李大鵬　呂丹　李震等

摘要：目的 設(shè)計(jì)添加谷氨酰胺的血液保存抗凝劑及探討對紅細(xì)胞的影響，總結(jié)其臨床意義。方法 選取標(biāo)本分實(shí)驗(yàn)組A和對照組B，每組均為相對應(yīng)的1～10管，A組抗凝劑為標(biāo)準(zhǔn)枸櫞酸鈉溶液和丙氨酰谷氨酰胺注射液稀釋液，B組抗凝劑為標(biāo)準(zhǔn)枸櫞酸鈉液，比較兩組標(biāo)本在采血后第3、6、9、12d的血K+檢測結(jié)果，并予以統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果 兩組標(biāo)本第3、6、9、12d血K+均高于正常值，A與B組內(nèi)比較均有顯著性差異（P<0.05）；A與B組間比較，第3d檢測值有顯著性差異（P<0.05）。結(jié)論標(biāo)準(zhǔn)枸櫞酸鈉溶液加入丙氨酰谷氨酰胺注射液制成新型血液保存抗凝劑，對紅細(xì)胞抗凝及保護(hù)作用優(yōu)于標(biāo)準(zhǔn)枸櫞酸鈉溶液。

關(guān)鍵詞：血液；抗凝劑；丙氨酰谷氨酰胺；谷氨酰胺；枸櫞酸鈉

枸櫞酸鈉為常用的血液抗凝劑，枸櫞酸鈉、枸櫞酸、無水葡萄糖可制成常用的ACD配方血液保存液。血液抗凝劑是影響采集存儲紅細(xì)胞的主要因素[1-2]，為提高血液抗凝及紅細(xì)胞保存效果，筆者選擇添加谷氨酰胺（glutamine，Gln）方式制成新型血液保存抗凝劑，并通過采集存儲血液中血K+指標(biāo)研究不同抗凝劑對采集紅細(xì)胞影響，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1新型抗凝劑制備 由于Gln較難溶于水，且丙氨酰谷氨酰胺在血液中可迅速分解為丙氨酸和Gln，故添加Gln方式選取丙氨酰谷氨酰胺注射液（四川科倫，50ml：10g），加入0.9%氯化鈉注射液50ml稀釋。

按丙氨酰谷氨酰胺使用時(shí)其在與載體溶液混合液中最大濃度不能超過3.5%的要求，丙氨酰谷氨酰胺注射液稀釋液按1：2比例加入標(biāo)準(zhǔn)枸櫞酸鈉溶液制成新型血液保存抗凝劑。新型抗凝劑按其中標(biāo)準(zhǔn)枸櫞酸鈉溶液與全血1：9體積比進(jìn)行采血，4℃～6℃條件下保存。

1.2新型抗凝劑評價(jià)

1.2.1方法 選擇添加與未添加Gln的血液保存抗凝劑采集血液并進(jìn)行對照比較。

選20只試管均分為A、B組。A組為實(shí)驗(yàn)組，1～10管中分別加入3.8%枸櫞酸鈉溶液0.2ml和丙氨酰谷氨酰胺注射液稀釋液0.1ml；B組為對照組，1～10管分別加入3.8%枸櫞酸鈉溶液0.2ml。采集10名男性無償獻(xiàn)血官兵未抗凝靜脈血，分別對應(yīng)加入A、B兩組1～10試管中，均加入1.8ml，充分搖勻并放置到4℃～6℃冰箱中保存待檢。

采血后第3、6、9、12d，應(yīng)用OlympusPu-2400全自動生化分析儀及其配套試劑，按操作規(guī)程進(jìn)行標(biāo)本血K+測定，正常范圍3.5～5.5mmol/L。

1.2.2統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 檢驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示。選擇SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行處理，組間及組內(nèi)比較采用均數(shù)t檢驗(yàn)，P<0.05為具有顯著性差異。

2 結(jié)果

采血后第3、6、9、12d檢測血K+，A、B兩組標(biāo)本血K+均高于正常范圍。

A、B兩組組內(nèi)不同時(shí)間檢測數(shù)據(jù)均分為①～④組，以（x±s）表示。組內(nèi)均按時(shí)間進(jìn)行①②、②③、③④比較，均存在顯著性差異（P<0.05）（見表1），提示血K+隨標(biāo)本放置時(shí)間延長而不斷升高。

A、B兩組組間均按①～④分別采用兩樣本t檢驗(yàn)（見表1）：①t=3.088、P<0.05，有顯著性差異；②t=0.792、P<0.5，無顯著性差異；③t=0.168、P<0.5，無顯著性差異；④t=0.331、P<0.5，無顯著性差異。提示2種抗凝劑在采集血液3d內(nèi)對紅細(xì)胞影響存在顯著性。

A、B兩組紅細(xì)胞外觀檢測：采血后第16dB組發(fā)生肉眼可見溶血，第19dA組發(fā)生肉眼可見溶血。見表1。

3 討論

枸櫞酸鈉是國際上最通用的抗凝劑，是血液保存液中基本抗凝物質(zhì)，具有抗凝及阻止溶血發(fā)生作用，應(yīng)用十分廣泛[3-4]?？茖W(xué)改良現(xiàn)有血液保存抗凝劑，提高臨床輸血及檢驗(yàn)工作質(zhì)量，成為當(dāng)前重要研究課題[1，5]。

