王曉娟

(錫盟藥檢所，內(nèi)蒙古 錫林浩特 026000)

蒙成藥給希古那－5由紅花、大黃、赤瓟、高良姜、當(dāng)歸等5味藥組成。處方中大黃為主藥成分，大黃素可作為給希古那－5中含量的指標(biāo)成分。本文采用HPLC方法對大黃素進(jìn)行測定。

1 儀器、材料與試劑

島津SIL－20A高效液相色譜儀。大黃素對照品由中國藥品生物制品檢定所提供;給希古那－5由西烏旗蒙醫(yī)院提供，給希古那－5模擬樣品自制。乙睛、甲醇為色譜純，水為高純水，其他試劑均為分析純。

2 含量測定

2.1 色譜條件:色譜柱天河 C18(250mm ×4.5mm，5μm);流動(dòng)相乙腈－水－冰醋酸(65:35:1);檢測波長437nm;柱溫40℃。

2.2 提取方法及提取效率的考察

2.2.1 提取方法的選擇:取本品粉末約2.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25mL，稱定重量，加熱回流30min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液5mL，置錐形瓶中，揮去甲醇，加2.5mol/L硫酸溶液10mL，超聲處理5min，加三氯甲烷10mL，加熱回流1小時(shí)，冷卻，移置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗滌容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷層，酸液用三氯甲烷提取3次，每次8mL，合并三氯甲烷液，以無水硫酸鈉脫水，濾過，濾液揮干，殘?jiān)蒙倭考状既芙?，轉(zhuǎn)移至10mL量瓶中，用甲醇稀釋到刻度，即得。

2.2.2 提取效率的考察:稱取樣品粉末6份各約2.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25mL，稱定重量，加熱回流30min、60min各3份，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液5mL，置錐形瓶中，揮去甲醇，各加2.5mol·L－1硫酸溶液10mL，超聲處理5min，分別加三氯甲烷10mL，分別將第一次回流時(shí)間為30min、60min的各3份溶液再分別加熱60min、90min和120min，冷卻，移置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗滌容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷層，酸液用三氯甲烷提取3次，每次8mL，合并三氯甲烷液，以無水硫酸鈉脫水，濾過，濾液揮干，殘?jiān)蒙倭考状既芙?，轉(zhuǎn)移至10mL量瓶中，用甲醇稀釋到刻度，即得。結(jié)果見表1。

表1 提取效率的考察表

從表中數(shù)據(jù)可見，第一次回流30min、第二次回流60、90和120min，大黃素的含量基本穩(wěn)定且提取效率好，故2次回流提取時(shí)間分別定為30min、60min。

2.3 專屬性

2.3.1 精密稱取大黃素對照品 12.61mg、本品粉末 2.0g及模擬陰性對照樣2.0g，按2.2.1項(xiàng)下方法制備，分別取10μL注入液相色譜儀，進(jìn)行測定。

2.3.2 測定結(jié)果:陰性對照色譜圖中在與大黃素對照品以及供試品色譜圖相對應(yīng)的保留時(shí)間處無色譜峰出現(xiàn)，表明其他組分對大黃素的測定無干擾。

2.4 線性關(guān)系考察:大黃素 精密稱取大黃素對照品2.50mg置100mL量瓶中，分別加甲醇適量使溶解，并加甲醇稀釋至刻度，搖勻(每1mL含25μg)精密吸取大黃素對照品溶液各 0.25、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0mL 置 10mL 量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻 ，各取20μL，按上述色譜條件測定，以峰面積A對進(jìn)樣量進(jìn)行回歸分析，得大黃素回歸方程為 Y=988950X+5460，R2=0.9990;結(jié)果表明，大黃素在0.0125μg～0.4000μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一份供試品，按2.2項(xiàng)下方法制備，精密量取10μL注入液相色譜儀，按2.1項(xiàng)下色譜條件條件測定，分別于0、2、4、8、12、24h 進(jìn)樣，結(jié)果表明供試品在24h內(nèi)穩(wěn)定。見表2。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn):取同一批號(hào)供試品(批號(hào):20090405)6份，精密稱取 2.0g，按 2.2.1 項(xiàng)下方法制備，取 10μL 注入液相色譜儀，進(jìn)行含量測定，測得大黃素含量為0.3165、RSD0.89%。

表2 不同時(shí)間測定樣品中大黃素的峰面積積分值

2.7 回收試驗(yàn):供試品溶液的制備 取供試品(批號(hào)20090405 含量 0.3165 mg·g－1)9 份，各約0.5g，精密稱定，分別置9個(gè)具塞錐形瓶中，在1～3、4～6、7～9號(hào)分別加入濃度為 3.035、6.07、8.93μg·mL－1的大黃素甲醇溶液，分別精密吸取上述溶液各20μL注入液相色譜儀進(jìn)行測定。平均回收率分別為107.82、99.82、94.65%，RSD 為0.67、0.63、1.69%。

3 樣品含量測定

取本品2.0g，按2.2項(xiàng)下方法制備，取10μL注入液相色譜儀，按2.1項(xiàng)下色譜條件測定。結(jié)果見表3。

表3 樣品中大黃含量測定結(jié)果

4 小結(jié)

4.1 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:大黃素的檢測保留時(shí)間為9.85min;而陰性對照溶液在此處未出現(xiàn)檢測峰。說明樣品中的其他藥材不干擾大黃素的測定。

4.2 參照《中國藥典》2005年版一部“大黃”和“三黃片”含量測定項(xiàng)下的流動(dòng)相和檢測波長，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，分離效果不好，故采用現(xiàn)在的流動(dòng)相比例和檢測波長進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

［1］國家藥典委員會(huì).中國藥典版一部［S］.化學(xué)工業(yè)出版社，2005，3、17、328

［2］國家藥典委員會(huì).中國藥典二部［S］.化學(xué)工業(yè)出版社，2005，776

［3］內(nèi)蒙古衛(wèi)生廳.內(nèi)蒙古蒙藥材標(biāo)準(zhǔn)［S］.內(nèi)蒙古科學(xué)技術(shù)出版社，1986，448、498

［4］內(nèi)蒙古食品藥品檢驗(yàn)所.內(nèi)蒙古蒙藥制劑規(guī)范第一冊［M］.內(nèi)蒙古人民出版社，2007，39、226