薩仁高娃 吳雙英 白玉霞

(1.內(nèi)蒙古民族大學(xué)附屬醫(yī)院，內(nèi)蒙古 通遼 028041; 2.內(nèi)蒙古民族大學(xué)蒙醫(yī)藥學(xué)院，內(nèi)蒙古 通遼 028041)

蒙藥黃柏－8味散由黃柏、香墨、梔子、甘草、紅花、蓽茇?fù)?、黑云香、牛膽粉?味蒙藥組成的傳統(tǒng)蒙藥制劑，具有清熱涼血、固精之功效。臨床上主要用于腎熱、尿路感染、尿中帶血、經(jīng)下過多等病癥［1］。運(yùn)用HPLC法測(cè)定鹽酸小檗堿的含量。本方法精密度高，分離效果良好，平均加樣回收率為98.17%，RSD=0.50%;為蒙藥黃柏－8味散的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定奠定了良好的基礎(chǔ)。

1 儀器與材料

1.1 儀器:日本島津產(chǎn)LC－10ATVP型高效液相色譜儀(雙泵、二極管陣列檢測(cè)器);KQ－100型超聲波清洗器(昆山市超聲波儀器有限公司);電子天平 AUW220D(Max 220g d=0.01 mg)日本島津公司。

1.2 試藥:黃柏－8味散:內(nèi)蒙古蒙醫(yī)藥學(xué)院附屬醫(yī)院(070314，080811)，自制的蒙藥黃柏 －8味散按文獻(xiàn)［1］方法制備，小檗堿對(duì)照品:中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)110713－200708，流動(dòng)相用乙腈為色譜純，水為重蒸餾水;其余溶劑均為分析純。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 色譜條件［2，3］:LC －10ATVP 泵，SPD － M10AVP 檢測(cè)器，SCL－10AVP工作站，VP－ODS柱(250mm ×4.6μm);流動(dòng)相:乙腈－0.5%三乙胺水溶液用磷酸調(diào) PH3(28:72)［2］;流速 1.0 mL·min－1;柱溫 25℃;檢測(cè)波長(zhǎng) 345nm，在此條件下，樣品中小檗堿與其它成分達(dá)到基線分離。結(jié)果見圖1。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備［2］:精密稱取鹽酸小檗堿對(duì)照品3.01mg，置10mL容量瓶?jī)?nèi)，加甲醇3.0mL溶解，精密吸取此液1.0mL置50mL容量瓶中加甲醇至刻度即得20.067μg·mL－1的標(biāo)準(zhǔn)溶液。精密吸取鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液5.0μL;7.5μL;10.0μL;12.5μL;15.0μL 進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，按峰面積積分值對(duì)濃度進(jìn)行線型回歸計(jì)算，得標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為 A=1996763C －3470.5，r=0.9999。結(jié)果表明小檗堿在0.10034～0.30101μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，結(jié)果見表1。小檗堿對(duì)照品圖見圖3。

表1 小檗堿進(jìn)樣量(μg)與峰面積(A)的關(guān)系

2.3 空白干擾實(shí)驗(yàn):按黃柏－8味散處方比例稱取除黃柏以外的其它藥材適量，依照供試品溶液的制備工藝制備陰性對(duì)照溶液，在相同的色譜條件下測(cè)定，陰性對(duì)照溶液在小檗堿出峰位置上無干擾。結(jié)果見圖2。

圖1 黃柏—8味散樣品色譜圖

圖2 樣品陰性對(duì)照品色譜圖

圖3 小檗堿對(duì)照品色譜圖

2.4 精密度實(shí)驗(yàn):取濃度為20.067μg·mL－1的對(duì)照品溶液及樣品液各10μL，分別進(jìn)樣，重復(fù)5次測(cè)定峰面積。結(jié)果為對(duì)照品RSD=0.85%，樣品RSD=1.16% 。

