摘要：改進(jìn)含食用膠的果汁飲料中合成色素的測定方法。樣品采用85%無水乙醇提取法，實驗采用C18色譜柱，以甲醇和乙酸銨為流動相，梯度洗脫，流速為1.0mL/min，檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃的檢測波長分別為430nm，520nm ， 510nm和480 nm。精密度及加標(biāo)試驗表明，以上四種合成色素的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為0.57% ～1.86%，回收率為99.4% ～104.8%。該法簡便，快速，準(zhǔn)確度高。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜 食用膠 果汁飲料 合成色素

中圖分類號：TS207.3 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1672-5336（2014）24-0000-00

市售果汁飲料中經(jīng)常添加食用膠如：果膠、黃原膠等，它們是飲料食品良好增稠和懸浮穩(wěn)定劑。同時，大部分果汁飲料中會添加人工合成色素來讓產(chǎn)品顏色鮮亮，誘人。然而人工合成色素多數(shù)屬于煤焦油或苯胺色素，無任何營養(yǎng)價值，而且絕大多數(shù)對人體有害。我國對在食品中添加合成色素有嚴(yán)格的限制，《食品添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》（GB2760—2007）[1]中對允許在食品中使用的合成色素的使用范圍和最大使用限量均有明確規(guī)定。采用國標(biāo)GB/T 5009 . 35 - 2003 [2]進(jìn)行檢測時，操作繁瑣費時，參考別的標(biāo)準(zhǔn)文獻(xiàn)[3]也無提及針對添加有食用膠的果汁飲料進(jìn)行處理的報道。因此，本文采用：樣品直接稀釋法、聚酰胺粉吸附法、85%乙醇溶液提取法來對含食用膠果汁飲料進(jìn)行前處理，用變波長高效液相色譜法檢測，建立一種快速準(zhǔn)確的同時檢測含食用膠的果汁飲料中四種合成色素（檸檬黃，莧菜紅，胭脂紅，日落黃）的高效液相色譜法。

1 材料與方法

1.1 材料

（1）供試果汁樣品；市場上購買的樹莓果汁，含果膠、黃原膠、羧甲基纖維素鈉。經(jīng)檢測，不含四種人工合成色素。移取0.5mg/mL的檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃標(biāo)準(zhǔn)溶液各4.0 mL加入到一定質(zhì)量的含食用膠樹莓果汁飲料中，配制成濃度為10mg/kg的供試果汁樣品。（2）儀器與試劑；主要儀器有：LC-20AT島津高效液相色譜儀；分析天平；紫外分光光度計；恒溫水浴鍋；G3垂融漏斗抽濾裝置；純水儀；臺式高速離心機(jī)。主要試劑有：檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（0.5mg/mL），國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究中心。

1.2 色譜條件

色譜柱：Inertsil ODS-3 （250mm×4.6mm×5μm）；流動相梯度洗脫程序見表1；紫外檢測器波長：0～ 6.5 min為430 nm，6.51～ 8.5 min為520 nm，8.51～ 11.8 min 為510 nm，11.9～ 13.0 min為480 nm；進(jìn)樣量：10μL；柱溫：35℃。

表1 流動相梯度洗脫條件

1.3 樣品前處理方法的選擇

（1）直接稀釋法；取樣品10g，加入純水混勻，定容至25mL，經(jīng)0.45μm濾膜過濾后，備用。（2）聚酰胺粉吸附法；取樣品10g，試樣溶液加熱至60℃，將1g聚酰胺粉加少許水調(diào)成粥狀，倒入試樣溶液中，攪拌片刻，以G3垂融漏斗抽濾，用60℃pH=4的水洗滌3次-5次，然后用甲醇-甲酸混合溶液洗滌3次-5次，再用水洗至中性，用乙醇-氨水-水混合溶液解析3次-5次，每次5 mL，收集解析液，加乙酸中和，蒸發(fā)至近干，加水溶解，定容至10 mL。經(jīng)0.45μm濾膜過濾，備用。（3）85%乙醇溶液提取法；取樣品10g，邊攪拌邊緩慢加入30mL 85%乙醇溶液，放置10min，轉(zhuǎn)移離心，6500r/min，離心10min。收集上清液，殘渣重復(fù)提取兩次，合并上清液。上清液80℃水浴，蒸發(fā)至5 mL左右，加水定容至10 mL。

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜條件的選擇

用紫外可見分光光度計對檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃四種色素的標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行全波長掃描，得到各色素的最大吸收波長分別為430，520，510，480 nm，同時它們在254nm也都有較大吸收，但是由于大部分含有苯環(huán)的物質(zhì)在254nm都有吸收，果汁樣品中的一些添加劑及天然色素對檢測有干擾，而在最大吸收波長處基本沒有干擾，并且靈敏度也很高，所以采用變波長來檢測。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

將各色素標(biāo)準(zhǔn)樣品在確定好的色譜條件下進(jìn)行進(jìn)樣， 以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)， 以相應(yīng)的色譜峰峰面積為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，線性范圍為3.125～100mg/L。根據(jù)儀器的3倍噪聲所對應(yīng)的濃度值計算出方法的檢出限。各組分的線性方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限見表2。

表2 各組分線性回歸方程、相關(guān)系數(shù)及檢出限

2.3 果汁樣品前處理方法對比分析結(jié)果

對樣品分別用樣品直接稀釋法（第一法），聚酰胺粉吸附法（第二法），85%乙醇溶液提取法（第三法）進(jìn)行前處理，按照確定的色譜條件對經(jīng)三種方法處理過的樣品進(jìn)樣檢測，結(jié)果見表 3。結(jié)果表明：第三法的準(zhǔn)確度及精密度要優(yōu)于其它兩種方法。并且，在具體的實驗操作過程中，第一法每個樣品前處理所消耗時間平均為5min，然而，含食用膠濃度高的樣品稀釋后仍無法通過濾膜，得不到適合進(jìn)樣的樣品；第二法平均消耗時間為80min，；第三法平均消耗時間為40min。因此，綜合考慮，本文認(rèn)為采用85%乙醇溶液提取法（第三法）效果最優(yōu)。

表3 四種組分的加標(biāo)回收率

3 結(jié)語

通過對樣品前處理方法和色譜條件進(jìn)行優(yōu)化，本文建立了一種采用變波長高效液相色譜法同時對含食用膠的果汁飲料中的檸檬黃、日落黃、莧菜紅、胭脂紅四種合成色素進(jìn)行檢測的方法，實驗結(jié)果表明，該方法精密度和準(zhǔn)確度高，檢出限低，靈敏度好，適合在日常檢測工作中推廣應(yīng)用。

參考文獻(xiàn)

[1] GB 2760-2007.食品添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2007.

[2] GB/T 5009.35-2003.食品中合成著色劑的測定[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2003.

[3] 程春梅，彭進(jìn)，董劉敏.高效液相色譜法同時檢測果汁飲料中的六種合成著色劑[J].食品科技，2011（10）：301-304.

收稿日期：2014-12-08

作者簡介：吳麗（1983—），女，河南新鄉(xiāng)人，碩士，畢業(yè)于河南師范大學(xué)，助理工程師，研究方向：食品檢驗。