疫病，是法定通報(bào)動(dòng)物疫病。我國將其列為一類動(dòng)物疫病，《國家中長(zhǎng)期動(dòng)物疫病防治規(guī)劃（2012-2020年）》規(guī)定為重點(diǎn)防范的外來動(dòng)物疫病。山羊和綿羊是該病的自然宿主，山羊比綿羊更易感，臨床癥狀更嚴(yán)重，野生小反芻動(dòng)物也可感染發(fā)病。

2014年3月29日，湖北省恩施州重大動(dòng)物疫病指揮部辦公室接到鶴峰縣疑似小反芻獸疫疫情報(bào)告，鶴峰縣走馬鎮(zhèn)兩養(yǎng)殖戶的山羊出現(xiàn)發(fā)熱、咳嗽、流涎、腹瀉等小反芻獸疫疑似癥狀，截止3月29日已死亡16只。技術(shù)人員到現(xiàn)場(chǎng)進(jìn)行調(diào)查，并采樣送實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)?，F(xiàn)將其報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 流行病學(xué)調(diào)查

對(duì)山羊發(fā)病情況進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查、疫病溯源工作。

1.2 樣品采集

采集8只發(fā)病山羊血清及口鼻棉拭子，解剖3只病死山羊，分別采集肺、脾、腸系膜淋巴結(jié)等組織，共11份樣品。

1.3 抗體檢測(cè)

利用小反芻獸疫阻斷ELISA抗體檢測(cè)試劑盒（國家外來動(dòng)物疫病研究中心提供），按照說明書進(jìn)行操作，檢測(cè)小反芻獸疫抗體。

1.4 核酸提取與病毒核酸檢測(cè)

將棉拭子離心取上清液200 μL加入96孔樣品板中。將病料剪碎加入鋼珠、生理鹽水于組織研磨儀中研磨，凍融后離心取上清200 μL加入96孔樣品板中。使用VX Reagent Pack試劑在QIAxtrator核酸提取儀上提取病毒核酸。

利用小反芻獸疫熒光RT-PCR檢測(cè)試劑盒（國家外來動(dòng)物疫病研究中心提供），按照說明書進(jìn)行操作，檢測(cè)提取的病毒核酸。

2 結(jié)果與分析

2.1 流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果

鶴峰縣走馬鎮(zhèn)位于武陵山區(qū)腹地，境內(nèi)青山疊嶂，夾有平川丘陵，發(fā)病的養(yǎng)殖戶位于一座山坳之中，獨(dú)門獨(dú)戶，與村中其他住戶相隔甚遠(yuǎn)，與另外一家發(fā)病養(yǎng)殖戶也相隔一座山，具有阻止疫病傳播的“天然屏障”。

鶴峰縣兩養(yǎng)羊戶于2014年3月18日從山東省嘉祥縣某家畜交易市場(chǎng)購入山羊102只，調(diào)運(yùn)時(shí)未申請(qǐng)檢疫。經(jīng)長(zhǎng)途運(yùn)輸3 d（21日）到達(dá)，購入第三天（23日）兩戶所購山羊相繼出現(xiàn)小反芻獸疫疑似癥狀，發(fā)病率為100%。一周后出現(xiàn)死亡，截至3月29日死亡16只，死亡率為15.7%。

2.2 臨床癥狀與病理變化

病羊臨床表現(xiàn)為急性，初期精神沉郁，食欲下降，體溫升高至39.0～41.8℃，咳嗽、呼吸急促，呼出惡臭氣體，口腔潰瘍，口鼻眼分泌物增多，流涎、流涕、流淚，出現(xiàn)黑色或綠色水樣腹瀉，甚至出現(xiàn)水樣血便。個(gè)別懷孕母羊流產(chǎn)。解剖病理變化見肺臟出血、壞死，腸黏膜脫落，腸道出血、呈血斑塊狀壞死。具體見圖1。

A B C

D E F

A.鼻腔分泌物增多；B.口腔鼻腔黏膜糜爛；C.腹瀉；D.肺臟出血、壞死；E.腸道出血；F.盲腸斑塊狀壞死

圖1發(fā)病羊臨床癥狀與病理變化

2.3 抗體檢測(cè)結(jié)果

8份血清樣品的PPRV特異性抗體檢測(cè)結(jié)果均為陽性。

2.4 病原檢測(cè)結(jié)果

檢測(cè)結(jié)果顯示，從8份發(fā)病山羊口鼻棉拭子及3只病死山羊病料組織中均檢測(cè)到特異性擴(kuò)增曲線，Ct值在15.77～32.93之間，判定為PPRV核酸陽性（圖2）。

