余德照等

摘 要：本文闡述利用鋅元素的特征譜線（鋅原子從基態(tài)到激發(fā)態(tài)在213.8 nm處有最大吸收），創(chuàng)建了原子吸收法測定桿菌肽鋅預混劑中鋅的含量，并對方法進行了驗證。結果表明，該方法在鋅離子濃度為0.25～1.00 μg/mL的范圍內，濃度與吸光度之間具有良好的線性關系，回歸方程為y=0.401x+0.0437 相關系數(shù)r=0.9975，且精密度高、平均回收率為100.1% RSD=2.0%。

關鍵詞：桿菌肽鋅預混劑；測定；鋅含量；原子吸收

桿菌肽鋅由鋅與桿菌肽絡合而成，主要以桿菌肽鋅預混劑的制劑形式在飼料中使用，有效成分為桿菌肽，其作用主要是抑制革蘭氏陽性菌的生長。鋅與桿菌肽絡合，有利于增加桿菌肽的穩(wěn)定性，因此鋅在本品的含量顯得尤為重要。中華人民共和國獸藥典[1]、歐洲藥典 （EP[2]）及USP藥典 [3]中只有對桿菌肽鋅原藥中有鋅含量測定方法。本實驗參照USP藥典35版“桿菌肽鋅”的原子吸收分光光度法，建立了桿菌肽鋅預混劑的鋅含量原子吸收分光光度測定法，并對方法進行了驗證。

1 儀器與試劑

1.1 儀器

電子天平（梅特勒-托利多AB135-S型）、攪拌器、原子吸收分光光度計（北京普析通用 TAS-990型）、乙炔（南平金山氣體有限公司）、空心陰極燈（北京普析通用）。氧化鋅工作基準物（含量：99.95%～100.05% 天津化學試劑研究所）；鹽酸（AR. 衡陽市凱信化工試劑有限公司）、15%桿菌肽鋅預混劑（批號P120810、P120709、 P120712、P120801綠康生化股份有限公司生產）、10%桿菌肽鋅預混劑（批號 P120704、P120706 、P120707綠康生化股份有限公司生產）。

1.2 試劑

1 mol/L鹽酸溶液：量取90 mL鹽酸溶液（AR.）至燒杯中加入900 mL超純水攪拌均勻，待冷卻后移入1 L容量瓶中，少量、多次蕩洗燒杯，洗液需全部移入容量瓶中，最后用超純水定容至刻度，搖勻。

0.01 mol/L鹽酸溶液：取1.00 mL的1 mol/L鹽酸溶液移至1 L容量瓶中，用超純水定容至刻度，搖勻。

0.001 mol/L鹽酸溶液：取1.00 mL的1 mol/L鹽酸溶液移至1000 mL容量瓶中，用超純水定容至刻度，搖勻。

鋅標準儲備液：精密稱定氧化鋅工作基準物3.11 g置于250 mL容量瓶中，加入1 mol/L鹽酸溶液80 mL使溶解，冷卻，用超純水稀釋至刻度，混勻，制成每毫升含10 mg鋅的鋅標準儲備液。

鋅標準中間液：精密吸取鋅標準儲備液1.00 mL移至100 mL容量瓶中，用0.001 mol/L HCL稀釋至刻度，混勻，配制成每毫升含100 μg鋅的鋅標準中間液。

2 方法與結果

2.1 測定方法

利用元素在乙炔焰中被轉化為基態(tài)原子蒸氣，且在一定的濃度范圍內蒸氣對該元素空心陰極燈發(fā)射的特征譜線的吸收強度與被測元素含量成正比的原理，在213.8 nm處測定各鋅溶液的吸光值，用外標法定量計算鋅含量。按照下式計算：

式中：C為依據標準曲線得出的供試品溶液濃度，單位μg/mL；

W為桿菌肽鋅樣品重量，單位mg。

2.2供試品溶液制備

取供試品約100 mg，精密稱定，置于100 mL容量瓶中，加入0.01 mol/L鹽酸溶解并稀釋至刻度，混勻。吸取此溶液1.00 mL移至100 mL容量瓶中，用0.001 mol/L鹽酸稀釋至刻度，混勻，即得。

