摘要[目的]建立青海不同地區(qū)大黃的HPLC指紋圖譜。[方法]采用HPLC法測(cè)定青海地區(qū)唐古特大黃和掌葉大黃的HPLC指紋圖譜，并對(duì)其進(jìn)行相似度比較。[結(jié)果]青海不同采集地唐古特大黃和掌葉大黃的平均相似度都在90%以上，說明大黃指紋圖譜具有比較好的穩(wěn)定性和重復(fù)性，它們之間既有較好的相關(guān)性，又有區(qū)別。[結(jié)論]采用HPLC法可以鑒別青海的不同大黃，方法簡(jiǎn)便，圖譜重復(fù)性好。

關(guān)鍵詞青海；唐古特大黃（Rheum tanguticum Maxim.ex Balf.）；掌葉大黃（Rheum palmatum L.）；HPLC；指紋圖譜；相似度

中圖分類號(hào)S188文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào)0517-6611（2014）12-03477-02

作者簡(jiǎn)介王寧芳（1964- ），女，陜西華縣人，教授，從事有機(jī)合成及分析研究。

大黃系蓼科多年生高大草本植物，又名火參、金木、破門、綿紋。藏語叫“君木扎”。青海大黃生長(zhǎng)于海拔2 000～3 500 m的高寒地帶，在高山灌叢和山坡草地常見。大黃（RADIX ET RHIZOMA RHEI ）是一味十分重要的中藥，同時(shí)也是藏醫(yī)、蒙醫(yī)常用的良藥。其有效成分主要是蒽醌類衍生物，如大黃素、大黃酚、大黃酸、蘆薈大黃素和大黃素甲醚等，具有瀉熱通腸、涼血解毒和逐淤通經(jīng)等功能[1]。筆者采用高效液相色譜法測(cè)定青海不同產(chǎn)地大黃的指紋圖譜，并對(duì)其進(jìn)行相似度比較，以期為不同大黃的鑒別和質(zhì)量評(píng)價(jià)提供參考依據(jù)。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1研究對(duì)象。不同產(chǎn)地的唐古特大黃（Rheum tanguticum Maxim.ex Balf.）和掌葉大黃（Rheum palmatum L.），見表1～2。

1.1.2主要儀器。美國Waters2695 高效液相色譜儀，購自美國Waters公司；HH26 數(shù)顯恒溫水浴鍋、二極管陣列檢測(cè)器和電子天平，均購自常州國華電器有限公司。

1.1.3主要試劑。無水甲醇為色譜純，購自山東禹王公司；冰醋酸為分析純，購自北京化工廠；重蒸去離子水，實(shí)驗(yàn)室自制。

1.2方法

1.2.1色譜分析條件。Inertsil ODS3分析柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），濃度1%HAcH2O與濃度1%HAcCH3CN梯度洗脫；流速為1 ml/min；柱溫為30 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)為280 nm；參比波長(zhǎng)為380 nm。

1.2.2大黃待測(cè)液的制備[2]。將唐古特大黃粉粹，粉末過20目篩，精密稱量0.500 g分別加40 ml無水甲醇，水浴加熱回流1 h，過濾；殘?jiān)屑?0 ml無水甲醇，繼續(xù)水浴加熱回流1 h，過濾，合并2次濾液。在蒸發(fā)皿中，水浴蒸發(fā)溶劑至干，殘?jiān)屑訜o水甲醇溶解并定容至25 ml，搖勻，通過孔徑為045 μm 、的微孔濾膜過濾，所得濾液為唐古特大黃待檢測(cè)液。同法，可得掌葉大黃待檢測(cè)液。

1.2.3樣品的測(cè)定。取供試品溶液適量，在“1.2.1”色譜條件下進(jìn)樣進(jìn)行分析，記錄色譜圖。

2結(jié)果與分析

2.1唐古特大黃的HPLC指紋圖譜圖1表明，唐古特大黃藥材指紋圖譜具有較好的穩(wěn)定性和重現(xiàn)性，5批唐古特大黃藥材樣品指紋圖譜的特征性和專屬性很強(qiáng)，共有峰穩(wěn)定性很良好，較全面地反映唐古特大黃的化學(xué)信息，可作為唐古特大黃藥材的專屬性指紋圖譜[3]，為青海地區(qū)不同海拔唐古特大黃藥材品質(zhì)提供有效、穩(wěn)定的質(zhì)量評(píng)估依據(jù)。

