摘要：本文建立了一種使用超高效液相色譜儀和三重四極桿質(zhì)譜儀聯(lián)用檢測水產(chǎn)品中硝基呋喃類代謝物的殘留量的測試方法。對四種硝基呋喃類代謝物殘留的線性、精密度、檢出限（LOD）、定量限（LOQ）進(jìn)行了驗證。3-氨基-2-惡唑酮（AOZ）、5-嗎啉甲基-3-氨基-2-惡唑烷基酮（AMOZ）、1-氨基-乙內(nèi)酰脲（AHD）和氨基脲（SEM）在1～200 μg/L內(nèi)線性良好，相關(guān)系數(shù)均大于0.999；分別用濃度為1 μg/L、10 μg/L和50 μg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行了重現(xiàn)性實驗，實驗結(jié)果表明連續(xù)6次進(jìn)樣保留時間和峰面積相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別在0.28 ～ 0.07%和4.76 ～ 1.68%間，檢測方法重現(xiàn)性良好；在經(jīng)樣品前處理后的魚肉基體中添加標(biāo)液，基質(zhì)加標(biāo)樣具有良好的響應(yīng)。

關(guān)鍵詞：硝基呋喃代謝物 獸藥殘留 水產(chǎn)品 超高效液相色譜儀 三重四極桿質(zhì)譜儀

中圖分類號：O657163 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1672-5336（2014）24-0000-00

硝基呋喃類藥物（Nitrofurans）是一類合成的抗菌藥物，它們作用于微生物酶系統(tǒng)，抑制乙酰輔酶A，干擾微生物糖類的代謝，從而起抑菌作用。目前在醫(yī)療上應(yīng)用較廣者有：呋喃西林、呋喃妥因和呋喃唑酮。呋喃西林只供局部應(yīng)用，后兩者則可供系統(tǒng)治療應(yīng)用。

本文使用島津超高效液相色譜儀LC-30A和三重四極桿質(zhì)譜儀LCMS-8050聯(lián)用，參考GB/T 21311-2007，建立了測定水產(chǎn)品中硝基呋喃代謝物，包括：3-氨基-2-惡唑酮（AOZ）、5-嗎啉甲基-3-氨基-2-惡唑烷基酮（AMOZ）、1-氨基-乙內(nèi)酰脲（AHD）和氨基脲（SEM）殘留量的檢測方法，供相關(guān)檢測人員參考。

1實驗部分

1.1儀器

本實驗使用島津超高效液相色譜儀LC-30A與三重四極桿質(zhì)譜儀LCMS-8050聯(lián)用。具體配置：LC-30AD×2輸液泵，DGU-20A5在線脫氣機(jī)，SIL-30AC自動進(jìn)樣器，CTO-30A柱溫箱，CBM-20A系統(tǒng)控制器，LCMS-8050三重四極桿質(zhì)譜儀，LabSolutions Ver.5.53色譜工作站。

1.2分析條件

液相色譜條件

色 譜 柱：Shimadzu Shim-pack XR-ODS III 2.0 mmI.D.×150 mm， 1.6 μm

流 動 相：A-（0.02%甲酸）水溶液；B-乙腈

流 速：0.4 mL/min

進(jìn)樣體積：20μL

柱 溫：40℃

洗脫方式：梯度洗脫，B相初始濃度為40%，時間程序：0-1.5，40%-95%；1.5-4.0，95%-40%。

1.3 樣品制備

標(biāo)準(zhǔn)溶液配制：硝基呋喃衍生化標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：3-氨基-2-惡唑酮（AOZ）、5-嗎啉甲基-3-氨基-2-惡唑烷基酮（AMOZ）、1-氨基-乙內(nèi)酰脲（AHD）和氨基脲（SEM）分別稱取10 mg四種物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)品，用乙腈溶解并定容至100 mL，得到濃度為100 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲備液。

樣品前處理方法：參考《GB/T 21311-2007 動物源性食品中硝基呋喃類藥物代謝物殘留量檢驗方法 高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法》。

2結(jié)果討論

2.1標(biāo)準(zhǔn)樣品的MRM

將濃度為1、5、10、20、50、100和200 g/L的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液，按1.2中的分析條件進(jìn)行測定，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，外標(biāo)法制作校準(zhǔn)曲線。四種硝基呋喃代謝物在1～200 g/L濃度范圍內(nèi)線性良好。相關(guān)系數(shù)均在0.9994以上。

2.2檢出限和定量限

配制濃度為5.0 g/L標(biāo)樣，直接進(jìn)樣分析，對上述測定結(jié)果剔除離群值后將各自的7 次測定結(jié)果計算硝基呋喃四種化合物的標(biāo)準(zhǔn)偏差S。此時檢出限MDL=3.14×S，定量限LOQ=4×MDL。測定結(jié)果如表1所示。

2.3重現(xiàn)性實驗

平行制備濃度為1 μg/L、10 μg/L和50 μg/L標(biāo)樣各6份，依次進(jìn)樣。得到統(tǒng)計結(jié)果如表5所示，四種目標(biāo)化合物的保留時間和峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別在0.28 ～ 0.07%和4.76 ～ 1.68%之間，檢測方法重現(xiàn)性良好。

2.4基質(zhì)加標(biāo)實驗

為了考察方法的靈敏度，在按照1.3中樣品制備方法提取凈化的空白魚肉基質(zhì)樣品中添加混合標(biāo)樣，加標(biāo)含量為0.5 μg/kg，該方法對基質(zhì)加標(biāo)樣品有良好的響應(yīng)。

3 結(jié)語

參考《GB/T 21311-2007 動物源性食品中硝基呋喃類藥物代謝物殘留量檢驗方法 高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法》，使用島津超高效液相色譜儀LC-30A和三重四極桿質(zhì)譜儀LCMS-8030聯(lián)用測定水產(chǎn)品中四種硝基呋喃代謝物殘留量。在經(jīng)樣品前處理后的魚肉基體中添加標(biāo)液，基質(zhì)加標(biāo)樣具有良好的響應(yīng)，滿足《GB/T 21311-2007 動物源性食品中硝基呋喃類藥物代謝物殘留量檢驗方法 高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法》的檢測要求。

參考文獻(xiàn)

[1]錢卓真，位紹紅，余穎，姜琳琳，魏博娟，蘇秀華.高效液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法測定鮑魚中硝基呋喃類代謝物殘留量[J].福建水產(chǎn)，2010年02期.

[2]祝偉霞，劉亞風(fēng)，梁煒.動物性食品中硝基呋喃類藥物殘留檢測研究進(jìn)展[J].動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2010年02期.

收稿日期：2014-11-16

作者簡介：黃宇（1978一），男，廣東廣州人，職稱：食品工程師，研究方向：食品工程，單位：廣東省食品檢驗所，從事食品檢測研究工作十年。