2.3 鋅標準曲線的建立

分別精密吸取鋅標準中間液0.25 mL、0.50 mL、0.75 mL、1.00 mL分別移至100 mL容量瓶中，用0.001 mol/L HCL稀釋至刻度，混勻，即得0.25 μg/mL、0.50 μg/mL、0.75 μg/mL、1.00 μg/mL的鋅標準工作液。在乙炔焰中，以0.001 mol/L的HCL為空白進行基線校零，在213.8 nm處測定上述各鋅標準工作液的吸光度，以鋅標準工作液為橫坐標，對應的吸光度為縱坐標，繪制工作曲線。

結果見圖1。結果顯示：鋅標準品工作液濃度為0.25～1.00 μg/mL，線性回歸方程為y=0.401x+0.0437，相關系數(shù)r=0.9975。

2.4 樣品測定范圍的確認

精密稱定15%桿菌肽鋅預混劑供試品（批號P120810）約40 mg、70 mg、100 mg、130 mg、160 mg于100 mL量瓶中，加入0.01 mol/L鹽酸溶解并稀釋到刻度，混勻。分別吸取此溶液1 ml到100 mL量瓶中，用0.001 mol/L鹽酸稀釋至刻度，混勻，制得每毫升含4 μg、7 μg、10 μg、13 μg和16 μg的供試品溶液。在乙炔焰中，以0.001 mol/L HCL為空白進行基線校零，測定供試驗品溶液吸光度。以供試品稱量為橫坐標，對應供試品溶液的吸光度為縱坐標，繪制線性曲線。

結果見圖2。得到供試品稱量范圍在40 ～160 mg，回歸方程為y=0.0023x+0.0479 相關系數(shù)r=為0.9967。

2.5 精密度試驗

兩分析員在不同天測定，每人每天平行測定6次。結果見表1。單人6次測定結果的RSD分別為0.7%，0.8%，兩人12次測定結果的RSD為1.0%。

2.6 加標回收試驗

以精密度試驗15%桿菌肽鋅預混劑供試品（批號P120810）鋅測定結果平均值含量6.34%計，準確稱取供試品約80 mg置于100 mL容量瓶中，稱取3份，依次加入1000 μg/mL的鋅標準儲備溶液1.00 mL、2.00 mL、4.00 mL至3份供試品中，按2.2方法操作，制備成3份不同濃度的溶液，每個濃度重復測定3次。計算9次加樣回收率的RSD。

結果見表2。平均回收率為100.1%，RSD=2.0%（n=9）， 結果表明，該方法的回收率良好。

2.7 樣品鋅含量測定

按2.2方法操作，測定規(guī)格為10%與15%的桿菌肽鋅預混劑產品各3批，結果見表3。

3 討論與結論

中國獸藥典中被收錄的桿菌肽鋅預混劑品種，沒有鋅含量測定方法，標準文獻資料中也只有對桿菌肽鋅原藥中鋅含量有測定方法，本實驗室參照USP35版，根據實驗室實際情況經過摸索，建立了原子吸收法測定桿菌肽鋅預混劑中鋅的含量，并對方法進行了線性、精密度、回收率的驗證。

驗證結果表明，該方法在鋅離子濃度為0.25～1.00 μg/mL的范圍內，濃度與吸光值之間具有良好的線性關系，回歸方程為y=0.401x+0.0437 相關系數(shù)r=0.9975，且精密度高、重現(xiàn)性好、平均回收率為100.1% RSD=2.0%。使用該方法測定桿菌肽鋅預混劑中鋅的含量，可獲得準確、可靠的結果。

（編輯：狄慧）

參考文獻：

[1] 中國獸藥典委員會.中華人民共和國獸藥典[S].2001版一部，2010，103.

[2] European Pharmacopoeia 歐洲藥典 （EP） [S].桿菌肽鋅，2011，1443.

[3] USP35，Volume2，桿菌肽鋅，2012，2297-2298.