擴(kuò)增曲線的橫坐標(biāo)為擴(kuò)增的循環(huán)數(shù)，縱坐標(biāo)為熒光強(qiáng)度。Ct

值小于40判定為陽性，圖中曲線從左至右分別是8、3、2、10、5、9、6、4、1、7、11號(hào)樣品（1-8號(hào)為棉拭子，9-11號(hào)為病料），P為陽性對(duì)照，N為陰性對(duì)照。

3 小結(jié)與討論

自1942年在非洲西部的象牙海岸首次報(bào)道以來，在隨后的10年內(nèi)小反芻獸疫幾乎遍及了從撒哈拉沙漠到赤道的所有國家。近年來該病呈蔓延的趨勢(shì)，并且越來越明顯。由西非、中非和東非向東擴(kuò)散，目前已經(jīng)傳播到西亞和南亞地區(qū)，且有上升趨勢(shì)[2，3] 。截至2003年8月，我國周邊老撾、孟加拉國、印度、尼泊爾、俄羅斯、巴基斯坦和緬甸等國家暴發(fā)大規(guī)模小反芻獸疫疫情。2007年7月該病首次報(bào)道發(fā)現(xiàn)于我國西藏自治區(qū)日土縣[4]，證實(shí)為境外輸入疫情。2013年12月份，該病在新疆多地區(qū)發(fā)生，2014年3月份，甘肅、內(nèi)蒙古、寧夏等省陸續(xù)發(fā)生疫情，其后從西北地區(qū)迅速向全國擴(kuò)散蔓延，遼寧、江蘇、黑龍江、湖南、廣西等多省均報(bào)道疫情發(fā)生[6]。

湖北省歷史上從未有小反芻獸疫疫情報(bào)道，本次疫情發(fā)生后，實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員立即趕到現(xiàn)場(chǎng)開展調(diào)查和采樣檢測(cè)工作。采用國家外來動(dòng)物疫病研究中心提供的小反芻獸疫抗體檢測(cè)試劑盒對(duì)8份血清樣品進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果全部為陽性；采用國家外來動(dòng)物疫病研究中心提供的小反芻獸疫熒光RT-PCR檢測(cè)試劑盒對(duì)11份病原學(xué)樣品進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果全部為陽性，并經(jīng)國家外來病研究中心復(fù)核，符合率為100%。結(jié)合臨床癥狀和流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果，最終確診此次疫情為從外省調(diào)入活羊引起的湖北省首例小反芻獸疫疫情。

自2007年以來我國羊肉價(jià)格大幅上漲，漲幅翻兩番，相比其他肉類，羊肉價(jià)格漲幅驚人，刺激了國內(nèi)養(yǎng)羊業(yè)的發(fā)展，跨省購羊、引種數(shù)量迅速增加，這就給小反芻獸疫的散布與傳播提供了條件。PPR屬于外來病，我國暫時(shí)沒有施行疫苗免疫，缺乏免疫屏障，由于從外省引進(jìn)未經(jīng)檢疫的羊，長(zhǎng)途運(yùn)輸更是刺激發(fā)病的重要因素，必然會(huì)暴發(fā)疫情。綜上所述，小反芻獸疫的防控形勢(shì)嚴(yán)峻，必須抓好檢疫關(guān)，加大對(duì)羊群調(diào)運(yùn)的監(jiān)管力度。

參考文獻(xiàn)：

[1] 石巖，翁善鋼.小反芻獸疫的流行、診斷與防控[J].中國畜牧獸醫(yī)，2013，40（4）：231-234.

[2] 信愛國，楊仁標(biāo)，向文彬.小反芻獸疫研究進(jìn)展[J].中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2003，25（2）：73-76.

[3] Food and Agriculture Organization of the United Nat ions（FAO）. Recognizing Peste des Petits Ruminants： a field manua[Z]. Rome： FAO，2000.

[5] 王志亮，包靜月，吳曉東，等.我國首例小反芻獸疫診斷報(bào)告[J].中國動(dòng)物檢疫，2007，24（8）：24-28.