摘要：為了解湖北某地區(qū)豬場內豬繁殖與呼吸綜合征的血清抗體狀況，應用ELISA試劑盒對2014年3月至2014年9月來自10個規(guī)模場、2個屠宰場、24個散戶的豬血清樣品進行了檢測。共檢測血清732份，檢出陽性血清501份，合格率68.44%。數據顯示規(guī)模場的豬繁殖與呼吸綜合征抗體合格率明顯高于散養(yǎng)戶，應采取多種措施以提高散養(yǎng)戶的抗體合格率。

關鍵詞：豬繁殖與呼吸綜合征；血清學調查；ELISA

中圖分類號：S858.28 文獻標識碼：B 文章編號：1007-273X（2014）10-0010-02

豬繁殖與呼吸綜合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS）是近年發(fā)現的一種新的病毒性傳染病，由動脈炎病毒科的豬繁殖與呼吸綜合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV）引起，臨床上以母豬發(fā)熱、厭食、早產、流產、死胎、弱仔等繁殖障礙及各種年齡豬的呼吸系統(tǒng)疾病和高死亡率為特征[1]。國內許多省市已有該病的發(fā)生和流行，且流行的范圍越來越廣，病情越來越嚴重，成為規(guī)模化養(yǎng)豬場繁殖障礙的主要疫病之一，給我國養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展造成了巨大損失[2]。通過應用ELISA方法對2014年3月至2014年9月期間來自湖北省某地區(qū)豬場送檢的豬血清進行了PRRS抗體檢測和分析。

1 材料與方法

1.1 被檢血清

2014年3月至2014年9月由湖北省某地區(qū)送檢的732份血樣，其中502份來自10個規(guī)模豬場，34份來自2個屠宰場，196份來自24個散養(yǎng)戶，被檢血樣按母豬、育肥豬、保育豬、仔豬分類，母豬群不分經產初產，血樣經離心后分離血清，進行PRRS抗體檢測。

1.2 檢測試劑 豬繁殖與呼吸綜合征ELISA檢測試劑盒為美國IDEXX公司產品，購自北京愛德士元亨生物科技有限公司。

1.3 操作方法

（1）取出抗原包被板，在記錄表上記錄樣本的位置。

（2）在包被孔內加入100 μL沒有稀釋的陰性對照，每次檢測加兩孔。

（3）在包被孔內加入100 μL沒有稀釋的陽性對照，每次檢測加兩孔。

（4）在相應的孔中加入100 μL已稀釋好的樣本。

（5）18～25 ℃孵育：（30）min。

（6）吸取各孔的液體棄入廢液筒。

（7）用大約300 μL洗滌液洗滌板孔，共洗滌3～5次。每次洗滌后應吸去孔內的液體（注意：應避免包被孔干燥。在最后一次洗滌液吸去后，將每塊板中殘留的洗滌液扣拍到吸水材料上）。

（8）每孔加入100 μL辣根過氧化物酶標記的抗豬IgG 抗體。

（9）18～25 ℃孵育30min。

（10）重復步驟（6）和（7）。

（11）每孔加入100 μLTMB底物液。

（12）18～25 ℃孵育15min。

（13）每孔加入100 μL 終止液，終止反應。

（14測量并且記錄樣本和對照的吸光度OD650nm。

（15）計算結果。

1.4 結果判定

檢測結果判定：陽性對照的OD650nm減去陰性對照的OD650nm必須大于或等于0.150；此外，陰性對照的平均值（NCx）必須小于或等于0.150，判定為有效，否則判結果無效。PRRS抗體的檢測結果根據樣品與陽性對照的比值S/P計算：S/P=（樣品PRRS孔OD值-樣品NHC孔OD值）/（陽性對照PRRS孔OD值-陽性對照NHC孔OD值），當S/P≥0.4時被檢樣品判為陽性，當S/P<0.4時被檢樣品判為陰性。