Gln可減少和對抗自由基對機(jī)體組織器官的損傷，提高血漿中谷胱甘肽水平及機(jī)體抗氧化水平[6，7]，其被酶解產(chǎn)生NH4增加紅細(xì)胞膜的流動性及對機(jī)械壓的抗性，減少自由基對紅細(xì)胞膜的損傷而產(chǎn)生保護(hù)作用。為此，本文設(shè)計(jì)添加Gln的新型抗凝劑并選擇紅細(xì)胞外血K+作為評價(jià)指標(biāo)，研究不同抗凝劑對采集存儲紅細(xì)胞的影響。

血液保存液是影響血液采集存儲的主要因素，紅細(xì)胞膜是最易受自由基攻擊的目標(biāo)。隨血液存儲時(shí)間延長，血液中自由基明顯增多，導(dǎo)致細(xì)胞膜脂質(zhì)過氧化，紅細(xì)胞膜過氧化脂質(zhì)顯著增高，紅細(xì)胞膜Na+K+-ATP酶和Ca2+Mg2+-ATP酶活性顯著下降[8]，使 Na+、Ca2+等轉(zhuǎn)運(yùn)失常，紅細(xì)胞內(nèi)Na+、Ca2+含量升高和鉀離子外流，紅細(xì)胞內(nèi)鉀離子降低，其膜上脂蛋白和脂質(zhì)逐漸喪失，紅細(xì)胞內(nèi)2.3二磷酸甘油酸也逐漸降低，紅細(xì)胞逐漸變形且脆性增加易發(fā)生溶血[9-10]，細(xì)胞外血K+成為反映紅細(xì)胞膜穩(wěn)定及代謝程度的重要標(biāo)志，本文A、B兩組組內(nèi)不同時(shí)間檢測血K+結(jié)果證明了這一點(diǎn)。

本文血液采集3d內(nèi)A、B2組組間比較存在顯著性差異（P<0.05），表明新型血液抗凝劑和標(biāo)準(zhǔn)枸櫞酸鈉溶液對紅細(xì)胞保護(hù)作用存在顯著性，新型抗凝劑對紅細(xì)胞保護(hù)作用優(yōu)于傳統(tǒng)抗凝劑；采血后第6、9、12d兩組組間數(shù)據(jù)比較均無顯著性差異（P<0.5），可能與2種抗凝劑均未加入葡萄糖有關(guān)，因保存期內(nèi)全血紅細(xì)胞代謝所需能量主要由葡萄糖提供[11]。

參考文獻(xiàn)：

[1]戴小輝.兩種抗凝劑測定紅細(xì)胞沉降率的結(jié)果對比[J].華西醫(yī)學(xué)，2009，24（11）：3024-3025.

[2]彭春花，王秀華，陳元媛.血凝試驗(yàn)檢驗(yàn)結(jié)果的影響因素分析[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2010，7（16）：1733-1735.

[3]聶成，江榕，王聯(lián)群，等.枸櫞酸局部抗凝在血液濾過治療中的應(yīng)用研究[J].江西醫(yī)藥，2010，46（2）：153-155.

[4]張微，徐國美，劉青寧.不同配方洗滌液對濃縮血小板的洗滌效果研究[J].中國輸血雜志，2010，23（11）：944-946.

[5]陳云慶.血液保存液II在高危出血患者血液透析封管中的應(yīng)用體會[J].吉林醫(yī)學(xué)，2011，32（32）：6773-6774.

[6]熊正英，程春鳳，戰(zhàn)旗.谷氨酰胺及運(yùn)動訓(xùn)練對大鼠血液某些生化指標(biāo)的影響[J].西安體育學(xué)院學(xué)報(bào)，2003，20（3）：48-50.

[7]郭永軍，孔媛媛，關(guān)永東，等.外源性補(bǔ)充谷氨酰胺對危重病患者的影響[J].中華全科醫(yī)學(xué)，2012，10（1）：49，97.

[8]王繹，張斌，李邦翅，等.間歇性低氧及運(yùn)動隊(duì)大鼠紅細(xì)胞膜Na+K+-ATP和Ca2+Mg2+-ATP酶活性的影響[J].武警醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2009，18（7）：597-600.

[9]劉海波.游離血紅蛋白指標(biāo)在懸浮紅細(xì)胞質(zhì)量控制中的應(yīng)用[J].國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2012，33（21）：2639，2667.

[10]王殿昌，王秀英，張秀俊.CPD血液保養(yǎng)液保存全血的生化指標(biāo)動態(tài)觀察[J].實(shí)用藥物與臨床，2005，8（2）：55-56.

[11]崔瑩，吳春雪，楊龍，等.丙氨酰谷氨酰胺對急性肺損傷患者的保護(hù)作用及其機(jī)制初探[J].臨床薈萃，2012，27（4）：298-301.編輯/哈濤