摘要：本文建立HPLC法對(duì)肉品中喹乙醇代謝物（3-甲基喹噁琳-2-羧酸）的檢測(cè)方法。樣品用2.5 mol/L鹽酸水解，固相萃取凈化，紫外檢測(cè)器檢測(cè)，外標(biāo)法定量。喹乙醇代謝物在質(zhì)量濃度0.01-1.0ug/mL的范圍內(nèi)呈線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)為0.9999，檢出限為4.2 ug/kg，定量限為12.5 ug/kg。喹乙醇代謝物回收率在71.0%-86.5%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在3.25%-8.62%之間。

關(guān)鍵詞：HPLC 喹乙醇 肉類(lèi)

中圖分類(lèi)號(hào)：S816 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1672-5336（2014）20-0014-02

喹乙醇是一種畜禽飼料添加劑，合理使用可以縮短養(yǎng)殖周期、降低飼養(yǎng)成本，但其也有一定的毒性，會(huì)隨動(dòng)物種屬不同存在一定差異，特別對(duì)禽和魚(yú)類(lèi)有較明顯蓄積和遺傳毒性。因使用劑量過(guò)大、重復(fù)用藥等原因，畜禽中毒事件時(shí)有發(fā)生。

常用的檢測(cè)方法主要有GC-MS法、LC-MS/MS法以及HPLC法。雖然前兩種方法對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確度及靈敏度較高，但儀器價(jià)格較高，普通科研機(jī)構(gòu)負(fù)擔(dān)較大。而HPLC法對(duì)操作而言較為簡(jiǎn)便，且靈敏度能達(dá)到檢測(cè)要求，但按國(guó)標(biāo)方法GB/T20797-2006肉與肉制品中喹乙醇?xì)埩袅康臏y(cè)定方法則存在稱樣量大，前處理過(guò)程較復(fù)雜，費(fèi)時(shí)費(fèi)力，且回收率較較低，對(duì)儀器維護(hù)保養(yǎng)和檢測(cè)數(shù)據(jù)均不利。本文對(duì)該方法作了改進(jìn)，減少了稱樣量，得到了較好的回收率。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

（1）試劑：喹乙醇標(biāo)準(zhǔn)品（>99.6%）美國(guó) sigma公司；鹽酸（分析純）杭州化學(xué)試劑有限公司；甲醇、乙酸乙酯、甲酸（均為色譜純）美國(guó)sigma公司；乙酸鈉（分析純）溫州潤(rùn)華化工實(shí)業(yè)公司。（2）儀器：Agilent 1100高效液相色譜儀；Oasis MAX 3cc固相萃取柱離心機(jī)；可變波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)品溶液配制及樣品液處理

（1）喹乙醇標(biāo)準(zhǔn)品溶液制備：喹乙醇標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：用萬(wàn)分之一天平稱取適量喹乙醇標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇-甲酸溶液 （40：60V/V）溶解，配制成100ug/mL標(biāo)準(zhǔn)液。標(biāo)準(zhǔn)工作液：取適量喹乙醇標(biāo)準(zhǔn)液，用上述甲醇-甲酸溶液稀釋至1.0mL，然后分別配制成0.01，0.05，0.25， 0.5，1.0ug/mL梯度的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。提取液：洗脫液：2%甲酸-乙酸乙酯溶液2.0mo1/L；淋洗液：0.05mol/L乙酸鈉-甲醇溶液；鹽酸水溶液。（2）樣品液處理：取適量肉制品搗碎，混合均勻后，稱取5g，置于5OmL離心管中，加入15mL 2.0mo1/L鹽酸溶液，混勻后，放置于恒溫水浴鍋（60℃）恒溫震蕩酸解半小時(shí)，然后在4℃環(huán)境中10000r/min離心l0min。取上清液過(guò)0.2um濾膜濾于另支離心管中，反復(fù)多次進(jìn)行HPLC檢測(cè)。

1.2.2 色譜條件

色譜柱XTerra Ms C18 3.5μm，2.1mm×100 mm，流速：0.3ml/min，流動(dòng)相：甲醇∶水=20∶80，柱溫32℃，檢測(cè)波長(zhǎng)260nm，進(jìn)樣量：10μl。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

取梯度標(biāo)準(zhǔn)工作液，以進(jìn)樣濃度C（ug/mL）為橫坐標(biāo)X，以峰面積A為縱坐標(biāo)Y作標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明，標(biāo)準(zhǔn)工作溶液在0.01-1.0ug/mL范圍內(nèi)有良好線性關(guān)系。線性回歸方程為：Y=-0.13+68.67X（r=0.9999， n=6）。

1.4 數(shù)據(jù)處理

應(yīng)用MATLAB Origin軟件處理數(shù)據(jù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 喹乙醇標(biāo)準(zhǔn)液和肉品色譜

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)譜圖如圖1所示，肉樣波峰如圖2所示。

2.2 線性范圍與檢出限

按方法規(guī)定稱樣量和定容體積進(jìn)樣測(cè)定。根據(jù)檢測(cè)限測(cè)定信噪比應(yīng)大于3的原理，檢出限和定量限分別得出為4.2ug/kg和12.5ug/kg，與國(guó)標(biāo)方法基本一致，可滿足目前檢測(cè)機(jī)構(gòu)對(duì)肉制品的檢測(cè)要求。

2.3 回收率與精密度

按三平行法取4份肉樣，結(jié)果為：回收率在71.0%—86.5%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在3.25%-8.62%，見(jiàn)表1。

3 討論

本文通過(guò)選定適宜的色譜條件，以及通過(guò)回收率和精密度的測(cè)定，建立了HPLC方法進(jìn)行肉制品中喹乙醇的準(zhǔn)確測(cè)定。該檢測(cè)方法具有回收率較高，且靈敏度好等優(yōu)點(diǎn)。除此之外，與國(guó)標(biāo)檢測(cè)方法的復(fù)雜、操作不方便相比，該檢測(cè)方法很好地實(shí)現(xiàn)了快速檢測(cè)。但是該檢測(cè)方法仍然有待進(jìn)一步的優(yōu)化，在后續(xù)的實(shí)驗(yàn)中，需要繼續(xù)摸索，使之形成一個(gè)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)?、易操作的檢測(cè)方法。

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