2 結果與分析

2.1 規(guī)?；i場抗體檢測結果

對湖北省某地區(qū)送檢的規(guī)?；i場血清進行PRRS抗體檢測。檢測結果（表1）表明，規(guī)模豬場送檢502份血清，陽性血清可達408份，合格率81.27%，其中有7個規(guī)模豬場的合格率達85%以上。

2.2 屠宰場抗體檢測結果

對送檢的屠宰場血清進行PRRS抗體檢測。檢測結果表明，屠宰場送檢34份血清，陽性血清只有8份，合格率僅為23.53%。

2.3 散養(yǎng)戶豬場抗體檢測結果

對來自24個散養(yǎng)戶196份血清進行PRRS抗體檢測，陽性血清有85份，合格率為43.37%。

2.4 不同日齡豬PRRS抗體檢測結果

將732份血清按不同年齡分群，不同年齡段的豬血清中PRRS抗體合格率差異較大，母豬、育肥豬、保育豬、仔豬的血清抗體合格率分別為96.55%、61.78%、89.58%、85.42%（表2）。

2.5 某種畜場豬PRRS抗體跟蹤檢測結果

從2014年5月到9月，對來自某種畜場140份血清進行檢測，其中來自母豬的血清有44份，保育豬的有48份，仔豬的有48份，合格率分別為100%，79.17%，85.42%（表3）。

3 小結與討論

本試驗采用的進口ELISA試劑盒，具有靈敏性高、特異性強、穩(wěn)定性良好等特點，使檢測結果更加可靠準確，真實地反映出PRRS抗體水平的高低。

通過對來自10個規(guī)模場，2個屠宰場，24個散戶的732份血清進行了檢測，PRRS抗體合格率為68.44%，稍低于國家規(guī)定的70%以上的要求。但規(guī)模養(yǎng)殖戶的合格率遠高于散養(yǎng)戶，達81.27%，大部分規(guī)模戶抗體合格率達85%以上，而散養(yǎng)戶抗體合格率僅為43.37%，這可能與規(guī)模戶的重視程度高，免疫規(guī)范，合理養(yǎng)殖有關。屠宰場34份血清抗體合格率只有23.53%，這可能首免120 d后，抗體水平處于下降期有關，與田召芳等[3]報道的結果相一致。

對不同年齡段的732份血清進行PRRS抗體檢測，母豬的抗體合格率最高，其次是仔豬和保育豬，而育肥豬的抗體水平最低。通過對某豬場的跟蹤檢測也得出同樣結果，且該豬場抗體水平高，抗體滴度均勻度小。特別是母豬，5個月的檢測，其抗體合格率始終保持在高水平，與周平等[4]報道的結果相符。

血清抗體的監(jiān)測是目前對免疫質量進行評價或對疫情進行預警預報和風險評估的常用方法，定期對豬場豬繁殖與呼吸綜合征進行抗體監(jiān)測，對于了解豬場PRRS抗體水平變化和進行免疫效果評估，制定科學合理的免疫程序，指導生豬養(yǎng)殖，特別是對指導散養(yǎng)戶養(yǎng)殖，都是十分有利的。

參考文獻：

[1] 方六榮.豬繁殖與呼吸綜合征“自殺性”DNA疫苗與活病毒載體疫苗研究[D].武漢：華中農業(yè)大學，2003.

[2] 范京惠，劉 媛，左玉柱.河北省豬繁殖與呼吸綜合征血清學調查[J].畜牧與獸醫(yī)，2011，43（3）： 69-70.

[3] 田召芳，柳 林，李春蕾，等.煙臺地區(qū)高致病性豬藍耳病抗體水平及疫苗免疫效果調查[J].中國畜牧雜志，2010，46（6）： 68-70.

[4] 周 平，張華全，羅才慶，等. 2011 年龍巖地區(qū)部分豬場豬病血清學調查情況[J].養(yǎng)豬，2012 （3）： 116-118.