2.5 重復(fù)性實(shí)驗(yàn):取同一批號(hào)樣品5份，按樣品測(cè)定項(xiàng)下方法制備和測(cè)定，其RSD=1.07% 。

2.6 回收率試驗(yàn)［4］:精密稱取已知小檗堿的樣品5份(批號(hào)080811)，分別加入一定量的小檗堿對(duì)照品，按供試品處理方法處理后進(jìn)樣10μL測(cè)定，計(jì)算小檗堿回收率，結(jié)果見表2。

表2 樣品回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.7 提取方法的選擇

2.7.1 稱取供試品(批號(hào):070314)0.5g，加鹽酸 － 甲醇(1:100)40mL，回流 30min，濾過，精密吸取供試品液10μL，注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積，計(jì)算含量，結(jié)果見表3。

2.7.2 稱取供試品(批號(hào):070314)0.5g，加鹽酸 － 甲醇(1:100)40mL，浸泡30min，并超聲30min，濾過，精密吸取供試品液10μL，注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積，計(jì)算含量，結(jié)果見表3。

2.7.3 稱取供試品(批號(hào):070314)0.5g，加鹽酸 － 甲醇(1:100)40mL，超聲30min，濾過，精密吸取供試品液10μL，注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積，計(jì)算含量，結(jié)果見表3。

表3 不同提取方法供試品中小檗堿的含量

從表3結(jié)果分析，回流提取方法含量略高于超聲提取方法，但是回流提取進(jìn)樣后分離效果較差，故選用直接超聲提取方法。

2.8 供試品溶液的制備和測(cè)定［5］

2.8.1 供試品溶液的制備:稱取不同批號(hào)黃柏－8味散0.5g精密稱定重量置于100mL魔口瓶中，加鹽酸－甲醇(1:100)40mL超聲提取30min，過濾，加甲醇定容至50mL，搖勻，即得。

2.8.2 供試品溶液的測(cè)定:精密吸取供試品液10μL，注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積，計(jì)算含量，結(jié)果見表4。

表4 黃柏－8味散中小檗堿的含量(n=5)

3 討論

3.1 黃柏為黃柏－8味散中的主藥之一，占組方的23.81%，小檗堿為其主要活性成分之一。為提高藥品質(zhì)量確保療效，我們采用HPLC對(duì)黃柏－8味散進(jìn)行了小檗堿的含量測(cè)定，該HPLC法不經(jīng)分離，直接測(cè)定其中小檗堿的含量，方法簡(jiǎn)便快速，經(jīng)加樣回收試驗(yàn)及精密度試驗(yàn)，認(rèn)為結(jié)果可靠，為提高藥品質(zhì)量，該試驗(yàn)為黃柏－8味散的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究奠定了良好基礎(chǔ)。

3.2 黃柏－8味散由8味藥組成，本試驗(yàn)采用超聲提取法提取樣品，能使樣品中的小檗堿得到良好分離。此法簡(jiǎn)便，易于操作，為蒙成藥的質(zhì)量分析提供了簡(jiǎn)便易行的方法。

［1］中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)(蒙藥分冊(cè))［S］.1998.161.

［2］HPLC法測(cè)定蒙藥協(xié)日嘎－4湯中小檗堿的含量［J］.內(nèi)蒙古民族大學(xué)學(xué)報(bào)自然版(蒙文版)，2005，15(2):40－42.

［3］譚生建，魏萍，劉剛，等.HPLC測(cè)定黃柏石膏散中鹽酸巴馬丁和鹽酸小檗堿含量［J］.中國(guó)藥學(xué)雜志，2004，39(7):546.

［4］梁生旺.中藥制劑分析［M］.中國(guó)中醫(yī)藥出版社，2003.108.

［5］林瑞群，龍彬.連蒲黃雙清片中鹽酸小檗堿的含量測(cè)定［J］.今日藥學(xué)，2009，19(6):52－53.