圖1唐古特大黃的指紋圖譜2.2掌葉大黃的HPLC指紋圖譜從指紋圖譜的峰差異評(píng)價(jià)及整體性評(píng)價(jià)可以看出，各地掌葉大黃之間相似度較高，它們之間既有較好的相關(guān)性，又有區(qū)別（圖2）。

圖2掌葉大黃指紋圖譜特征峰2.3大黃樣品相似度比較由表3可知，不同產(chǎn)地、不同采集時(shí)間的樣品的指紋圖譜的相似度都在90 %以上，說明大黃指紋圖譜具有比較好的穩(wěn)定性和重復(fù)性；采用AFLP分析唐古特大黃掌葉大黃間的親緣關(guān)系，發(fā)現(xiàn)不同種大黃和不同來源的大黃樣品間除了具有共有帶外，還有一些特異帶，說明種間甚至不同來源的樣品間都有一定程度的特異性[4]。

2.4唐古特大黃、掌葉大黃樣品與大黃對(duì)照藥材之間的相似度比較由表3可知，青海不同采集地唐古特大黃和掌葉大黃的平均相似度都在90%以上，說明大黃指紋圖譜具有比較好的穩(wěn)定性和重復(fù)性，它們之間既有較好的相關(guān)性，又有區(qū)別。

由于陸生植物在生長(zhǎng)過程中，一方面從大氣中吸收所需物質(zhì)，另一方面也必須從土壤中吸收礦物元素，由于土壤中所含有的元素成分的差異以及植物本身對(duì)元素吸收選擇力的不同，植物對(duì)礦質(zhì)養(yǎng)分的吸收具有選擇性、累積性、基因型差異[ 5]，使得青海不同種大黃中各種礦物質(zhì)元素含量具有明顯的差異性[6]；青海主要生長(zhǎng)于海拔2 000～4 200 m的林緣、林下、溝谷灌叢及草地，大黃的生長(zhǎng)因海拔增高、紫外線強(qiáng)烈、晝夜溫差大而生長(zhǎng)緩慢，但主要成分的積累相對(duì)增高而質(zhì)量偏好；相反，低海拔地區(qū)因環(huán)境優(yōu)異，生長(zhǎng)快，主要成分積累都相對(duì)偏低而質(zhì)量偏差[7]。

3討論

從大黃樣品的高效液相色譜指紋圖譜中可以看到，不同產(chǎn)地、不同采集時(shí)間的樣品的指紋圖譜的相似度都在90%以上，這說明大黃指紋圖譜具有比較好的穩(wěn)定性和重復(fù)性；從指紋圖譜的峰差異評(píng)價(jià)及整體性評(píng)價(jià)可以看出，各地樣品之間相似度較高，2種大黃樣品之間既有較好的相關(guān)性，又有區(qū)別。采用HPLC法測(cè)定青海不同產(chǎn)地的不同大黃，方法簡(jiǎn)便，圖譜重復(fù)性好，為青海大黃藥材質(zhì)量控制提供參考。

參考文獻(xiàn)

[1] 曹緯國，劉志勤，紹斌，等.青海省道地藥材唐古特大黃中4 種蒽醌衍生物的含量測(cè)定[J].西北植物學(xué)報(bào)，2004，24（11），2140-2142.

[2] 陳斌 ，蔡寶昌，潘揚(yáng)，等.不同產(chǎn)地掌葉大黃HPLC指紋圖譜的比較[J].中草藥，2003，34（5）：457-460.

[3] 李錦萍 ，陳桂琛 ，紀(jì)蘭菊，等.青海地區(qū)唐古特大黃藥材HPLC 指紋圖譜研究[J].中草藥，2006，37（5）：762-765.