摘要：從浙江省某規(guī)模豬場(chǎng)病死仔豬肝臟中分離到1株病原菌，通過(guò)細(xì)菌形態(tài)和培養(yǎng)特性觀察、動(dòng)物攻毒試驗(yàn)、生化鑒定表明該分離菌株為變形桿菌。藥敏試驗(yàn)表明，該分離菌株對(duì)頭孢曲松敏感，對(duì)大多數(shù)抗菌藥物不敏感。

關(guān)鍵詞：變形桿菌；分離鑒定；藥敏試驗(yàn)

中圖分類(lèi)號(hào)：S852.61 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1007-273X（2014）10-0026-02

變形桿菌廣泛存在于環(huán)境中，是一種條件致病菌，可引起人和多種動(dòng)物發(fā)病。變形桿菌屬于腸桿菌科，包括普通變形桿菌、奇異變形桿菌、莫根變形桿菌、雷極變形桿菌和無(wú)恒變形桿菌[1]。其中豬的變形桿菌病主要是由奇異變形桿菌引起的。該菌為革蘭氏陰性短桿菌，形態(tài)多樣，有時(shí)呈球形或絲狀，該菌對(duì)營(yíng)養(yǎng)要求不高，生長(zhǎng)速度較快，在固體培養(yǎng)基上呈遷徙性、擴(kuò)散性生長(zhǎng)，形成鋪滿整個(gè)平板、厚薄交替的層層波狀菌苔。近年來(lái)，我國(guó)對(duì)人和豬、雞、牛發(fā)生變形桿菌的報(bào)道逐漸增多。作為規(guī)?；i場(chǎng)環(huán)境中的優(yōu)勢(shì)細(xì)菌[2]，變形桿菌已成為危害我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)的一種新的細(xì)菌。對(duì)變形桿菌進(jìn)行分離鑒定，明確變形桿菌所引起的疾病在規(guī)模豬場(chǎng)中的流行情況，對(duì)疾病的防治具有重要意義。

2014年9月，浙江省某規(guī)模豬場(chǎng)的部分初生仔豬相繼發(fā)病并死亡，臨床癥狀以拉稀為主，糞便黃、綠色，稀糊狀或水樣，部分病豬關(guān)節(jié)有膿胞。曾用多種藥物進(jìn)行治療，效果均不理想。經(jīng)流行病學(xué)、細(xì)菌學(xué)、病理學(xué)綜合診斷，確診為仔豬變形桿菌病?，F(xiàn)將其報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 樣品的采集

病料來(lái)源于浙江某規(guī)?；i場(chǎng)，無(wú)菌采取某病死仔豬的肝臟作為待檢材料。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物

20 g左右的普通級(jí)成年昆明小鼠，購(gòu)自金華市藥監(jiān)所。

1.3 培養(yǎng)基

試驗(yàn)所用培養(yǎng)基（普通營(yíng)養(yǎng)肉湯、普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板、麥康凱瓊脂平板、鮮血瓊脂平板等）購(gòu)自青島百博生物有限公司。

1.4 藥敏試紙及試劑

慶大霉素等22種常用抗生素藥敏試紙片，購(gòu)自杭州微生物試劑有限公司；細(xì)菌微量生化反應(yīng)管，購(gòu)自杭州天和微生物試劑有限公司，批號(hào)20131120。

1.5 細(xì)菌的分離培養(yǎng)及形態(tài)觀察

無(wú)菌操作，用接種環(huán)挑取病死仔豬肝臟內(nèi)部組織劃線接種于鮮血瓊脂平板上，于37 ℃培養(yǎng)24 h后，挑取優(yōu)勢(shì)菌落再分別接種于鮮血瓊脂平板和麥康凱瓊脂平板，37 ℃條件下培養(yǎng)24 h，觀察細(xì)菌生長(zhǎng)情況。挑取純培養(yǎng)物進(jìn)行革蘭氏染色和鏡檢。

1.6 生化鑒定

挑取純培養(yǎng)物按常規(guī)方法[3]進(jìn)行生化試驗(yàn)，觀察并記錄結(jié)果。

1.7 動(dòng)物攻毒試驗(yàn)

取分離菌接種于普通營(yíng)養(yǎng)肉湯，37 ℃培養(yǎng)24 h，腹腔接種5只小白鼠，0.2 mL/只，對(duì)照組注射等量的普通營(yíng)養(yǎng)肉湯，觀察其精神狀態(tài)、食欲等，記錄小白鼠的死亡時(shí)間。

1.8 藥敏試驗(yàn)

用K-B紙片擴(kuò)散法進(jìn)行藥敏試驗(yàn)[4]，用滅菌棉簽將菌液均勻涂布于培養(yǎng)基表面，至菌液被完全吸收后，將不同的藥敏紙片貼在培養(yǎng)基的適當(dāng)位置。37 ℃培養(yǎng)24 h，觀察并記錄抑菌情況。

2 結(jié)果與分析

2.1 細(xì)菌的培養(yǎng)特性

分離到的細(xì)菌在普通營(yíng)養(yǎng)肉湯、麥康凱瓊脂平板、鮮血瓊脂平板上均能生長(zhǎng)。在鮮血瓊脂平板上，血瓊脂顏色變暗紅，有一股特殊臭味，細(xì)菌遷徙性生長(zhǎng)覆蓋整個(gè)平皿，呈半透明波紋狀菌苔，無(wú)溶血現(xiàn)象。在麥康凱瓊脂平板上無(wú)遷徙性、擴(kuò)散性生長(zhǎng)現(xiàn)象，呈均勻圓形、半透明的單個(gè)無(wú)色菌落；在普通營(yíng)養(yǎng)肉湯中，呈均勻混濁樣，管底可見(jiàn)少量沉淀。

2.2 細(xì)菌的形態(tài)特點(diǎn)

該分離菌革蘭氏染色呈陰性，在顯微鏡下可見(jiàn)粉紅色短桿菌，多形態(tài)，但較為一致。

2.3 細(xì)菌的生化特性

由表1可見(jiàn)，該分離菌符合變形桿菌的生化特征。

注：“+”表示阻性，“-”表示陰性。

2.4 動(dòng)物攻毒試驗(yàn)

腹腔注射菌液4 h后，試驗(yàn)組小白鼠精神不振，活動(dòng)能力下降；24 h后試驗(yàn)組小白鼠死亡2只；48 h后試驗(yàn)組小白鼠全部死亡。對(duì)照組小白鼠未出現(xiàn)任何異常。檢查死亡小白鼠，可見(jiàn)肛門(mén)處有稀便粘著、肝臟、心臟具細(xì)小出血點(diǎn)。從死亡小白鼠的肝、脾中分離到的細(xì)菌，其培養(yǎng)特性、形態(tài)特征與之前死亡仔豬肝臟分離到的細(xì)菌一致。

2.5 細(xì)菌的藥敏試驗(yàn)

分離菌株對(duì)頭孢曲松最敏感，其次為多黏菌素B，對(duì)環(huán)丙沙星、氧氟沙星、氟哌酸、慶大霉素、丁胺卡那霉素、強(qiáng)力霉素、卡那霉素、氯霉素、林可霉素、先鋒5號(hào)、痢特靈、磺胺等藥物均不敏感。

3 小結(jié)與討論

目前，規(guī)模豬場(chǎng)中仔豬腹瀉很普遍，是引起仔豬死亡的一個(gè)重要原因。應(yīng)對(duì)關(guān)鍵在于能夠盡快查清病原，選擇合適的藥物進(jìn)行及時(shí)準(zhǔn)確的治療。但是現(xiàn)在很多豬場(chǎng)對(duì)疾病的治療多是憑經(jīng)驗(yàn)自行選藥，用藥不夠規(guī)范，抗生素濫用情況非常嚴(yán)重，容易產(chǎn)生耐藥性，給細(xì)菌病的治療帶來(lái)困難，豬場(chǎng)損失嚴(yán)重。從本試驗(yàn)中可以看到，分離到的變形桿菌對(duì)大多數(shù)藥物均不敏感，如果不在藥敏試驗(yàn)的結(jié)果指導(dǎo)下合理選擇治療藥物，將會(huì)非常盲目。變形桿菌作為條件性致病菌廣泛存在于豬場(chǎng)環(huán)境中，當(dāng)豬只抵抗力低時(shí)可以通過(guò)消化道、呼吸道等途徑傳播。該病已經(jīng)成為危害養(yǎng)豬業(yè)的一種新的細(xì)菌性傳染病，變形桿菌耐藥性強(qiáng)，且其作為人畜共患傳染病病原，應(yīng)當(dāng)引起豬場(chǎng)的高度重視。

參考文獻(xiàn)：

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[3] 姚火春.獸醫(yī)微生物實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)[M].第二版.北京： 中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2010.

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